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LC-1ScFv偶联GFP基因的构建及表达: 2005年; 从具有高效蛋白表达及活力的抗肺癌杂交瘤单克隆细胞株(LC-1)抽提总RNA,反转录成cDNA.根据肿瘤单链抗体(ScFv)基因设计引物,用多聚酶链式反应(PCR)克隆出抗体的重链和轻链基因,并通过重叠延伸PCR法将重链基因与修饰后的轻链基因连接为单链抗体基因.改造后的ScFv与绿色荧光蛋白(GFP)基因连接,构建表达质粒ProGFP-ScFv,随后转化大肠杆菌JM109,用诱导剂IPTG进行诱导表达.表达产物采用Ni-NTA树脂进行纯化,进行SDS-PAGE电泳分析其纯度.酶联免疫检测(ELISA)表明该蛋白已具有抗体活性.395nm激光激发显示绿色荧光,表明目的基因在原核生物中存在表达.; 龚兴国于红徐飞虎谭皓思; 关键词：绿色荧光蛋白单链抗体原核表达系统

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谭皓思