蒙荣森
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 纳米血管生成素-2小干扰RNA质粒制备及功能研究被引量：3
- 2005年
- 【目的】制备血管生成素-2小干扰RNA(Ang-2siRNA)质粒纳米微粒,并观察其基因转染能力和基因沉默效果。【方法】应用分子克隆的方法构建Ang-2siRNA质粒,将其与聚乳酸、O-羧甲基壳聚糖用水/油/水(W/O/W)双乳化溶剂蒸发法制备纳米微球,扫描电镜观察其形态和粒径。然后转染原代人脐带静脉内皮细胞, 观察纳米Ang-2siRNA微粒干扰Ang-2基因表达的效果及其细胞保护功能。【结果】扫描电镜观察到Ang- 2siRNA纳米微球呈球形和椭球形,粒径150—200 nm,大小分布均匀,包封完整,分散性良好。有较强转基因能力,良好的RNA干扰效果和血管内皮细胞保护功能。【结论】成功制备纳米Ang-2siRNA微粒。并证实其载基因能力和RNA干扰效果,对血管内皮细胞损伤因素有良好保护作用,为进一步研究心肌梗死的血管修复机制奠定了坚实的基础。
- 陈波熊利华华平廖洪映殷香保汤志华蒙荣森邓伟
- 关键词：ANG-2SIRNA纳米微粒基因载体
- 人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达被引量：1
- 2005年
- 【目的】克隆人类抗凋亡基因 bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL 的效果,并比较不同转染方法对 bcl-xL 表达的影响。【方法]】RT-PCR 法从人肝脏组织获取 bcl-xL cDNA,连接至pTargeT^(TM)载体,并亚克隆至真核表达载体 pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR 和免疫细胞化学染色法检测 bcl-xL mRNA 和 bcl-xL 蛋白的表达。【结果】获取的 bcl-xL cDNA 测序正确,成功克隆真核表达质粒 pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×10^(12)pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA 和 bel-xL 蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】成功获取人类 bcl-xL基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性 bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想。为 bcl-xL 基因治疗缺血性心脏病提供实验基础。
- 廖洪映张惠忠陈波华平殷香保蒙荣森刘启才熊利华
- 关键词：克隆基因疗法
