蒋少华
- 作品数：15 被引量：12H指数：2
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委科技攻关项目安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 具有分子内亲合力效应的人IgA免疫球蛋白结合分子
- 本发明公开了具有分子内亲合力效应的人IgA免疫球蛋白结合分子及其制备方法和应用。本发明还公开了该人IgA结合分子的编码基因、基于噬菌体分子进化的人IgA结合分子的制备方法及其应用。本发明公开的人IgA结合分子，尤其是人I...
- 潘卫曹洁温宗梅陈秋莉蒋少华王锦红戚中田
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- 带有进化免疫球蛋白结合分子的HIV蛋白酶底物分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型HIV蛋白酶切割模型的体系构成、制备方法及应用。本发明公开一种重组的带有进化免疫球蛋白结合分子的HIV蛋白酶底物分子，它是SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其保守性变异蛋白。本发明还公开了上述...
- 潘卫贾建安周波蒋少华陈秋莉曹洁赵平潘欣温宗梅戚中田
- 文献传递
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
- HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的分段表达及免疫原性分析被引量：1
- 2008年
- 目的研究对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型HXB2株调控蛋白Tat原核表达产生影响的区域和Tat蛋白重要的抗原表位。方法用PCR方法获得Tat(1-48aa)、Tat(22-72aa)和Tat(38-101aa)DNA片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa),并转入E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物。采用间接ELISA方法用兔抗pET32a-Tat抗血清对三种肽段进行免疫原性分析。结果成功构建了pET32a-Tat(1-48aa)、pET32a-Tat(22-72aa)和pET32a-Tat(38-101aa)质粒,分别表达出相对分子质量(Mr)为23×103、23×103和25×103的融合肽段,其浓度分别为4.26、3.35和5.11mg/ml。间接ELISA结果表明三种融合肽段与兔抗pET32a-Tat抗血清均呈特异性结合反应,其抗体滴度分别为1:128000、1:32000、1:64000,而抗血清与pET32a蛋白仅有较弱结合。结论半胱氨酸富集区(22-37位氨基酸)对Tat蛋白的原核表达有较显著影响;Tat蛋白的N端区、碱性区和C端区是其重要的抗原表位,其中N端区的免疫原性最强。
- 陈璐潘卫曹洁卢海妹何俊蒋少华唐萍李存枚廖文婷邓松华
- HIV-1 Gag蛋白P2/NC蛋白酶切割位点序列的随机化及噬菌体展示被引量：2
- 2005年
- 目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点。应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布;10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合。结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础。
- 周波贾建安温宗梅邓松华蒋少华陈秋莉潘欣潘卫
- 关键词：HIV-1蛋白酶随机化
- IgA亲和体随机组合噬菌体文库的构建和体外分子进化
- 2010年
- 目的构建IgA亲和体随机组合文库并进行体外分子进化,研究IgA亲和体分子结构与功能的关系。方法基因合成两个IgA亲和体片段。3′端引入3个随机连接肽序列随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示随机组合分子文库。以人IgA为靶分子对该文库进行4轮亲和筛选。制备阳性筛选克隆的单克隆噬菌体,用ELISA鉴定IgA结合活性。结果成功构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合分子文库,库容量为3.4×107,滴度为1.6×1012TU/L,阳性克隆占79%以上,序列分析IgA亲和体随机连接,随机连接肽序列呈随机分布。在人IgA分子诱导的分子进化过程中,展示多个IgA亲和体串联体的噬菌体比例明显增加,获得3种新型IgA亲和体组合分子结构形式:IgA亲和体二联体、三联体和四联体。ELISA结合实验表明IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力远大于单体和二联体。结论通过构建IgA亲和体噬菌体展示随机组合文库和体外分子进化的方法,获得多种新型组合分子,其中IgA亲和体三联体和四联体的IgA结合能力明显增加,提示通过有效的分子进化成功地获得了高亲和力的IgA结合分子。
- 温宗梅曹洁陈秋莉贾建安蒋少华潘卫
- 关键词：肽库串联重复序列分子进化
- 噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库的构建被引量：1
- 2006年
- 目的构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,研究IgA结合分子结构与功能的关系。方法基因合成IgA亲和体ZA1、ZA2片段。片段两端引入Kpn I酶切位点,3′端引入随机连接肽序列,Kpn I酶切,随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S的Kpn I克隆位点上,转化大肠杆菌TGI,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示随机组合文库。结果基因合成IgA亲和体;构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,容量为3·4×107,滴度为1·6×1012TU/L;文库中含79%以上的阳性克隆;序列分析显示组合文库由ZA1、ZA2随机组合而成,连接方式符合随机连接的特点,各亲和体之间连接肽序列也呈随机分布。结论合成IgA亲和体,构建噬菌体展示IgA亲和体随机组合文库,该文库库容量、多样性和随机性可满足体外分子进化研究的要求。
- 温宗梅潘卫张玉侠周波潘欣陈秋莉周霞贾建安蒋少华邓松华
- 一种进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及应用
- 本发明涉及新型进化免疫球蛋白结合分子、其制备方法及其应用。本发明公开了一种分离的进化免疫球蛋白结合分子，它是具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白、或其具有免疫球蛋白结合活性的保守性变异蛋白。本发明还公开了该免...
- 潘卫蒋少华徐容贾建安沈毅珺杨华王锦红陈秋莉何俊陈璐
- 文献传递
- 进化免疫球蛋白结合分子LD5的原核表达、纯化及结合活性被引量：1
- 2007年
- 目的对新型进化免疫球蛋白(Ig)结合分子LD5进行原核表达和纯化,并鉴定其结合活性。方法将LD5基因片段克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌后,IPTG诱导表达。以8mol/L尿素裂解菌体后,上清经Ni2+-NTA柱纯化,并对纯化蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。以ELISA和Dot blot对LD5蛋白结合IgG、IgM活性进行鉴定。结果LD5分子在大肠杆菌中获得成功表达,表达的融合蛋白相对分子质量为59000。Western blot表明纯化的LD5蛋白能特异结合IgG。ELISA结果显示,LD5在结合IgM上较SpA具有明显的优势。结论LD5分子在大肠杆菌中已成功表达,纯化的LD5蛋白保留了天然Ig结合分子的结合活性。
- 蒋少华徐容何俊陈璐卢海妹贾建安陈秋莉潘卫
- 关键词：原核表达结合活性
- HIV-1 HXB2株蛋白酶在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(Protease,PR),用于对HIV-1GagP2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选。方法根据HIV-1HXB2株PRDNA序列设计引物,用重叠延伸PCR方法合成使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体进行测序。将HIV-1PRDNA克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE鉴定,并用HIV阳性血清进行免疫反应性的鉴定。结果合成的使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经测序显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致。所构建的HIV-1PR原核表达质粒pQE30-pr,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为14000的HIV-1PR蛋白,纯化的目的蛋白浓度为7.74mg/ml。ELISA检测该蛋白与HIV阳性血清呈特异性反应。结论已成功合成并克隆了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1PR的DNA编码序列,经表达及纯化的HIV-1PR蛋白具有免疫学特性。
- 贾建安周波钱宝华蒋少华陈秋莉潘欣赵平任浩温宗梅邓松华卢洪洲潘卫
- 关键词：人免疫缺陷病毒蛋白酶基因表达大肠杆菌HIV-1
