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王颖彬: 作品数：30 被引量：162H指数：8; 供职机构：厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心更多>>; 发文基金：福建省科技重大专项教育部跨世纪优秀人才培养计划教育部科学技术研究重点项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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热休克蛋白90与戊型肝炎病毒重组衣壳蛋白P239相互作用的初步研究被引量：1: 2008年; 目的对前期研究中所筛选出的能够与戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）重组衣壳蛋白颗粒P239存在特异性的相互作用的蛋白进行分析验证。方法使用pull-down、MALDI-TOF-MS、免疫共沉淀技术及免疫荧光技术对与P239有潜在相互作用的蛋白进行鉴定和进一步分析。结果MALDI-TOF-MS及免疫共沉淀技术，均表明该蛋白为热休克蛋白90（HSP90）并与P239相互作用。随后，对P239进入细胞的过程中胞内HSP90蛋白量及其分布的变化做了初步研究。发现虽然HSP90在蛋白总量上并没有发生明显的变化，但其定位却伴随着P239在胞内的迁移发生了由细胞膜向细胞核核周的转移。结论HSP90可能参与了P239入胞后的转运并介导了HEV入胞后向效应细胞器的转运，为研究HEV的感染机制及对HEV的预防和控制提供了有益的线索。; 郑子峥苗季吴小成何水珍唐明孙媛媛王颖彬杜海莲张军夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒热休克蛋白90 蛋白相互作用

戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体的相互作用结构域被引量：13: 2004年; 为了探讨戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体形成的关键区域和相互作用结构域 ,以及二聚体形成与主要天然中和表位的形成之间的关系 ,通过末端缺失、定点突变技术研究戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的aa394_aa6 0 6片段NE2的聚合现象 ,发现其C端的aa5 97_aa6 0 2 (AVAVLA)疏水区是该片段同源聚合的核心区域 ,提高该区域氨基酸的亲水性将妨碍聚合现象的发生 ;半胱氨酸化学交联实验表明NE2形成同源二聚体时 ,aa5 97在空间位置上相接近 ,处于可生成化学键的距离 ,提示所处区域为疏水聚合的作用结构域 ;通过Blast程序估算核心区域的天然突变率 ,发现其疏水性高度保守 ;N端缺失实验表明 ,至少 6 5个氨基酸既不影响同源聚合也不直接参与主要的天然中和表位的形成 ,但可协助中和表位构象的形成 ,而这种协助作用可被ORF2的末端肽段所代替。aa5 97_aa6 0 2 (AVAVLA)疏水区为戊肝病毒衣壳组装的第一步骤的核心区域 ,并与重要的天然中和表位的形成直接相关 ,从而为戊肝病毒疫苗的研究提供更详细的信息。; 李少伟何志强王颖彬陈毅歆刘如石林鉴顾颖张军夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒基因突变

杆状病毒用于哺乳动物细胞快速高效表达外源基因的研究被引量：11: 2003年; 现已发现杆状病毒可进入某些培养的哺乳动物细胞 ,这提示可将杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体。对杆状病毒转移载体的改造及对哺乳动物细胞的基因转移方式进行了进一步的研究。以绿色荧光蛋白基因为报告基因 ,利用Bac to Bac系统构建了分别含有正向和反向CMV启动子表达盒的两种重组杆状病毒。可观察到CMV启动子在Sf9细胞中可启动报告基因的表达 ,但表达效率较低。用重组杆状病毒感染后Sf9细胞的培养上清直接与HepG2细胞作用 ,以流式细胞术检测基因转移效率及荧光表达强度 ,发现这两种病毒在相同的感染复数下对HepG2细胞具有相似的基因转移及表达效率。同时 ,利用流式细胞术进一步研究了直接使用重组杆状病毒感染 4d后Sf9细胞的培养上清对哺乳动物细胞进行基因转移的方法。通过对HepG2细胞的实验结果显示 ,将带毒Sf9细胞培养上清 (1.2× 10 7PFU mL)用哺乳动物细胞培养基 1倍稀释后 ,37℃下孵育靶细胞 12h(moi=5 0 ) ,可达到较高的基因转移及表达效率 ,同时不会对细胞造成明显损伤。将重组杆状病毒与脂质体和逆转录病毒这两种系统对HepG2及CV1细胞的基因转移效率进行了比较 ,结果发现在同样未经浓缩等特殊处理的条件下重组杆状病毒对这两种细胞的基因转移效率是最高的。因此可以认为 ,; 程通许辰煜王颖彬陈敏吴婷谢小燕张军夏宁邵; 关键词：杆状病毒哺乳动物细胞外源基因脂质体重组逆转录病毒

靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的人工miRNA的构建与鉴定被引量：1: 2010年; 趋化因子CCR5是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一,通过抑制CCR5的表达可以在一定程度上阻断HIV-1的复制进程.miRNA介导的RNA干扰相比经典的siRNA在应用中具有更多的特点.本研究的目的是构建可特异有效靶向CCR5的人工miRNA元件.本研究以CCR5基因序列为模板设计了14个miRNA靶序列,以天然miR-30a为基础骨架通过靶序列区替换构建人工miRNA元件.通过将miRNA表达质粒与携带靶序列区的报告质粒的共转染抑制实验检测不同miRNA的抑制效率,结果显示miCCR-13A具有较好的抑制效率和特异性.进一步将miCCR-13A表达载体转染CCR5阳性的HIV-1受体细胞株TZM-b1,RT-PCR检测显示miCCR-13A可在细胞中获得有效表达,同时应用免疫流式细胞术检测显示在miCCR-13A转染细胞相比对照细胞的CCR5蛋白的检测活性明显降低.进一步的研究显示miCCR-13A在细胞中不会影响细胞活性和干扰素效应相关基因osa1和stat1 mRNA水平,具有良好的特异性.本研究获得的可特异靶向CCR5的人工miRNA元件可为进一步的抗HIV-1研究提供重要基础.; 王颖彬程通魏丽华张涛梁露萍夏宁邵; 关键词：CCR5 RNA干扰

戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位间的构象诱导被引量：4: 2004年; 重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394～606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,8H3对8C11和13D8均不能阻断,而8C11非但不能阻断8H3,反而显著增强了8H3与抗原的结合。用生物传感器进行的抗体与抗原结合的动力学分析也证实了这一现象。这些结果提示,在NE2上8H3表位区域受到抗原上某些结构的掩盖,而8C11与NE2的结合引起了抗原空间结构的改变,导致了掩盖8H3表位的结构的去除和8H3表位的充分暴露。免疫捕获RT PCR发现,8C11同样可以显著增强8H3对天然HEV病毒的捕获能力,提示这种结合诱导的衣壳蛋白空间构象改变在天然HEV病毒颗粒上同样存在。; 张军顾颖欧山海王颖彬叶祥忠林鉴葛胜祥夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白中和表位构象单克隆抗体

重组人类T淋巴细胞白血病病毒抗原及双抗原夹心法ELISA抗体诊断试剂盒的研制被引量：7: 2004年; 为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV Ⅰ和HTLV Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性。将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV Ⅰ型血清和19份HTLV Ⅱ型血清均能100%检出,而在5065份各种阴性血清中特异度为99 94%。用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV Ⅰ参比血清、17份HTLV Ⅱ参比血清和1024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV Ⅰ型血清和HTLV Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂。而GeneLabs试剂对HTLV Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检。另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂。这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂。; 王颖彬张军林长青徐颖潇罗文新吴婷彭耿夏宁邵; 关键词：人类T淋巴细胞白血病病毒 HTLV 双抗原夹心法艾滋病毒

人类T淋巴细胞白血病病毒流行区无偿献血人群筛查研究被引量：2: 2006年; In order to evaluate the blood screening of human T-lymphotropic virus(HTLV) infection in endemic regions in China,a total of 32 767 voluntary blood donors in Xiamen during February 2004 to February 2005 were tested for anti-HTLV Ⅰ/Ⅱ using an ELISA kit.Those repeatedly positive samples were further confirmed by Western blot and PCR.Thirteen donors were positive for antiHTLV by ELISA and 7 among them were confirmed by Western blot,while one was doubtful.HTLV I env gene fragments from four confirmed samples were amplified successfully by PCR.Phylogenetic analysis showed that they were all grouped into subtype C.None of the seven confirmed donors came from Xiamen City,but from other areas of Fujian Province.Five of these 7 donors came from the coastal area of Fujian Province,while the other two came from inland area.; 陈长荣张军谢金镇张永昌王颖彬; 关键词：人类T淋巴细胞白血病病毒无偿献血者

颗粒化重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其抗原性与免疫原性被引量：37: 2004年; 过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋白HEV 2 3 9在体外可以形成颗粒性抗原。HEV 2 3 9抗原颗粒与戊肝患者血清反应性良好 ,对中和性单克隆抗体 8C11的反应性与NE2抗原相当 ,而对另一中和性单克隆抗体 8H3的反应性较NE2抗原有显著提高 ,表明HEV 2 3 9抗原颗粒具有比NE2更好的抗原性。纯化后的HEV 2 3 9抗原颗粒直径约为 15～3 0nm。铝佐剂吸附的HEV 2 3 9免疫Balb c小鼠的半数有效剂量 (ED5 0 )在 0 0 8～ 0 2 5μg之间 ,而同样以铝佐剂吸附的NE2抗原 60 μg剂量免疫的抗体阳转率仅 2 5% ,表明HEV 2 3; 何志强张军李少伟林鉴刘如石陈毅歆王颖彬夏宁邵; 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达抗原性免疫原性

杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究被引量：12: 2004年; 研究已证实杆状病毒可进入某些哺乳动物细胞 ,这提示了可将重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体。利用已构建的重组杆状病毒BacV CMV EGFPA ,以含病毒的Sf9细胞培养上清同时孵育多种哺乳动物细胞 ,利用流式细胞术检测报告基因在不同细胞株中的转移效率及表达效率。共使用了 2 0种哺乳动物细胞株 ,其中有 12种人类组织细胞 ,7种小鼠组织细胞 ,1种猴组织细胞。实验结果显示携带CMV启动子的重组杆状病毒可有效进入多数哺乳动物细胞 ,其中对人、猴来源细胞的基因转移效率显著高于对鼠源细胞 ,对贴壁细胞的基因转移效率显著高于对悬浮细胞。同时 ,通过脂质体LipofectAMINE将携带有CMV启动子和EGFP基因的哺乳动物细胞表达质粒pCDNA3 1 EGFP分别转染部分特别是被认为杆状病毒进入能力较低的细胞株 ,结果显示CMV启动子在这些细胞中均可有效引导EGFP基因的表达 ,因此认为携带了CMV启动子的重组杆状病毒对不同哺乳动物细胞基因转移效率能基本反映出杆状病毒对不同种哺乳动物细胞的进入能力。通过综合比较携带CMV启动子的杆状病毒对不同种属及组织来源细胞的基因转移及表达效率 ,可看出杆状病毒对灵长类动物贴壁细胞的基因转移及表达效果是较好的。; 许辰煜程通卢五迅陈敏吴婷王颖彬张军夏宁邵; 关键词：杆状病毒哺乳动物细胞基因转移

SARS冠状病毒核衣壳(N)蛋白不同区域的原核表达被引量：5: 2005年; 利用大肠杆菌表达系统对SARS冠状病毒的核衣壳(N)蛋白全长及N末端或/和C末端缺失突变体进行了表达,共表达了39个重组蛋白,表达量在15%～30%之间。分别利用电洗脱或金属鳌合介质纯化重组蛋白,用蛋白印迹实验检测纯化蛋白对SARS病人恢复期血清的反应性,结果发现全长N蛋白活性最好,其余的末端缺失蛋白均无法达到同一活性水平。由此说明N蛋白的完整性对于其优势表位的充分暴露是必要的。; 林鉴葛胜祥王颖彬罗文新吴婷李少伟程通张军夏宁邵; 关键词：SARS冠状病毒 SARS病人 N蛋白表位核衣壳缺失突变体

王颖彬

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