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王玉坤: 作品数：16 被引量：104H指数：6; 供职机构：沈阳农业大学更多>>; 发文基金：辽宁省自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划辽宁省教育厅高校重点实验室项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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玉米弯孢菌叶斑病菌ELISA检测方法的建立被引量：2: 2008年; 利用玉米弯孢菌叶斑病病原菌菌丝蛋白作为抗原,制备了该病原菌菌丝蛋白的多克隆抗体,建立了检测玉米弯孢菌叶斑病菌的间接ELISA方法。结果表明,玉米弯孢菌抗血清的效价为1∶32 000;最佳抗原、抗体工作浓度分别为5μg/m l和1∶2 000;在最佳抗原抗体工作浓度下,理想包被液为碳酸盐缓冲液(pH值9.6),包被时间为4℃包被过夜;抗原抗体最适竞争反应时间为37℃下1 h;灵敏度为0.02μg/m l,此抗体可以与弯孢菌发生特异性反应,而与其他10种供试病原真菌的菌丝蛋白均呈阴性反应。; 刘卉秋吴素文曹远银王玉坤孙芳; 关键词：玉米弯孢菌叶斑病玉米弯孢菌多克隆抗体 ELISA

岷江百合离体培养快繁体系建立被引量：4: 2009年; 以岷江百合(Lilium regale)为试材,以MS培养基为基础培养基,附加不同种类和浓度的植物生长调节物质(6-BA,NAA,IBA)诱导丛生芽及再生植株。结果表明:采用先用75%的酒精浸泡20 s,再用0.1%Hgcl2浸泡6 min的灭菌方法最为有效,芽增殖最适培养基为MS+6-BA3 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖30 g+琼脂7.0 g,可培养出大量具有分化能力的不定芽,芽增殖倍数是最高的。在1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA0.01 mg/L上生根质量好,在岷江百合整个培养过程中需要光照,在河沙∶珍珠岩∶草炭土=1∶1∶1基质上,移栽成活率高,可达92%。; 陈丽静朱首名张君张丽王玉坤李慧男马慧; 关键词：岷江百合离体培养快速繁殖

南、北五味子RAPD-SCAR鉴别研究被引量：7: 2011年; 目的:为准确鉴别南五味子和北五味子寻找一种新的鉴别手段。方法:采用RAPD-SCAR技术对南、北五味子基因组DNA进行PCR扩增。结果:100条RAPD引物中筛选出2条条带清楚、重复性好的RAPD引物能够区分南、北五味子,并将其转化为SCAR标记。结论:RAPD-SCAR技术是在分子水平上鉴别南、北五味子的一种行之有效的方法。; 陈丽静齐欣王玉坤张丽郭志富林景卫宋宇宁钟鸣; 关键词：RAPD标记 SCAR标记中药鉴定

黄花马蹄莲离体快繁技术研究被引量：5: 2010年; 以黄花马蹄莲的球茎和叶片为外植体,以MS培养基为基础培养基,附加不同种类和浓度的植物生长调节物质(6-BA、NAA和IBA)诱导丛生芽及再生体系建立。结果表明:采用75%的酒精浸泡20s,再用0.1%HgCl2球茎浸泡8min、叶片4～6min的灭菌方法最为有效,诱导球茎分化最适培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L,诱导叶分化最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,芽增殖最适培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g+琼脂7.0g,在1/2MS+NAA0.1mg/L+IBA0.01mg/L上生根质量好,在珍珠岩:蛭石:草炭土:河沙(2:2:4:1)基质上,移栽成活率高,可达97%。; 张丽王玉坤马慧郭志富钟鸣陈丽静李浩戈; 关键词：彩色马蹄莲球茎叶片不定芽离体快繁

食源性真菌毒素检测技术研究进展被引量：13: 2011年; 本文分析了真菌毒素致病机理及危害,评述了真菌毒素检测技术与方法,了解和掌握了真菌毒素检测技术研究的进展,阐述了加强我国真菌毒素检测技术研究的重要性,为建立准确、快速、简便的检测技术体系提供了依据。; 马惠蕊王玉坤刘淑艳蒋丹宋慧君曹远银; 关键词：真菌毒素致病机理免疫检测

辣椒褐斑病菌分生孢子产生条件初探被引量：6: 2010年; The sporulation conditions of Cercospora capsici were tested with physical and chemical methods.Conventional and particular media,ultraviolet radiation and different treatments on mycelia suspension were applied and studied.It was found that C.capsici could produce conidia in the media of corn leaf powder agar and pepper leaf powder agar.The numbers of conidia produced in the two kinds of botanical media were 24 000 and 35 000 spores/mL,respectively.Compared with those isolated from the leaves,the conidia produced in the botanical media were more slender and pointed in morphology.; 孙俊刘志恒黄欣阳杨红王玉坤; 关键词：褐斑病菌辣椒生产分生孢子生条尾孢菌

北五味子快繁体系的建立被引量：18: 2011年; 目的探究一种北五味子快速繁殖的方法。方法通过正交试验对北五味子的组织培养进行研究,得出北五味子的快速繁殖的最适培养基。结果在MS培养基上附加NAA 0.3 mg/L+ZT 0.1 mg/L+6-BA 1.5 mg/L时芽的增殖效果最好;而附加NAA 0.2 mg/L时,生根效果最佳。最适培养条件为温度25℃、光照强度为2 000 lx,光周期12 h。结论本研究所得最适培养基以及培养条件可用来提高北五味子产量及质量。; 陈丽静齐欣王玉坤张丽马慧郭志富宋宇宁; 关键词：北五味子快繁正交试验

新铁炮百合离体培养的生理生化变化初探被引量：2: 2011年; 以离体培养不同时间的新铁炮百合新品种"沈香一号"鳞茎为材料,在MS+6-BA0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L和MS无激素培养基条件下,测定并分析激素对新铁炮百合生理生化特性的影响。结果表明:激素处理的新铁炮再生苗中可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的变化趋势较大,适宜的激素处理能促进可溶性糖和淀粉含量的相互转变,明显增加新铁炮百合组织中过氧化物歧化酶(SOD)含量和降低丙二醛(MDA)含量;在不定芽形成过程中,激素处理可以增强百合分化和脱分化过程中的蛋白和糖代谢,还会提高组织抗逆性。; 陈丽静孙春玉马慧陶承光阮燕晔李天来王玉坤; 关键词：新铁炮百合鳞茎激素生理生化特性

玉米赤霉烯酮液相芯片定量检测方法的研究: 2011年; 建立玉米赤霉烯酮（ZEN）液相芯片定量检测方法。采用间接竞争法原理和液相芯片技术平台,选用ZEN多克隆抗体对ZEN定量检测方法进行探索。首先将ZEN-BSA与36﹟微球偶联,同时加入待检的游离的ZEN小分子和其标记有生物素的ZEN多克隆抗体,偶联抗原和目标抗原竞争结合生物素标记抗体,通过报告分子SA-PE在532nm波长的激光下,即可检测出报告分子发出的荧光强度,荧光强度与待检ZEN的量成反比。通过优化液相反应体系中ZEN多克隆抗体浓度以及抗原抗体孵育时间,建立了ZEN液相芯片定量检测方法。结果表明：本研究建立的ZEN液相芯片定量检测方法,采用的偶联抗原为ZEN-BSA,偶联量为100μg。ZEN多抗临界饱和浓度为10μg.mL-1,偶联抗原和抗体最佳孵育时间为15h。建立的标准曲线线性方程为y=0.0004x＋0.0013（R2=0.9988）,以国际通用的IC50作为衡量标准,其最低检出浓度为3.25ng.mL-1,线性范围为0.05~10ng.mL-1。建立的ZEN液相芯片检测方法,快速、灵敏、简便、适用于大量样本的检测。; 宋慧君王玫于珂马惠蕊王玉坤曹远银; 关键词：玉米赤霉烯酮液相芯片技术

一种灭多威残留快速检测ELISA试剂盒: 本发明公布了一种灭多威残留的快速检测ELISA试剂盒，属于酶免疫分析技术领域中所创立的一种新的快速测定方法。本发明克服了灭多威理化分析方法操作复杂、检测成本高及速度慢等缺点，能够准确快速地检测水和土壤等样品中地灭多威残留...; 曹远银王玉坤王菡; 文献传递