王沂
- 作品数：19 被引量：39H指数：4
- 供职机构：河北联合大学附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省青年科技基金天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人TRAF3IP3基因剪接异构体2的克隆表达和生物信息学分析
- 2015年
- [目的]克隆、原核表达并纯化人类TRAF3IP3基因剪接异构体2(TRAF3IP3iso2),对TRAF3IP3iso2蛋白进行生物信息学分析。[方法]从人骨髓单个核细胞c DNA中扩增TRAF3IP3iso2开放阅读框区,双酶切连入原核表达载体p ET-28a(+),重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达效果,Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白;根据测序结果对TRAF3IP3iso2蛋白进行生物信息学分析。[结果]成功克隆了人类TRAF3IP3iso2编码区并构建了原核表达载体p ET-28a(+)-TRAF3IP3iso2,在大肠杆菌中诱导表达、纯化获得了相对分子量约22.7k Da的融合蛋白;生物信息学分析显示TRAF3IP3iso2蛋白二级结构以α螺旋为主,无TRAF3IP3iso1蛋白的跨膜区结构。[结论]证明了人类TRAF3IP3iso2的存在,为TRAF3IP3功能的研究提供了实验依据。
- 王沂杨文思赵俊暕石峻戚晓渊郑永强牛艳艳王洋
- 关键词：剪接异构体原核表达生物信息学
- 蓝氏贾第鞭毛虫α-7．1、α-11贾第素的原核表达及抗原活性鉴定被引量：8
- 2012年
- 目的原核表达蓝氏贾第鞭毛虫的α-7.1、α-11贾第素蛋白。方法经RT-PCR获得α-7.1、α-11贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-7.1及pET-28a(+)-α-11,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-7.1和pET-28a(+)-α-11,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约43kD和35kD的位置分别出现目的蛋白条带,与理论值相符;通过相应α-7.1、α-11贾第素抗血清的Westernblot证实两种贾第素重组蛋白的抗原活性良好;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-7.1、α-11贾第素融合蛋白。结论成功地克隆、表达并纯化了具有良好抗原活性的α-7.1、α-11贾第素蛋白。
- 王洋杨志宏王沂曹蕾余源陈阳王卫亮慈雅丽田喜凤
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫原核表达
- C2株蓝氏贾第鞭毛虫TCTP基因的克隆、表达和序列分析（英文）
- 2015年
- 目的克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)编码区,对其进行生物信息学分析和原核表达。方法根据WB株贾第虫TCTP编码区序列设计引物,以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得TCTP编码区片段,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物,采用Ni-NTA经亲和层析纯化重组蛋白。同时根据测序结果分析C2株贾第虫TCTP蛋白结构特征和进化关系。结果克隆了包含酶切位点全长470bp的C2株贾第虫TCTP编码区,构建了原核表达载体pET-28a(+)-TCTP,在Rosetta(DE3)中表达、纯化得到了相对分子量约18.5kDa的融合蛋白,与预期相符;测序结果显示C2株贾第虫TCTP序列与WB株相同,生物信息学分析显示贾第虫TCTP蛋白虽然序列长度较其它物种更短但与裂殖酵母TCTP空间结构相似,均由4个β折叠和3个主要的α螺旋组成,位于序列中部的不规则环状结构更小,仅9个氨基酸残基组成,在进化上与其它真核生物亲缘关系较远。结论成功克隆表达了贾第虫TCTP,为TCTP功能及贾第虫致病机制的研究提供了实验依据。
- 王沂余源田喜凤李冀楮晗王洋
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫原核表达
- TRAF4的结构与生物学功能被引量：4
- 2015年
- TRAF(TNF receptor associated factor)家族蛋白是一类具有相同C末端保守结构域的细胞内接头蛋白,能够与包括TNF受体在内的多种受体蛋白相互作用传递信号并因此得名,目前已经发现了7种TRAF家族蛋白。TRAF4是TRAF家族蛋白中最古老的成员之一,最早在乳腺癌的转移淋巴结中发现,在多种实体肿瘤组织中存在高表达和亚细胞定位的异常。与其他TRAF家族蛋白主要参与免疫和炎症反应不同,TRAF4在免疫中的作用非常有限,目前其已知功能主要体现在胚胎发育、细胞极性、凋亡以及活性氧生成调节等方面。
- 王沂赵俊暕韩晓燕王洋
- 关键词：胚胎发育细胞极性凋亡活性氧
- 人脐血间充质干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠VEGF分泌及血管新生的影响被引量：10
- 2013年
- 目的探讨人脐血间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠创伤性脑损伤(TBI)模型的脑保护作用机制。方法大鼠随机分为假手术组、损伤对照组(对照组)和实验组,每组30只。对实验组和对照组采用改良Feeney自由落体方法制作大鼠TBI模型。假手术组只开骨窗,不撞击硬脑膜。造模操作后24h,实验组所有大鼠均经鼠尾静脉注入用Brdu标记的3×106个/mL MSCs(以1mL PBS液溶解)1mL;对照组和假手术组所有大鼠经鼠尾静脉注入等体积的PBS液。3组大鼠均未使用免疫抑制剂。以神经损伤严重缺损评分(NSS)方法评价各组大鼠神经损伤程度;各组大鼠注射后第3、7、14、21、28天,采用HE染色观察脑损伤周边区组织形态学变化,免疫组化方法观察损伤周边区Brdu阳性的MSCs分布、微血管密度及VEGF、VEGF-R2表达,原位杂交方法观察VEGF mRNA表达,并进行比较。结果实验组大鼠均未发现免疫排斥反应。注射后第7、14、21、28天实验组大鼠NSS评分均低于对照组(P<0.05)。光镜下假手术组大鼠脑组织细胞结构基本正常;对照组大鼠脑组织结构破坏,损伤区可见大量坏死细胞,胞核皱缩,细胞结构消失。实验组脑组织坏死范围缩小,细胞结构较对照组完整,核固缩较对照组明显减轻。Brdu阳性的MSCs在实验组大鼠脑损伤周边区明显聚集,4周后仍可见存活MSCs。实验组大鼠脑损伤周边区有较多单个血管内皮细胞和条索状的血管样结构,各时间点实验组MVD值均高于对照组(P<0.01);注射后各时间点实验组在损伤周边区表达细胞因子VEGF、VEGF-R2和VEGFmRNA的细胞计数均较对照组明显增多(P<0.05)。对照组和实验组因子VEGF、VEGF-R2和VEGFmRNA表达水平均分别在注射后第7、3、3天达高峰,此后对照组表达逐渐减弱,实验组第21天、甚至28天因子表达仍维持较高水平。结论在未应用免疫抑制剂的情况下,经尾静脉注射的MSCs可迁移至免疫功能健全的大鼠
- 赵俊暕陈乃耀石峻王沂孟爱国韩晓燕赵辉
- 关键词：人脐血间充质干细胞创伤性脑损伤血管新生
- 人心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：6
- 2010年
- 目的建立一种简便实用胶体金免疫层析检测方法,用于人心肌肌钙蛋白I(cTnI)的快速检测。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,以兔源抗cTnI多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,采用免疫层析技术制备快速检测cTnI胶体金免疫层析检测试纸条,并与国外生产的胶体金试剂盒作对比。结果该试纸条检测范围质量浓度为5 ng/mL～1μg/mL;灵敏度质量浓度为5 ng/mL;特异性:与肌红蛋白、肌酸磷酸激酶同工酶、cTnT、cTnC无交叉反应;与国外胶体金试纸条检测结果比较阳性符合率为96.4%,阴性符合率为100.0%。结论成功建立cTnI胶体金免疫层析检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要。
- 郝建秀张春明王沂宋娜玲贺欣刘鉴峰王德芝
- 关键词：胶体金免疫层析技术急性心肌梗死
- C2株蓝氏贾第鞭毛虫SUMO基因的克隆、原核表达和生物信息学分析(英文)被引量：1
- 2013年
- 目的克隆、原核表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的小泛素相关修饰物(small ubiquitn-related modifier,SUMO)蛋白,并对其序列进行生物信息学分析。方法提取C2株贾第虫基因组DNA,以基因组DNA为模板PCR获得SUMO基因片段,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),经测序验证并进行生物信息学分析,将重组质粒pET-28a(+)-SUMO转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。IPTG诱导后收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测。结果成功构建了C2株贾第虫SUMO基因原核表达载体pET-28a(+)-SUMO,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,SDSPAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约12.7kD的位置出现目的蛋白条带,与理论值相符;生物信息学分析显示C2株贾第虫SUMO序列与WB株相同,其蛋白形成类似"泛素折叠"样结构,进化分析表明贾第虫SUMO蛋白与其它现存真核生物亲缘关系较远。结论成功地克隆、表达了贾第虫SUMO蛋白,明确了该蛋白的空间结构和进化地位,为贾第虫SUMO蛋白抗体的制备及相关蛋白功能的研究提供了基础。
- 王洋王沂李冀李思瑾楚晗田喜凤
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫生物信息学
- 生物芯片技术在血栓研究中的应用被引量：1
- 2011年
- 基因多态性是促进血管性疾病发生和发展的重要因素之一。血栓是血管性疾病的一种,其形成和发生是由多种遗传和环境因素共同作用的结果。通过生物芯片技术,对血栓相关基因的表达及调控网络进行研究,为进一步探讨血栓形成机制提供了新思路。本综述总结和分析了近年来生物芯片技术在血栓研究领域的应用科研成果,并对生物芯片技术在这一领域的应用前景进行了展望。
- 郝建秀张春明王沂王德芝
- 关键词：生物芯片血栓基因多态性血管性疾病
- 人类组织中TRAF3IP3基因表达的检测及转染胚肾HEK293细胞后的亚细胞定位被引量：1
- 2013年
- 目的克隆TRAF3IP3基因,明确TRAF3IP3在部分人类组织中的表达谱并鉴定其表达产物的亚细胞定位。方法采用实时定量PCR检测TRAF3IP3基因在人体各组织中的表达情况;克隆TRAF3IP3基因开放读码框区(ORF)并构建真核亚细胞定位质粒。转染人胚肾HEK 293细胞,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位。结果实时定量PCR证实TRAF3IP3基因在被检测的11种组织中均有表达,其中在淋巴结、脾、骨髓、胃和睾丸中的表达水平较高;成功克隆了TRAF3IP3基因ORF区并构建成为荧光定位质粒,激光共聚焦显微镜观察证实TRAF3IP3蛋白主要定位于核膜,在核周呈颗粒状分布。结论 TRAF3IP3基因在淋巴细胞富集的器官呈高表达,可能参与免疫系统的发育、成熟及调控,其表达产物在细胞内主要定位于核膜及核周胞浆。
- 王洋王沂余源刘青毛焕熊艳杰张秀军
- 关键词：组织表达谱亚细胞定位
- 噬菌体展示技术在血液肿瘤诊断治疗中的应用被引量：1
- 2012年
- 血液肿瘤即造血系统的恶性肿瘤,是一种严重危害公共健康的疾病。目前,血液肿瘤诊断治疗的最理想方法就是分子特异性诊断和靶向治疗,但该方法面临的最大困难就是分子靶点的选择。噬菌体展示技术是近十年发展起来的一种新的生物学技术,具有高通量筛选、模拟天然表位、易于纯化、将蛋白功能与编码基因相统一等优点,广泛应用于功能性蛋白质和多肽的筛选、蛋白质间的识别与相互作用、抗原表位的鉴定、基因工程抗体的筛选等多个分子生物学领域,非常适于理想靶点的选择。目前,噬菌体文库技术在血液肿瘤诊治中的应用主要集中在噬菌体抗体文库和噬菌体随机肽库上。本文就噬菌体展示技术在血液肿瘤诊断治疗中的研究成果做一总结分析,并对该技术在这一领域的应用前景进行展望。
- 王沂张春明郝建秀宋娜玲刘金剑贺欣刘鉴峰王德芝
- 关键词：噬菌体展示血液肿瘤
