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王毅: 作品数：11 被引量：52H指数：3; 供职机构：传染病预防控制国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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模拟粪便标本单增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法被引量：3: 2014年; 目的建立一种TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR),用于模拟粪便标本中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的快速检测。方法以单增李斯特菌特异基因hly和伊氏李斯特菌特异基因smcL作为靶基因,合成2对引物和其相应的荧光探针,制作标准曲线,建立从模拟粪便标本中直接检测单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的TaqMan双重real-time PCR。利用李斯特菌属中其他种李斯特菌及常见致病菌验证引物、探针的特异性;通过制备模拟粪便标本并对其进行二次增菌后,分别提取DNA,采用TaqMan双重real-time PCR进行检测,以达到快速检测单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的目的。结果采用本研究建立的TaqMan双重real-time PCR对模拟粪便标本的检测结果显示特异性良好,与其他种李斯特菌和其他病原菌均无交叉反应。模拟粪便标本中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的检测下限分别为2.45×103cfu/g和2.92×103cfu/g;模拟粪便标本在3 h内可得出检测结果,当模拟粪便标本中单增李斯特菌含量为6 cfu/g和伊氏李斯特菌含量为5 cfu/g时,经过增菌后使用双重real-time PCR可检测出阳性结果。结论本研究建立了以单增李斯特菌的特异基因hly和伊氏李斯特菌的特异基因smcL为靶基因的TaqMan双重realtime PCR检测方法,该方法具有特异性好、敏感性高、快速易操作等优点,可用于临床、食品及环境标本的快速诊断,以及我国人群中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的携带或感染状况的调查分析。; 许华青王艳王毅代航王和叶长芸; 关键词：单增李斯特菌

北京市一些地区生肉标本中单增李斯特菌的分离及其分子流行病学特征分析被引量：25: 2015年; 目的了解北京市一些地区生肉中单增李斯特菌的污染情况及其分子流行病学特征。方法采用北欧食品分析标准(NMKL)对北京市一些地区采集的340份牛、羊、猪、鸡和鸭生肉标本进行单增李斯特菌的分离鉴定,并对分离菌株进行血清学分型(Serotyping)、脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分型及多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)分析。结果生肉标本中单增李斯特菌污染率为6.2%(21/340)。分离菌株含3种血清型(1/2a,1/2b和1/2c),以1/2c为优势血清型(占47.6%)。PFGE分析中,使用内切酶AscI酶切电泳将21株单增李斯特菌分为12个型别,可聚类为3个群。MLST分析将21株单增李斯特菌分为7个ST型,其中ST9型最多(10株)。结论北京市一些地区的生肉类食品中存在6.2%的单增李斯特菌污染率,这些单增李斯特菌以家系II菌株占据绝对优势(80.1%),其中1/2c型,GX6A16.CN0004和ST9型分别为血清型、PFGE带型以及MLST序列型的优势型别,与我国食源性单增李斯特菌的优势菌群特征一致。; 马爱静王艳王毅李东迅许华青袁雪娇刘凯叶长芸; 关键词：单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型多位点序列分型

多交叉置换扩增技术在单增李斯特菌检测中的应用及评价被引量：2: 2018年; 目的应用多交叉置换扩增(MCDA)技术建立单增李斯特菌的简单、快速、敏感且特异的诊断方法,并对该方法进行敏感度、特异性及实际应用评价。方法根据单增李斯特菌的种特异性基因lmo0733设计引物,采用荧光染料颜色变化、实时浊度检测及琼脂糖凝胶电泳三种方法确认MCDA产物,对MCDA引物进行最佳反应条件、敏感度、特异性评估,并对实际样本进行检测。结果单增李斯特菌MCDA检测方法的最佳反应温度为61℃。单增李斯特菌MCDA检测方法的敏感度为10fg/反应,分别是环介导等温扩增(LAMP)技术和交叉引物恒温扩增(CPA)技术的25倍和250倍。对153份鼠粪便标本2次增菌培养物的检测结果证实,本研究建立的单增李斯特菌MCDA检测方法的检测能力与分离培养方法(ISO 11290-1)相同,且优于LAMP、CPA和PCR方法。结论 MCDA方法作为一种快速、敏感和高效的检测方法可以应用于食品行业及临床标本中单增李斯特菌的检测。; 李慧王毅王艳李华陈峥宏叶长芸; 关键词：单增李斯特菌

单增李斯特菌1/2c血清型菌株生物膜相关基因分析及耐药性研究被引量：1: 2016年; 目的了解单增李斯特菌1/2c血清型菌株与其他血清型菌株的生物膜相关基因和抗生素耐药性是否有差异。方法采用聚合酶链反应技术对19个生物膜相关基因全长扩增测序分析,并与参考菌株EGD-e序列进行比对确定基因变异情况;根据K-B纸片法对选取的实验菌株进行药敏实验。结果氨基酸序列比对发现1/2c血清型菌株的fla A基因编码的氨基酸在141位点发生突变,其他血清型菌株则没有,1/2c血清型菌株在prf A基因编码的89氨基酸位点、lux S基因编码的112和140氨基酸位点都不发生突变,其他血清型菌株则发生突变。78.43%的1/2c血清型菌株对头孢西丁中度敏感,对氨苄西林、米诺环素、利福平和呋喃妥因有不同程度的耐药。结论不同血清型单增李斯特菌的fla A、lux S、prf A 3个基因编码的氨基酸在某些位点突变有一定的规律性;1/2c血清型单增李斯特菌对某些抗生素呈现不同程度的耐药。; 李东迅王艳马爱静王毅刘凯刘东鑫王和叶长芸; 关键词：单增李斯特菌血清型点突变耐药性

中国部分食品分离单增李斯特菌的抗菌药物敏感性及耐药基因检测被引量：15: 2013年; 目的了解我国部分食品中分离单增李斯特菌的抗菌药物敏感性和耐药性,探讨单增李斯特菌耐药基因的携带与耐药表型的关系。方法采用微量肉汤稀释法对2005-2011年从我国7个省市/地区食品分离的203株单增李斯特菌进行庆大霉素、氨苄西林、头孢噻吩、青霉素、四环素、强力霉素、亚胺培南、红霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、利福平、万古霉素、氯霉素、氨苄西林/舒巴坦、复方新诺明、诺氟沙星、头孢呋肟、多粘菌素B、呋喃妥因、氯林可霉素共20种抗菌药物药敏试验,采用PCR方法对实验菌株进行9种耐药基因及接合型转座子Tn916检测,并对阳性基因产物进行序列测定分析。结果食源性单增李斯特菌对多粘菌素B、呋喃妥因、头孢呋肟、氯林可霉素、四环素、强力霉素、环丙沙星、诺氟沙星和氯霉素的耐药率分别为98.52%、55.66%、50.25%、12.81%、2.46%、1.97%、0.99%、0.99%和0.49%。203株单增李斯特菌中,5株对四环素耐药的菌株均检测出tetM基因,其中3株菌的tetM基因位于接合型转座子Tn916上。结论食品中分离的单增李斯特菌存在不同程度的耐药情况,并有83株多重耐药株存在,具有引起食源性单增李斯特菌感染的风险存在,应加强对抗生素使用的管理以保证食品安全及公众健康。; 王天姝王艳贺春月叶正兴王毅许柯俞骅汪永禄张兰荣曾莹春许学斌王红陈伟伟王和叶长芸; 关键词：单增李斯特菌微量肉汤稀释法

单增李斯特菌1/2c血清型菌株生物膜形成能力的研究被引量：6: 2015年; 目的比较在不同压力条件下，单增李斯特菌1／2c血清型与其他血清型菌株生物膜形成能力，以了解单增李斯特菌1／2c血清型菌株的环境适应能力。方法采用96孔培养板结晶紫染色法，检测不同温度、不同培养基、不同pH值条件下，单增李斯特菌1／2c血清型与其他血清型菌株的生物膜形成能力。结果在25℃、TSB、10％TSB和pH7～8条件下，1／2c血清型菌株生物膜形成能力强于其他血清型菌株（P〈0．05）。结论在室温、富营养／低营养条件、中性略偏碱性环境中单增李斯特菌1／2c血清型菌株的生物膜形成能力强于其他血清型菌株，提示可能是食源性单增李斯特菌1／2c血清型菌株分离率较高的原因之一，为该菌的预防控制措施提供了参考依据。; 李东迅王艳马爱静王毅刘凯刘东鑫王和叶长芸; 关键词：单增李斯特菌血清型生物膜

鉴定单增李斯特菌四个进化家系及两个亚系的多PCR方法的建立(英文)被引量：3: 2013年; 目的利用多重PCR(multiplex PCR)技术,建立针对单增李斯特菌4个进化家系(LineageⅠ、LineageⅡ、LineageⅢ、LineageⅣ)及2个亚系(LineageⅢA、LineageⅢC)的鉴定方法。方法以InlA、Lmo0733、Lmo0038、Lmo0735和LmaA作为靶基因设计引物,建立同时鉴别LineageⅠ、LineageⅡ、LineageⅢA、LineageⅢC和LineageⅣ菌株的多重PCR反应体系,并对387株单增李斯特菌进行了所属进化家系及亚系的鉴定。结果 387株单增李斯特菌可用本方法进行所属家系和亚系的分型,包括LineageⅠ246株、LineageⅡ123株、LineageⅢA 4株、LineageⅢC 13株和LineageⅣ1株。结论本方法能准确鉴定单增李斯特菌的4个进化家系及2个亚系的菌株,可用于食品、临床标本中单增李斯特菌的病原学诊断和疫情暴发时的溯源调查。; 王毅王艳叶正兴马爱静代航许华清李东迅叶长芸; 关键词：单增李斯特菌多重PCR

某屠宰场猪粪便中单增李斯特菌携带调查: 2014年; 为了初步探索猪的李斯特菌携带情况以及屠宰加工环境中污染的可能性,并进一步对分离到的单增李斯特菌进行分型分析,以了解其分子流行病学特征,为预防控制食源性李斯特菌病提供参考。2011年3月至2012年2月每月月初定点采集某一屠宰场的猪粪便标本和加工场所环境水样标本,进行李斯特菌的病原学分离,对分离到的单增李斯特菌进行血清分型、多位点序列分型(MLST)和脉冲场电泳分型(PFGE)分析。1322份猪粪便标本和104份环境标本中,共分离到7株单增李斯特菌、56株无害李斯特菌。5株单增李斯特菌属于1/2c血清型(ST9型),1株1/2a血清型(ST199型),1株1/2b血清型(ST5型)。4株1/2c型菌株具有完全相同的PFEG带型,与另外1株1/2c型菌株具有相似带型,而与其他2株菌株(分别为1/2a型和1/2b型)的带型具有较大差异。猪的单增李斯特菌携带率较低,但存在污染加工环境的可能性,进而导致生猪肉食品受到污染。对屠宰及加工场所采取有效的消毒灭菌措施能够避免单增李斯特菌的污染和传播。; 刘凯王艳王天姝贺春月代航于波袁雪娇叶正兴王毅许华青孟双叶长芸; 关键词：单增李斯特菌分子分型

鉴定单增李斯特菌4b血清型亚型的多重PCR方法的建立被引量：1: 2014年; 目的利用多重PCR(multiplex PCR)技术,建立针对单增李斯特菌4b血清型亚型(ECI、ECII、ECIV、non-EC)的鉴定方法。方法以LMOf2365_2798、LMOh7858_0487、ORF2110和gtcA作为靶基因设计引物,建立同时鉴别ECI、ECII、ECIV、non-EC的多重PCR反应体系,并对16株4b血清型单增李斯特菌进行亚型鉴定。结果 16株4b血清型单增李斯特菌可用本方法进行分型:其中ECI亚型11株,ECII亚型1株,ECIV亚型2株,非流行克隆群(non-EC)2株。结论本方法能准确鉴定单增李斯特菌4b血清型菌株的4个亚型,可用于食品、临床标本的病原学诊断和疫情暴发的溯源调查。; 王毅王艳叶正兴代航王天殊贺春月许华青叶长芸; 关键词：单增李斯特菌多重PCR

环介导等温扩增技术在嗜水气单胞菌检测中的应用被引量：2: 2016年; 目的建立环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)对嗜水气单胞菌检测的方法,并用临床标本对该方法进行评价。方法根据嗜水气单胞菌desA基因的保守序列设计特异性引物,利用参考质粒评价该检测体系的灵敏度;用30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性;用粪便模拟样本以及临床样本评价该检测体系的临床检测的可行性。结果 LAMP检测体系对嗜水气单胞菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系;LAMP检测体系在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现假阳性;LAMP检测体系在粪便模拟标本中的检测下限为5×103 CFU/g;通过与qPCR技术相比较,LAMP具有更高的灵敏度以及更优秀的临床标本的检测能力。结论本研究建立的LAMP方法是首次将LAMP技术运用到了嗜水气单胞菌的检测,所需仪器设备简单,可作为一种快速的筛查方法在临床检验和基层实验室应用。; 孟双王毅王艳叶长芸; 关键词：嗜水气单胞菌 LAMP

王毅

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