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西农萨能羊BTN基因RNA干扰序列的筛选及重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2: 2010年; 【目的】构建西农萨能羊BTN基因RNA干扰的重组腺病毒载体,为研究BTN基因的功能和作用机制奠定基础。【方法】设计并合成3对针对BTN不同位点的shRNA编码序列,克隆到pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA载体中,并与已构建好的表达BTN的pDsRed1-C1-BTN载体共转染HEK293细胞,筛选有效的干扰序列。通过与腺病毒骨架质粒重组,制备表达干扰BTN基因的shRNA的腺病毒,经PacⅠ线性化后,在HEK293细胞中包装并扩增病毒,用TCID50法进行病毒滴度测定,获得高滴度的病毒上清液。【结果】成功构建了西农萨能羊BTN基因的RNAi腺病毒表达载体,腺病毒经包装和扩增后,病毒滴度可达到5×109PFU/mL。【结论】获得了有功能的pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA病毒重组子。; 赵旺生罗军王伟滕炎玲王桢林先滋; 关键词：RNA干扰腺病毒载体

奶山羊乳腺上皮细胞的分离、培养及鉴定被引量：29: 2010年; 应用组织块培养法和高密度培养、连续传代法建立西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞体外培养体系,通过生长曲线绘制、核型分析、免疫荧光染色(角蛋白、上皮膜抗原、波形蛋白、β-酪蛋白)、油红染色及β-酪蛋白基因的RT-PCR分析进行培养细胞鉴定。实验结果表明细胞生长曲线为典型的S型,染色体数目众数为60,细胞角蛋白、上皮膜抗原、波形蛋白、β-酪蛋白表达均呈阳性,油红染色后可见细胞质内的脂滴,且细胞表达酪蛋白mRNA。说明运用本方法培养的细胞为正常的乳腺上皮细胞,并具有一定的泌乳功能。; 王桢罗军王伟赵旺生林先滋; 关键词：奶山羊乳腺上皮细胞原代培养

西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞培养、鉴定及心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因的过表达研究: 本研究通过活体采集西北农林科技大学萨能羊原种场纯种萨能奶山羊乳腺组织,利用组织块和高密度培养法分离、培养西农萨能奶山羊乳腺上皮细胞,纯化后通过免疫组化、油红染色、RT-PCR等实验对所培养细胞的生物学特征及功能进行初步的...; 王桢; 关键词：H-FABP 过表达 PEGFP-N1; 文献传递

一种乳腺上皮细胞的组织块种植方法: 本发明公开了一种乳腺上皮细胞的组织块种植方法，其特征在于，包括如下步骤：1)预处理：以血清铺满培养皿，静置；2)种植：在所述培养皿中种植乳腺组织块，收集乳腺上皮细胞和成纤维细胞；3)纯化：除去成纤维细胞，得到乳腺上皮细胞...; 王桢罗军王伟赵旺生林先滋滕炎玲; 文献传递

西农萨能奶山羊LXRα基因的克隆、序列分析及组织表达被引量：4: 2011年; 采集西农萨能奶山羊乳腺组织,利用RT-PCR和RACE技术分离并克隆LXRα基因的cDNA序列。其全长1 654 bp(GenBank收录号为GU332719),包括5′UTR150 bp,CDS1 344 bp和3′UTR160 bp,该基因编码447个氨基酸。经氨基酸序列分析发现,山羊LXRα与GenBank中牛(Bos taurus)、小鼠(Mus muscu-lus)、褐鼠(Rattus norvegicus)、猪(Sus scrofa)和人(Homosapiens)的LXRα相似性较高,均在90%以上。蛋白质结构分析表明,其蛋白质分子量为50.35 ku,等电点为6.3。具有受体特征结构域:配体结合区域(Lig-and-binding Domain,LBD)、DNA结合区域(DNA-binding Domain,DBD)和锌指蛋白C4型区域(Zinc fingerC4 type,zf-C4)。整个序列具有较强的亲水性且不含信号肽与跨膜结构,该基因定位于细胞核。此外,还通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对LXRα基因进行组织表达分析。在所检测的西农萨能奶山羊11个组织中均有LXRα基因的mRNA存在,其中小肠组织中表达最丰富,乳腺、肝脏、脾脏、皮脂次之,心脏相对最低。; 王维罗军钟瑜朱越滕炎玲林先滋王桢; 关键词：西农萨能奶山羊 LXRΑ

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王桢