王旻
- 作品数：30 被引量：23H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 新型低抗原性葡激酶的构建、表达及功能分析被引量：4
- 2007年
- 目的：降低野生型葡激酶（wild-type staphylokinase，wt-SAK）的抗原性，获得新型溶栓剂。方法：利用生物信息学分析野生型SAK抗原表位，将其分子内主要的抗原决定簇编码序列定点突变为丙氨酸密码子，将其N端抗原性较强的前10位氨基酸缺失。经过筛选从系列突变体中得到突变体NSAKV。结果：生物信息学分析突变后分子抗原性，结果表明其主要抗原表位消失。该突变体（NSAKV）与原核表达载体pET17b重组后，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导获得高效表达，NSAKV占全茵总蛋白的40％-50％，以可溶性形式存在。经进一步纯化，纯度达98％以上，分子量与理论值相符。比活性2．616×10^4 AU／mg。经ELISA法和溶圈法测定，NSAKV与wt-SAK制备的兔抗wt-SAK抗血清的免疫反应性显著降低，经抗血清温育后wt-SAK活性下降程度远高于NSAKV。结论：突变体（NSAKV）保持了野生型SAK的活性，同时抗原性下降。
- 王旻王圆圆邹民吉徐涛刘深吴琛王嘉玺徐东刚
- 关键词：葡激酶抗原性突变纯化
- IGFBP-3高效可溶表达、纯化及生物学活性初步研究被引量：2
- 2007年
- 克隆胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段,构建原核表达载体pET-DsBA-IGFBP3。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS中,诱导表达IGFBP-3融合蛋白(简称D-IGFBP3)。经检测融合蛋白主要以可溶形式表达。表达产物用His亲和层析柱纯化,获得了纯度超过95%的重组IGFBP-3融合蛋白。Western-blot结果表明在相应分子量处有一条特异性条带。细胞活性研究显示它对MCF-7细胞生长具有一定的抑制作用,且在体外具有与IGF-I结合的活性。
- 吴琛姚广印邹民吉陈光宇王旻王嘉玺徐东刚
- 关键词：纯化生物学活性
- 重组SAK及其突变体多克隆抗体制备及应用研究被引量：3
- 2007年
- 目的通过制备SAK及其突变体(SAK2)的多克隆抗体,检测并比较两者的免疫原性。方法将4只新西兰大耳白兔随机分为SAK组2只,SAK2组2只,皮下多点注射抗原SAK及SAK2。第3次免疫1周后,收集血清。使用饱和硫酸氨沉淀及DEAE离子交换法纯化多克隆抗体,ELISA检测抗血清效价。ELISA检测抗原抗体反应性,比较SAK和SAK2的免疫原性。结果兔抗SAK多克隆抗体与SAK2的反应性显著低于与SAK的反应性,兔抗SAK2多克隆抗体与SAK和SAK2的反应性无明显差异。结论使用多克隆抗体检测抗原抗体反应性的结果显示,SAK突变体SAK2缺失了部分抗原表位,同时未产生新的抗原表位。与SAK相比SAK2可能具有较低的免疫原性。利用多克隆抗体检测抗原抗体反应性对判断抗原性变化具有重要价值。
- 王园园王旻邹民吉刘深徐涛蔡欣王金凤徐东刚
- 关键词：葡激酶多克隆抗体免疫原性
- SAK蛋白在制备降血脂药物中的应用
- 本发明公开了属于生物医药领域的一种SAK蛋白在制备降血脂药物中的应用。所述SAK蛋白，其氨基酸序列为中国专利文献(CN101314769A)中序列表中的SEQ ID NO：1所示。上述SAK蛋白对高脂血症动物模型给药在1...
- 徐东刚王旻付文亮王园园邹民吉夏文戎毛金武
- 文献传递
- 一种葡激酶及其表达载体
- 本发明公开了一种葡激酶及其表达载体，该葡激酶是具有SEQ ID No：1所示的氨基酸序列的多肽，其基因编码序列如SEQ ID No：2所示。本发明还公开了含有该葡激酶基因的表达载体。本发明葡激酶溶栓作用强，可用于制备治疗...
- 邹民吉徐东刚王旻蔡欣
- 文献传递
- P11与SAK的融合蛋白及其制备方法和用途
- 本发明公开了一种P11与SAK的融合蛋白及其制备方法和用途，此融合蛋白是利用重叠延伸PCR的方法将P11编码序列融合在SAK的5’端，中间以连接序列连接，获得融合基因，插入到pBV220载体上，并在宿主菌JM103中表达...
- 徐东刚姚广印邹民吉王旻
- 文献传递
- 葡激酶衍生体在制备降血脂药物中的应用
- 本发明公开了属于生物医药领域的葡激酶衍生体在制备降血脂药物中的应用。所述葡激酶衍生体，其氨基酸序列为中国专利文献(CN1850976B)中权利要求1所述的氨基酸序列。本发明中的葡激酶衍生体经静脉注射等方式作用于ApoE-...
- 徐东刚王旻付文亮王园园邹民吉夏文戎毛金武
- 文献传递
- TNBS诱导的大鼠炎性肠病模型的建立被引量：4
- 2008年
- 目的建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的炎性肠病动物模型,以用于相关药物评价。方法雄性Wistar大鼠50只随机分为TNBS造模组、对照组及正常组,各组大鼠分别用2%TNBS、50%乙醇及生理盐水灌肠。观察各组大鼠的粪便、精神状态和进食情况,并每日称量体重及食重。分别在造模后第3、6和14天处死大鼠,分离结肠组织,制作病理切片,HE染色后显微镜下观察结肠组织病理变化。结果TNBS造模组在造模后第1天即表现出明显的肠道稀便和血便,并持续约8天;造模后体重和进食明显下降,持续7～10天后缓解;造模后第3天可观察到明显的肠道病理改变,并逐渐加重,至第6天时可见黏膜的大量炎性细胞浸润以及肠壁的透壁性坏死。造模对照组大鼠在造模后第1天部分稀便,第2天即恢复正常,造模后第3天肠道可见轻度病理改变。正常组大鼠一切均正常。结论TNBS诱导的大鼠造模后表现出明显的炎性肠病症状,可作为IBD病因及治疗药物研究的有效模型。
- 王园园王金凤蔡欣徐涛邹民吉刘深刘中成王旻龙民慧王嘉玺徐东刚
- 关键词：2,4,6-三硝基苯磺酸炎性肠病动物模型
- 重组SRH融合蛋白工程菌发酵的工艺研究被引量：1
- 2012年
- 目的通过对影响表达SRH融合蛋白工程菌发酵的主要因素的研究,建立适宜SRH融合蛋白工程菌的发酵工艺。方法通过对发酵过程中的pH、溶氧调控、诱导温度、诱导时机及诱导时间进行优化建立SRH蛋白的发酵工艺,利用SDS-PAGE电泳分析表达情况。进一步利用离子交换和凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化后目的蛋白的溶栓活性和抗凝活性进行检测。结果优化后发酵条件为:发酵pH为7.0、溶氧为45%、菌体浓度达到OD600=8时开始诱导,诱导温度为41℃,诱导时间为4.5h。该发酵条件下得菌量为25g/L。SRH蛋白表达量为45%,并且90%以上为可溶性表达,纯化后蛋白纯度达95%以上,纯品SRH蛋白溶栓活性为1.80×104AU/mg,抗凝活性为100AU/mg。结论建立了SRH融合蛋白工程菌稳定的发酵工艺,该条件下SRH工程菌发酵蛋白表达量较高,多为可溶性表达,且杂蛋白较少,发酵产物具有生物学活性。
- 徐涛邹民吉王旻付文亮王圆圆刘深徐东刚
- 一种重组葡激酶衍生体及其制备方法
- 本发明公开了属于基因工程及生物溶栓药物制备技术范围的涉及一种重组葡激酶衍生体及其制备方法。其制备方法为利用基因体外重组技术将RGD序列、水蛭素的C末端序列与构建的低抗原性高活性SAK突变体基因相融合，同时引入Xa因子切割...
- 徐东刚邹民吉王旻蔡欣王金凤陈光宇刘深徐涛
- 文献传递
