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王文文: 作品数：14 被引量：49H指数：5; 供职机构：山东省果树研究所更多>>; 发文基金：公益性行业(农业)科研专项山东省农业良种工程项目引进国际先进农业科技计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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核果类果树遗传转化及检测技术研究进展: 2013年; 综述了近年来国内外常见核果类果树遗传转化的研究进展,概述了目前果树遗传转化的主要方法,阐述了核果类果树遗传转化植株的主要鉴定方法,指出了当前研究中存在的一些问题,探讨了转基因研究未来的发展方向。; 王文文孟艳玲宗晓娟王甲威魏海蓉崔海金刘庆忠; 关键词：核果类果树

李矮缩病毒外壳蛋白基因克隆及原核表达研究被引量：5: 2012年; 为制备李矮缩病毒（prunusdwarfvims，PDv）抗血清，克隆PDV外壳蛋O（ce）基因，构建原核表达载体，优化蛋白表达条件。以阳性感病甜樱桃叶片为试验材料，提取总RNA，根据PDVCP基因（L28145．1）设计特异引物，RT-PCR方法扩增，克隆、测序，构建原核表达载体pET30a-PDVCP，在大肠杆菌BL21（DE3）菌株表达。PDV凹基因（GenBank登录号：JF333587．1）全长657bp，编码217个氨基酸。与GenBank其他PDV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89．2％-93．9％，推导的氨基酸序列同源性为97％-99％。根据完整CP基因核苷酸序列构建系统进化树显示：12个PDV分离物可分为3组，泰安分离物与巴西、土耳其等分离物属于I组。成功构建原核表达载体pET30a．PDVCP，并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。转pET30a．如Ⅵ≯载体的大肠杆菌BL21（DE3）菌株表达分子量约24kDa的重组蛋白。该重组蛋白在30℃，1．0mmol／LIPTG、诱导4h表达量最大。; 陈立伟宗晓娟王文文王甲威魏海蓉徐丽严雪瑞刘庆忠; 关键词：外壳蛋白基因克隆原核表达

不同砧木甜樱桃品种‘红灯’皱叶病树体内的病毒检测被引量：4: 2014年; 【目的】初步探明患有皱叶病的甜樱桃树体内是否感染病毒,为皱叶病的分子生物学鉴定及综合防治提供可靠的科学依据。【方法】以嫁接在3种不同砧木上的甜樱桃品种‘红灯’叶片为试验材料,提取植物样本总RNA,采用随机六聚体引物反转录,选取10种甜樱桃病毒作为检测对象,根据各病毒基因组序列设计特异引物,进行RT-PCR检测。【结果】10种甜樱桃待检病毒中,5种病毒检测结果呈阳性,分别为PNRSV、PDV、CVA、CGRMV、LCh V-2。各皱叶病甜樱桃样品均至少同时感染2种病毒,多病毒复合感染比例较高。【结论】甜樱桃皱叶病树体内确有病毒存在,但关于病毒是否是引起皱叶病的原因还有待进一步验证。; 王文文宗晓娟魏海蓉王甲威朱东姿谭钺刘庆忠; 关键词：甜樱桃砧木病毒

环渤海湾地区甜樱桃小果病毒及樱桃病毒A的鉴定与调查: 为了解环渤海湾地区甜樱桃（PrunusaviumL.）中樱桃病毒的发生情况,选取该地区代表性樱桃示范园中甜樱桃品种‘红灯’为研究对象,以生长期功能叶片为材料,根据樱桃小果病毒-1（Littlecherryvirus-1,...; 王文文宗晓娟王甲威魏海蓉徐丽陈新刘庆忠; 关键词：甜樱桃; 文献传递

山东地区樱桃绿环斑驳病毒(CGRMV)的RT-PCR检测及外壳蛋白基因的克隆被引量：3: 2012年; 为调查我省甜樱桃感染樱桃绿环斑驳病毒(Cherry Green Ring Mottle Virus,CGRMV)情况,本研究以甜樱桃(Prunus avium L.)品种"红灯"叶片总RNA为模板,根据CGRMV基因组序列设计特异引物,对山东地区37份甜樱桃"红灯"样品进行RT-PCR检测,共检测出19份阳性样品。利用CGRMV外壳蛋白基因序列引物,从阳性植物样本中分离到约800 bp的目的片段,克隆测序,序列分析显示该片段全长807 bp,编码268个氨基酸,与GenBank中已登录的CGRMV分离物的外壳蛋白基因序列一致性为87%～97%,氨基酸序列相似性为95%～99%。该结果表明山东地区甜樱桃生产园中感染CGRMV的病例较为普遍。; 王文文宗晓娟陈立伟王甲威魏海蓉徐丽孟艳玲严雪瑞刘庆忠; 关键词：甜樱桃 RT-PCR检测外壳蛋白基因克隆

中国甜樱桃病毒病及其检测技术研究进展被引量：9: 2012年; 综述了近年来中国对甜樱桃(Prunus avium L.)病毒病及其检测技术的相关报道,介绍了中国甜樱桃上常见病毒的种类、危害及特性,主要包括:李属坏死环斑病毒(PNRSV)、李矮缩病毒(PDV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、樱桃锉叶病毒(CRLV)、樱桃病毒A(CVA)、樱桃绿环斑驳病毒(CGRMV)、樱桃小果病毒(LChV);阐述了甜樱桃病毒检测中所用的方法、技术,包括指示植物法(生物学鉴定法)、电子显微镜技术、血清学方法、分子生物学技术方法等。; 王文文宗晓娟陈立伟王甲威魏海蓉徐丽严雪瑞刘庆忠; 关键词：AVIUM 病毒

两种主要甜樱桃病毒RT-PCR检测方法的改进被引量：6: 2011年; 李属坏死环斑病毒（Prunus necrotic ringspot vi-rus,PNRSV）和李矮缩病毒（Prune dwarf virus,PDV）是较为常见且危害严重的两种植物病毒,1992年被我国列为进境检疫危险性有害生物,主要危害李属和蔷薇属植物。反转录-聚合酶链式反应检测法（RT-PCR）因操作简便且灵敏度高而备受青睐。; 宗晓娟王文文陈立伟王甲威严雪瑞刘庆忠; 关键词：环斑病毒反转录-聚合酶链式反应甜樱桃危险性有害生物蔷薇属植物植物病毒

环渤海湾地区甜樱桃小果病毒及樱桃病毒A的鉴定与调查被引量：12: 2013年; 为了解环渤海湾地区甜樱桃[Cerasus avium(Linn.)Moench]中樱桃病毒的发生情况,选取该地区代表性樱桃示范园中甜樱桃品种‘红灯’为研究对象,以生长期功能叶片为材料,根据樱桃小果病毒-1(Little cherry virus-1,LChV-1)、樱桃小果病毒-2(Little cherry virus-2,LChV-2)和樱桃病毒A(Cherry virus A,CVA)基因组序列设计特异性检测引物进行RT-PCR扩增,结果扩增出与LChV-2、CVA预期片段337bp和652bp大小相符的目的片段,测序结果与基因组(基因登录号NC-005065、NC-003689)对应片段一致性分别为89.0%、98.2%,未检测到LChV-1。本研究完成了对环渤海湾地区甜樱桃‘红灯’样品LChV-2、CVA的检测调查,LChV-2检出率43.1%,CVA检出率60.8%;在该地区首次发现LChV-2、CVA复合侵染植株,复合检出率37.3%。结果表明该地区CVA发生较为普遍,可与LChV-2等其他病毒共同加重对甜樱桃的危害。; 王文文宗晓娟王甲威魏海蓉徐丽陈新柳金伟刘庆忠; 关键词：甜樱桃

山东泰安甜樱桃“花叶病”树体症状观察及病毒检测被引量：3: 2015年; 为了探明山东泰安患有"花叶病"的甜樱桃树体内感染病毒的种类,本研究以嫁接在3种不同砧木上的甜樱桃品种‘红灯’叶片为试验材料,提取植物样本总RNA,采用随机六聚体引物反转录,选取10种甜樱桃病毒作为检测对象,根据各病毒基因组序列设计特异引物,进行RT-PCR检测。结果显示,10种甜樱桃待检病毒中,5种病毒检测结果呈阳性,分别为PNRSV(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、PDV(Prune dwarf virus,PDV)、CVA(Cherry virus A,CVA)、CGRMV(Cherry green ring mottle virus,CGRMV)、LChV-2(Little cherry virus-2,LChV-2),各病毒检出率较高。各"花叶病"甜樱桃样品均至少同时感染2种病毒,多病毒复合感染比例较高。; 王文文宗晓娟魏海蓉王甲威朱东姿谭钺刘庆忠; 关键词：甜樱桃花叶病砧木病毒

SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒定量分析中的应用被引量：8: 2012年; 为了探讨SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒粒子定量分析中的应用前景,以复合感染李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf vi-rus,PDV)、樱桃病毒A(Cherry virus A,CVA)、樱桃小果病毒-2(Little cherry virus-2,LChV-2)的甜樱桃"红灯"Prunus avium cv.Red Lamp植株为研究对象,采用相对定量方法,分析各病毒的外壳蛋白基因的表达,用以指示病毒的增殖量。在花、幼叶、功能叶、衰老叶中均能检测到4个基因,但各基因表达量在各器官中存在差异。PNRSV-CP与CVA-CP表达模式相似,功能叶中明显高于其它器官,衰老叶中急剧降低。PDV-CP与LChV2-CP表达模式类似,幼叶中的表达量较高,功能叶片中较低。PNRSV-CP在花、功能叶中的表达显著高于其它3个病毒基因。LChV2-CP在各器官中的表达量均低于其余3个基因。该方法适用于植物组织内多种甜樱桃病毒增殖量的分析。; 宗晓娟王文文王甲威魏海蓉严雪瑞刘庆忠; 关键词：李属坏死环斑病毒

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