王建勇
- 作品数：11 被引量：28H指数：5
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 油茶脂氢过氧化物裂解酶基因的克隆与序列分析
- 以油茶近成熟种子为材料,根据油茶EST 文库中已知的脂氢过氧化物裂解酶EST 序列,利用3’RACE 与5’RACE 技术,克隆到脂氢过氧化物裂解酶的全长cDNA序列.该基因全长1648bp,,包含一个1476bp 开放...
- 王建勇谭晓风龙洪旭陈鸿鹏刘凯朱凤云
- 关键词：油茶基因克隆
- 文献传递
- 油茶脂酰辅酶A硫酯酶基因的克隆与表达分析被引量：8
- 2014年
- 脂酰辅酶A硫酯酶是催化脂酰Co A水解成自由脂肪酸(FFA)和辅酶A(Co ASH)的一类酶,它通过维持胞内脂酰Co A、FFA和Co ASH等的水平来参与生命体内的生理过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,分离和克隆到一个油茶脂酰Co A硫酯酶基因的全长c DNA序列,命名为Co ACOT(Gen Bank登录号KJ910339)。该基因c DNA全长为1 588 bp,含有1 164 bp的开放读码框,编码387个氨基酸;基因编码的蛋白Co ACOT具有c NMP结合域保守序列"VVREGEAGDGVYFIWDG"和C端的保守三联肽"SKL",属于过氧化物酶体蛋白。成功构建了表达载体,其中,原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得分子量约为44 k Da的目的蛋白。荧光定量PCR分析表明,Co ACOT基因在种子不同的发育期均有表达,种子膨大期最低,经油脂合成期上调表达之后,Co ACOT基因的相对表达量维持在一个相对稳定的较高水平。结果显示Co ACOT基因可能调控着油茶种子的油脂合成。
- 谭晓风王建勇龙洪旭曾艳玲梅芳芳刘凯陈鸿鹏
- 关键词：油茶克隆
- 油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的克隆与原核表达
- 2016年
- 油茶是中国重要的木本食用油料树种,在油茶种子的发育过程中,涉及到一系列调控代谢过程的酶和基因,脂肪酸β氧化多功能蛋白(MFP)是β氧化系统上的一类酶,它完成催化β-氧化途径中的水合与脱氢过程。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到油茶脂肪酸β氧化多功能蛋白基因的cDNA全长序列,命名为CoMFP(Gen Bank登录号为KJ910342)。序列分析表明,该基因cDNA全长为2 541 bp,含有2 178 bp的开放读码框,编码725个氨基酸,分子量为79.033 3 kD,理论等电点pI为9.11,具有六个比较明显的跨膜区,不仅存有反式烯酰CoA水合酶(ECH)信号序列、3羟酰Co A脱氢酶(HCDH)信号序列、ECH基序和磷酸结合基序,也具有相当保守的盐桥、活性位点及五个亚结构域。成功地构建了原核表达载体并在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为79 kD的相应目的蛋白。
- 王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯梅芳芳
- 关键词：油茶克隆原核表达
- 油桐β-酮脂酰-ACP还原酶(KAR)基因的克隆与序列分析
- 2013年
- 以葡萄桐近成熟种子为材料,根据油桐转录组测序分析结果设计引物,利用RT-PCR技术克隆获得了2条KAR基因的全长cDNA,分别命名为Vf_KAR1和Vf_KAR2(GenBank登录号:KF025646,KF025647)。生物信息学分析结果表明,Vf_KAR1和Vf_KAR2基因的CDS长度分别为993 bp和900 bp,分别编码331个和300个氨基酸;与其它物种的KAR氨基酸序列具有较高的相似性,Vf_KAR1与蓖麻的相似度最高,达82%;Vf_KAR2基因与花生、辣椒的相似度高达76%;2条KAR基因的多肽都含叶绿体转运肽,但是都没有信号肽;Vf_KAR1有1个明显的跨膜螺旋拓扑结构和1个疑似跨膜螺旋拓扑结构,Vf_KAR2有2个疑似的跨膜螺旋拓扑结构;肽链都表现为疏水性,都有典型的活化中心三联体(Ser-Tyr-Lys);三级结构都有典型的Rossmann折叠特征。因此,初步推测Vf_KAR1和Vf_KAR2是油桐β-酮脂酰-ACP还原酶KAR基因家族的两个成员。
- 刘美兰谭晓风龙洪旭张琳周俊琴王建勇
- 关键词：油桐生物信息学
- 油茶脂氧合酶基因全长cDNA的克隆与序列分析被引量：8
- 2012年
- 为深入了解脂氧合酶基因在油茶果实成熟过程中的功能及其对油茶油脂品质的影响,本研究以油茶种子的转录组数据库中的脂氧合酶基因(lipoxygenase,LOX)的部分cDNA序列为基础,采用RT-PCR和RACE技术从油茶种子中克隆到此基因的全长cDNA,并其进行了序列分析。该基因全长cDNA为2 698 bp,包括5’非编码区161 bp、3'非编码区131 bp以及一个长2 406 bp的编码区和16 bp的polyA尾巴。该基因编码蛋白质的分子量约为91.65 kDa,等电点为5.255。同时该蛋白二级结构以α-螺旋为主,具有跨膜结构,主要分布在细胞内的叶绿体和细胞质中。经过比对分析,发现油茶LOX基因序列与其他物种LOX基因同源性较高,其编码的氨基酸序列与茶树、葡萄、辣椒、马铃薯的LOX氨基酸序列的同源性高达99%,与油橄榄、烟草、番茄、猕猴桃同源性达到了98%。
- 朱凤云陈鸿鹏谭晓风刘凯王建勇
- 关键词：油茶克隆全长CDNA
- 油茶丙二酰单酰CoA:ACP转酰基酶基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2015年
- 【目的】油茶种仁含油率较低且易遭逆性环境等的影响,这些都严重影响和制约了油茶产业的快速发展。丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶是脂肪酸合成酶(FASⅡ)复合体的组成酶之一,在脂肪酸合成中起着装载作用,它的酶促反应产物丙二酰单酰ACP是脂肪酸合成关键组成部分。开展该基因的功能研究,能为油茶的分子遗传育种奠定基础。【方法】以油茶品种‘华硕’种子为材料,借助其种子转录组和表达谱数据库,通过RACE技术,克隆丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶基因并对该基因进行生物信息学分析。利用常规的酶切连接技术构建基因的原核表达载体,并利用α酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性。【结果】丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶基因的全长c DNA 1 867 bp,含有1 131 bp的开放读码框,编码376个氨基酸,具有58个氨基酸长度的叶绿体转运肽,该基因被命名为Co MCAT(Gen Bank登录号KJ910337)。在malonyl-Co A结合位点和ACP结合位点上分别存在高度保守的基序"GQGXQ"和"GXSXG"。原核表达载体p ET30a-Co MCAT在BL21(DE3)细胞中被成功地诱导表达,目的重组蛋白分子量约为40 k Da。酶活性分析表明,重组蛋白Co MCAT的最佳催化温度为30℃,最佳p H为7.0,比酶活性约为2.384 U·μg-1。【结论】以本实验室构建的油茶转录组数据库为基础,首次克隆获得油茶MCAT基因的全长c DNA序列,构建其原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)中成功诱导表达目的蛋白,并对重组蛋白进行初步的酶活性分析。研究结果为今后进一步深入开展和揭示油茶MCAT基因在油脂合成的代谢过程中的作用奠定基础。
- 王建勇谭晓风陈鸿鹏曾艳玲龙洪旭梅芳芳刘凯
- 关键词：油茶原核表达
- 油茶种子脂肪酸代谢过程7个关键酶基因的克隆与功能研究
- 油茶（Camellia oleifera）是我国重要的木本食用油料树种,与油棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料树种,主要栽培分布于南方丘陵酸性红壤地区。茶油主要由油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸组成,其含量一般在90%...
- 王建勇
- 关键词：油茶脂肪酸代谢RNA干扰
- 文献传递
- 油茶脂氢过氧化物裂解酶基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2014年
- 以油茶近成熟种子为材料,根据油茶EST文库中已知的脂氢过氧化物裂解酶EST序列,利用3’RACE与5’RACE技术,克隆到脂氢过氧化物裂解酶的全长cDNA序列。该基因全长1648bp,,包含一个1476bp开放阅读框长,编码491个氨基酸,5’与3’非编码分别为52bp、121bp。预测该蛋白相对分子量为54.7779KDa,等电点为6.77,是个叶绿体转运肽,N端包含有22个疏水氨基酸残基组成的序列,不仅具有转运肽富含的丝氨酸,还含有大量转运肽中很少存在的脯氨酸。多序列比对发现油茶脂氢过氧化物裂解酶核苷酸序列与茶的相似性达到96%,因此将该基因命名coHPL。
- 王建勇谭晓风龙洪旭陈鸿鹏刘凯朱凤云
- 关键词：油茶基因克隆
- 油茶3羟酰CoA脱水酶基因的克隆与表达分析被引量：6
- 2014年
- 3羟酰CoA脱水酶是一类催化3羟酰CoA脱水转化成为烯酰CoA形式的酶。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料，在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上，采用RACE技术，克隆到一个油茶3羟酰CoA脱水酶基因的cDNA全长，命名为CoHCD（GenBank,登录号KJ910336）。该基因cDNA全长为1145bp，含有666bp的开放读码框，编码221个氨基酸，分子量为25．2kDa，理论等电点pI为9．4，疏水残基占整个氨基酸残基的48．9％，是亲水性蛋白，具有4个比较明显的跨膜区和蛋白质酪氨酸磷酸酶基序“HGXXGXXRS”。在基因cDNA全长序列的基础上，分别成功地构建了原核表达载体、超表达载体和RNA干扰载体，其中，原核表达载体在宿主细胞BL21（DE3）上成功诱导表达，获得表观分子量约为25kDa的相应目的蛋白。实时荧光定量PCR分析表明，在5个不同发育时期的油茶种子中CoHCD高效表达主要集中在8～10月，转录最高峰发生在9月，其表达量在种子发育过程中呈增加趋势。
- 王建勇谭晓风曾艳玲龙洪旭陈鸿鹏刘凯
- 关键词：油茶克隆
- 油茶果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因(CoFBA4)的分子特征与表达分析被引量：6
- 2013年
- 果糖-1，6-二磷酸醛缩酶（fructose-1，6-diphosphatealdolase，FBA，EC4．1．2．13），简称醛缩酶，是糖酵解代谢途径中第4步关键酶，催化果糖-1，6-二磷酸（Fru．1，6-BP）可逆地裂解为磷酸二羟丙酮（DHAP）和3-磷酸甘油醛（G．3-P）（Rutter，1964）。
- 曾艳玲谭晓风蒋瑶刘敏王建勇周俊琴
- 关键词：油茶果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因克隆基因表达亚细胞定位
