王希
- 作品数：10 被引量：107H指数：4
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重大基础研究前期研究专项黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- SMART-SH技术的建立及应用被引量：1
- 2005年
- 文章以构建的东北野生大豆盐胁迫全长cDNA文库为起始材料,通过将SMART方法与减法杂交相结合,首次初步建立了一种直接获取全长差异cDNA的技术,即SMART-SH技术,弥补了现有技术无法直接得到差异表达基因的全长序列这一不足。进一步讨论了该技术的优缺点,及其在构建全长差减cDNA文库上的优势和应用前景。
- 王希李杰朱延明才华柏锡
- 关键词：SMART
- 野生大豆S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及功能分析被引量：27
- 2008年
- 干旱、盐碱和低温等非生物逆境是危害作物诸多因素中最为严重的自然灾害,它可以使作物减产,甚至死亡。目前通过生物技术手段获得可利用的抗性基因是提高植物抗性的重要途径。东北野生大豆具有丰富的基因资源,是基因克隆的理想材料。从低温(4℃)、干旱(30%PEG)及盐胁迫(200mmolL-1NaCl)处理的东北野生大豆幼苗叶片中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链,并以此链为模板,从已构建的盐胁迫全长cDNA文库和东北野生大豆盐胁迫EST数据库中筛选出与渗透胁迫直接相关的EST序列,根据该序列设计一对PCR引物扩增S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶基因的全长序列,经Blast比较分析,确定所获得的SAMS基因全长序列。构建以pBI121为基础的CaMV35S启动子调控的植物表达载体;利用农杆菌介导法将其导入烟草,获得了180株转基因烟草,并进行了低温、干旱和盐胁迫处理,通过测定在不同胁迫处理下的生理指标,分析了基因的功能。野生大豆的SAMS基因在烟草中的超量表达提高了转基因烟草的抗低温、干旱和耐盐能力。
- 樊金萍柏锡李勇纪巍王希才华朱延明
- 关键词：野生大豆SAM合成酶基因克隆功能分析
- 野生大豆DREB基因的筛选与结合功能分析被引量：2
- 2009年
- 以野生大豆(Glycine Soja)为材料,利用酵母单杂交的方法筛选到一个能够与DRE元件(DehydrationResponsive Element)结合转录因子-GsDREB(DRE Binding protein).通过体内和体外结合试验分析,该转录因子能够与DRE元件结合,经序列分析,GsDREB氨基酸序列N-末端含有核定位信号(nuclear localization sig-nal,NLS)、在C-末端含有酸性活性区域(acidic activation region,AAR),在序列内部具有由58个氨基酸编码的、能够与DNA结合的保守区域-DREBP/AP2结构域.该蛋白可能是野生大豆DREB家族的新成员.
- 才华朱延明柏锡王希
- 关键词：非生物胁迫GLYCINESOJA酵母单杂交
- 野生大豆盐胁迫响应基因GsPIP的克隆及其序列分析被引量：3
- 2011年
- 盐胁迫是影响植物生长、发育以至产量的重要因素,野生大豆是优良的非生物胁迫抗性材料,是天然的优质抗性基因库。本研究以耐盐东北野生大豆为试材,利用东北农业大学植物生物工程研究室已获得的基因芯片杂交结果,对植物生物工程研究室构建的野生大豆盐胁迫EST数据库中各EST在胁迫下的表达情况进行了分析,从中选出了1个在高盐、低温、干旱胁迫早期均上调表达的3′-EST,序列分析表明该EST编码质膜结合蛋白(plasmamembrane intrinsic protein,PIP),属于主嵌入蛋白(major intrinsic protein,MIP)家族;通过电子克隆和改进的5′-RACE获得了基因完整的编码区;其翻译产物与含羞草质膜结合蛋白的相似性为90%,将该基因命名为GsPIP。GsPIP基因的翻译产物具有主嵌入蛋白家族特征性的跨膜结构域,无信号肽,与已发现的植物PIP蛋白一致。本研究获得的基因具有自主知识产权,通过进一步的功能分析,可为耐渗透胁迫基因工程研究提供基因资源,并为植物耐渗透胁迫机理研究提供依据。
- 王希李勇柏锡才华纪巍朱延明
- 关键词：野生大豆盐胁迫
- 野生大豆胁迫应答膜联蛋白基因的克隆及胁迫耐性分析被引量：14
- 2010年
- 野生大豆对非生物胁迫具有优良的抗性,是研究胁迫机制、挖掘抗性基因的理想材料。以耐盐野生大豆为试材,利用前期获得的盐胁迫基因芯片杂交结果和EST数据库,筛选出1个响应胁迫的3'-EST,序列分析表明,该EST编码膜联蛋白(annexin,ANN)。通过改进的5'-RACE获得了该基因的完整编码区,翻译产物与拟南芥膜联蛋白的相似性为57%,将该基因命名为GsANN。GsANN基因的翻译产物具有膜联蛋白家族特征性的结构域,无强烈的亲水/疏水性,无信号肽,无跨膜结构域,与已报道的植物ANN蛋白一致。亚细胞定位结果表明GsANN蛋白在细胞内聚集于质膜附近。GsANN基因在野生大豆叶中受盐及干旱胁迫的诱导,超量表达GsANN基因的拟南芥对盐胁迫和干旱胁迫的敏感性提高,揭示了该基因与植物抗性间的关系。
- 王希李勇朱延明柏锡才华纪巍
- 关键词：野生大豆干旱胁迫盐胁迫膜联蛋白
- 5’-RACE接头序列添加方法及接头序列和5’端未知基因完整编码序列的扩增方法
- 5’-RACE接头序列添加方法及接头序列和5’端未知基因完整编码序列的扩增方法，它涉及一种接头序列添加方法及接头序列和基因完整编码序列的扩增方法。它解决现有接头序列添加方法存在的对mRNA 5’末端信息的完整性没有选择性...
- 朱延明柏锡李勇王希纪巍才华
- 文献传递
- 植物亚细胞定位载体卡盒pCEG的构建及验证被引量：4
- 2011年
- GFP基因被广泛地应用于植物转基因以及基因功能验证研究,然而构建与GFP融合的植物表达载体,常会因酶切位点难以选择,而使得载体构建过程复杂,周期长。以含GFP的质粒pCAMBIA-1302为基础,消除此质粒本身的多克隆位点(MCS),并在此质粒GFP基因序列前插入原核表达载体pET-32b的多克隆位点,构建了植物GFP亚细胞定位载体卡盒pCEG;采用农杆菌介导的转化方法,将此载体卡盒pCEG导入模式植物烟草叶片中进行瞬时表达,用激光共聚焦显微镜观察GFP蛋白的亚细胞定位情况,发现GFP蛋白均匀的在细胞质和细胞核中表达,证明此载体卡盒可用于植物基因的亚细胞定位分析,并为构建目的基因与GFP融合的植物表达载体提供了很多可用的酶切位点,对植物基因功能验证提供了分子操作简便的植物表达载体卡盒,具有重要的利用价值。
- 朱丹王希朱延明陈超李勇柏锡才华纪巍
- 关键词：亚细胞定位GFP烟草
- 野生大豆非生物胁迫相关水通道蛋白基因克隆及功能分析
- 低温、高盐、干旱等非生物胁迫是制约我国乃至世界农业生产的重大问题,提高作物的耐胁迫能力,对于充分利用耕地资源、提高粮食产量、解决粮食安全问题具有重大的战略意义。近年来分子生物学与植物基因工程技术迅速发展并日趋成熟,通过分...
- 王希
- 关键词：野生大豆非生物胁迫水通道蛋白基因克隆蒸腾作用
- 野生大豆SAMS同源基因的克隆及分析被引量：1
- 2008年
- 硫腺苷甲硫氨酸作为甲基供体在转甲基反应中起到重要作用。从低温(4℃)、高盐(200 mmol/L NaCl)及干旱(30%PEG)处理的东北野生大豆幼苗叶片中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,应用已知的EST序列设计一对PCR引物扩增SAM合成酶基因的全长序列,最后经BLAST比较分析,确定所获得的SAMS基因序列完整性。所得序列长1185 bp,具有完整的开放读码框,编码394个氨基酸,与棉豆和苜蓿的SAM合成酶基因的核苷酸序列的同源性分别为89%、85%。构建了以pET-32b为基础的原核表达载体并进行原核表达分析,分析SAMS基因的表达情况。为后续的抗逆性功能验证奠定基础。
- 樊金萍柏锡李勇纪巍王希朱延明
- 关键词：野生大豆SAM合成酶基因克隆原核表达
- 低温胁迫对水稻幼苗抗冷性的影响被引量：56
- 2004年
- 分析探讨了低温胁迫恢复正常温度 2 d后 ,水稻幼苗叶绿素含量、根系活力、过氧化物酶活性及细胞膜透性 4个生理指标的变化及其与抗冷性的关系 。
- 王晨光王希苍晶杨丽娟
- 关键词：低温胁迫水稻幼苗抗冷性根系活力过氧化物酶细胞膜透性
