狄勇
- 作品数：5 被引量：13H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胆汁双向电泳差异分析样本纯化制备方法的建立被引量：11
- 2007年
- 目的:建立一种可靠、高效的胆汁样本纯化制备方法用于胆汁蛋白质组双向电泳差异分析。方法:采用梯度SDS-PAGE凝胶电泳的方法比较丙酮、丙酮:甲醇混合液及丙酮:甲醇:磷酸三丁酯混合液及非离子型脱脂剂(CleanasciteTM HC100)的脱脂效果,微量透析管及微量超滤管的脱盐效果及胶体考马斯亮蓝凝胶染色的灵敏度。采用双向荧光差异凝胶电泳比较本组方法与2D-Clean-up Kit对胆汁样本的纯化处理效果。结果:三种沉淀脱脂方法中以丙酮沉淀法效果最佳;非离子型脱脂剂的脱脂效果理想且蛋白回收率高于前者(52.6%比43.7%)。透析法与超滤法脱盐效果均理想,后者耗时短且可以实现蛋白浓缩。胶体考马斯亮蓝染色的灵敏度为10ng。本组方法及2D-Clean-up Kit纯化处理后的胆汁样本均可获得理想的双向电泳图谱,二者分别分离到854和615个蛋白质点。结论:本研究建立了可靠、高效的胆汁样本纯化制备方案,经其处理后的胆汁样本能够满足凝胶双向电泳分析对样本的要求。
- 陈波唐滔郑建伟鲁艳军狄勇邹声泉
- 关键词：蛋白质组学胆汁
- 运用双向荧光差异凝胶电泳分析VLDL致THP-1来源泡沫细胞的形成被引量：1
- 2012年
- 目的运用双向荧光差异凝胶电泳结合质谱技术寻找极低密度脂蛋白(VLDL)致诱导分化的THP-1细胞形成泡沫细胞中的关键蛋白质,以期揭示其致泡沫细胞的机制。方法 THP-1细胞经佛波醇脂(PMA)诱导分化为巨噬细胞,以磷酸盐缓冲液(PBS)孵育为空白对照组、VLDL孵育为实验组。提取细胞总蛋白后分别用荧光染料CY3和CY5标记,以所有样本等量混合作为"内标",用CY2标记,然后将实验组、空白对照组及内标混合后进行二维电泳,扫描图像后经分析的差异蛋白做基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-CPR)分析3种蛋白质(脂肪分化相关蛋白、烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1)mRNA的变化。结果实验组与空白对照组比较,表达量上调蛋白点在1.2倍以上有34个,表达量下调1.2倍以上有48个。通过软件筛选其中14个有差异的蛋白点做MALDI-TOF-MS,其中脂肪分化相关蛋白、热休克蛋白27、人电子转移味蛋白三维结构-链A、s100钙结合蛋白、人过氧化物酶-3-异构体c、辅酶-细胞色素C还原酶核心蛋白I、过氧化物酶烯酰辅酶A水合酶样蛋白、富马酸合酶-异构体d表达增高,烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1、环孢素A结合双肽甘氨酸-脯氨酸复合物、DMGDH蛋白、核内不均一核糖核蛋白L-异构体a、果糖胺3激酶-异构体b表达降低。脂肪分化相关蛋白mRNA表达明显上调,烯醇化酶1、磷酸甘油酸变位酶1 mRNA表达明显下调,与蛋白水平变化一致。结论荧光差异凝胶电泳能在整体上揭示VLDL在致泡沫细胞形成过程中蛋白质水平的变化,经鉴定的蛋白质可能在VLDL致泡沫细胞的形成中发挥重要的作用,为阐明VLDL作用巨噬细胞形成泡沫细胞的机制奠定了基础。
- 鲁艳军田俊狄勇宗义强
- 关键词：极低密度脂蛋白泡沫细胞蛋白质组
- 6His-VP3融合蛋白的表达、纯化及其捕获细胞中相关蛋白的初步探讨被引量：1
- 2007年
- 目的研究人肝癌细胞HepG2与人胎肝细胞L-02中与VP3蛋白相互作用的蛋白组分,以探讨VP3特异性诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用PCR方法克隆vp3的DNA片段,将其插入质粒pET-28a(+)构建含6个组氨酸标签6His-VP3融合蛋白的原核表达载体。利用亲和层析技术制备纯化的6His-VP3融合蛋白作为诱饵,分别从肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02的总蛋白中,通过pull-down技术捕获与VP3相互作用的特异性蛋白质组分。结果获得了高纯度的6His-VP3融合蛋白;以其作为诱饵从HepG2细胞和L-02细胞中捕获到的与VP3作用的相关蛋白质组分存在差异。结论肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02中,与VP3作用蛋白的差异与其在不同细胞中的生物学行为相对应。
- 王阿慧孙军毕昊彭冬君田俊狄勇宗义强屈伸
- 关键词：凋亡素相关蛋白肿瘤特异性
- VLDL诱导THP-1形成泡沫细胞的蛋白质组学研究
- 目的:泡沫细胞是动脉粥样硬化早期的重要特征,LDL、OX-LDL 及 VLDL 均可作用巨噬细胞及单核细胞形成泡沫细胞,泡沫细胞形成的机制目前还不清楚。蛋白质组学是在蛋白质水平上获得对疾病过程、细胞生理生化过程和网络调控...
- 鲁艳军田俊狄勇宗义强王淳本屈伸
- 文献传递
- 利用6His-VP3融合蛋白捕获肿瘤细胞中与其相互作用蛋白的初步探讨
- VP3是鸡贫血病毒的功能蛋白,分子量约14 ku,由121个氨基酸组成。由于 VP3能够特异性的诱导人肿瘤细胞及转化细胞发生凋亡,而对正常细胞没有凋亡诱导作用,因此又被称为凋亡素,即 Apoptin。
- 王阿慧毕昊孙军彭冬君田俊狄勇宗义强屈伸
- 关键词：凋亡素肿瘤特异性
- 文献传递
