汪鸿
- 作品数：22 被引量：84H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项“十五”国家科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 硫氧还蛋白在早产鼠高氧肺损伤中的动态表达及其临床意义被引量：6
- 2007年
- 目的研究高氧肺损伤早产鼠肺组织硫氧还蛋白(Trx)的表达及其临床意义。方法早产新生SD大鼠128只,生后d1随机分为空气组和高氧组,每组64只。分别于d1、4、7、10、14提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx mRNA水平;免疫组织化学方法检测肺组织切片凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3);HE染色观察肺组织病理变化。结果高氧组肺发育明显受阻,与空气组比较,高氧暴露后Trx mRNA表达显著增强,且于d10时达高峰(P<0.05,0.01)。Caspase-3表达显著升高(P<0.05,0.01)。结论高氧上调早产鼠肺组织Trx mRNA的表达;肺组织Trx mRNA的表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发生发展中发挥重要保护作用。
- 陈燕常立文刘伟李文斌汪鸿黄光焰蔡成
- 关键词：高氧硫氧还蛋白半胱氨酸蛋白酶类肺损伤
- 高氧暴露早产大鼠肺组织线粒体蛋白质组学初步研究以及ND4动态表达被引量：2
- 2007年
- 目的初步分析高氧暴露下早产大鼠肺组织线粒体蛋白质表达谱的改变,并对还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位4(ND4)的动态表达进行研究。方法建立高氧暴露早产大鼠动物模型,采用双向电泳检测线粒体蛋白质差异性表达,运用RT-PCR和Western blot方法分别检测ND4mRNA及其蛋白表达。结果与空气组比较,高氧暴露4d导致46种肺组织线粒体蛋白质出现差异性表达;高氧暴露1、4和7d,早产大鼠肺组织ND4mRNA和蛋白表达均较空气对照组显著降低(均P<0.01),10d时,差异则无显著性意义(P>0.05)。结论高氧暴露导致肺细胞线粒体(包括呼吸链)功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素。
- 李文斌常立文容志惠卢红艳汪鸿刘伟蔡成
- 关键词：高氧早产线粒体蛋白质组学
- 维甲酸通过MAPKs信号通路减轻早产大鼠AECⅡ高氧性损伤被引量：5
- 2008年
- 目的:探讨高氧暴露对原代培养的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和凋亡的影响以及维甲酸(RA)的保护作用机制。方法:建立原代培养的早产大鼠高氧暴露AECⅡ模型,采用流式细胞术(Annexin V-PI双标记)检测AECⅡ凋亡,Western blotting检测其磷酸化和总的ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3表达。结果:高氧暴露12h,Annexin Ⅴ(+)PI(-)和Annexin Ⅴ(+)PI(+)标记的AECⅡ数均显著高于空气组(P<0.01),RA具有明显下调作用;同时,高氧暴露显著提高AECⅡ磷酸化ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及caspase-3活性片段表达(P<0.01),明显降低其PCNA表达(P<0.01);RA则显著下调高氧暴露下AECⅡ磷酸化JNK1/2和p38表达以及caspase-3活化片段表达(P<0.01),明显提高磷酸化ERK1/2和PCNA表达(P<0.01)。结论:高氧暴露,导致AECⅡ大量凋亡、坏死,增殖受到抑制;RA通过下调JNK1/2和p38磷酸化水平、上调ERK1/2磷酸化水平,降低AECⅡ坏死、凋亡,促进其增殖,从而发挥拮抗高氧肺损伤的作用。
- 李文斌常立文容志惠卢红艳王华汪鸿刘伟
- 关键词：高氧症维甲酸早产大鼠有丝分裂素激活蛋白激酶类
- 高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NADH脱氢酶亚单位4、5表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC Ⅱ）还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位4、5表达的影响.方法 原代培养Sprague-Dawley（SD）胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至接近汇合状态时随机分为高氧组和正常对照组,高氧组持续暴露于常压高浓度氧中（氧浓度〉90%.CO2浓度5%）,正常对照组仍置于5%CO2培养箱中,两组均继续分别培养6、12、24h;采用免疫细胞化学染色SP法检测NADH脱氢酶亚单位4（DN4）蛋白的表达.采取半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定ND4、NADH脱氢酶亚单位5（ND5）mRNA的表达.结果 （1）SP法结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达增强,12h AEC Ⅱ ND4蛋白的表达减弱,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）,24hAEC Ⅱ ND4蛋白的表达显著减弱（P〈0.05）;（2）RT-PCR检测结果显示,与正常对照组比较,高氧组6h AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA表达增强,差异均无统计学意义（均P〉0.05）.12、24h AECⅡ ND4、ND5 mRNA表达显著减弱（P〈0.05）.结论 持续高氧下调胎鼠AEC Ⅱ ND4、ND5 mRNA和AEC Ⅱ ND4蛋白的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程.
- 黄光焰常立文汪鸿陈燕蔡成
- 关键词：高氧胎鼠
- 维甲酸通过调控MAPK途径减轻早产大鼠高氧肺损伤被引量：16
- 2006年
- 目的探讨维甲酸(RA)对高氧肺损伤保护的作用机制及其与调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的关系。方法剖宫取出SD大鼠孕21 d(足月为22 d)早产鼠,随机分为4组(每组n=12):①空气组;②高氧组;③空气+RA组;④高氧+RA组,①、③组置于空气中,②、④组置于85%O2中,③、④组每日腹腔注射RA(500μg/kg)。4 d后收集肺组织标本,末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫组化SP法检测PCNA表达,Western Blot检测磷酸化/非磷酸化总ERKsJ、NKs或p38表达。结果与空气组比较,高氧暴露使肺组织TUNEL阳性细胞显著增加(P<0.01),PC-NA表达明显受抑(P<0.01),肺泡分隔第二嵴明显减少、气腔增大,磷酸化ERK1/2J、NK1/2和p38表达不同程度增加;RA显著缓解高氧所致上述改变。结论RA通过调节MAPKs活性状况,降低肺细胞凋亡,促进其增殖,是防止高氧肺损伤的重要机制之一。
- 李文斌常立文容志惠张谦慎王华汪鸿刘春梅刘伟
- 关键词：高氧肺损伤丝裂原活化蛋白激酶维甲酸
- Notch信号在胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞与成纤维细胞共培养体系中的表达
- 2007年
- 目的建立肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)与肺成纤维细胞(LF)共培养模型,检测胎鼠AECⅡ共培养和单独培养时Notch1、3受体表达的变化。方法应用Millipore插入式培养皿和Costar六孔板构建AECⅡ/LF共培养模型,将未接种LF的Millicell2PCF插入式细胞培养皿置于接种有AECⅡ的培养板为AECⅡ单独培养组。光镜、透射电镜观察共培养与单独培养条件下AECⅡ大体形态、超微结构;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其AECⅡ增殖活力;反转录PCR法检测其AECⅡ分泌表面活性蛋白C(SP-C)功能,并用荧光定量PCR法检测其AECⅡNotch1、3mRNA的表达。结果AECⅡ/LF共培养组较AECⅡ单独培养组稳定保持了其立方形结构和细胞表型并克隆样生长,增殖活力强。电镜下可见单独培养48hAECⅡ呈现AECⅠ样改变,而共培养AECⅡ维持其正常生理形态。与单独培养组比较,共培养组AECⅡ分泌SP-C明显增多(P<0.05),Notch1 mRNA表达显著升高(P<0.05),而Notch3 mRNA显著降低(P<0.05)。结论AECⅡ同型细胞培养时转分化为AECⅠ,不同型细胞(AECⅡ/LF)共培养抑制其转分化,此转分化过程受Notch信号分子调控。
- 汪鸿常立文卢红艳李文斌蔡成黄光焰陈燕
- 关键词：肺成纤维细胞共培养NOTCH转分化
- 三磷酸腺苷合成酶6、8与早产新生大鼠高氧肺损伤的相关性
- 2007年
- 目的探讨线粒体呼吸链三磷酸腺苷合成酶6、8(ATPase6、8)与早产新生大鼠高氧肺损伤的关系。方法早产新生SD大鼠生后1 d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中,氧体积分数>850 mL/L;空气组置于同一室常压空气中。二组分别于实验后1、4、7、10和14 d提取其肺组织RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ATPase6、8 mRNA表达。结果1.与空气组比较,高氧暴露1 d ATPase6 mRNA表达显著增强(P<0.05);4、7、10 d时无显著性差异(Pa>0.05);14 d又显著增强(P<0.01)。2.高氧组与空气组比较,ATPase8 mRNA表达于1、4、10 d时无显著改变(Pa>0.05);7、14 d时明显增强(Pa<0.05)。结论高体积分数氧暴露诱导线粒体呼吸链中ATPase6、8异常表达,这种变化可能参与早产新生大鼠高氧肺损伤的发病过程。
- 蔡成常立文李文斌刘伟陈燕黄光焰汪鸿
- 关键词：早产高氧肺损伤逆转录聚合酶链反应
- 高氧对早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化的影响被引量：9
- 2006年
- 目的:探讨高氧对早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeIIalveolarepithelialcells,AECⅡ)转分化的影响。方法:原代培养早产大鼠的AECⅡ,建立高氧细胞损伤模型。利用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞的形态变化。用免疫细胞化学染色法检测AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C(surfactantproteinC,SP-C)及Ⅰ型肺泡上皮细胞(typeⅠalveolarepitheli-alcells,AECⅠ)特异性水通道蛋白5(aquaporin5,AQP5)的表达。用RT-PCR和流式细胞术分别检测SP-C、AQP5mRNA及蛋白的表达。结果:随着给氧时间的延长,原代培养的AECⅡ伸展变平,失去其板层体及微绒毛,丧失AECⅡ的特性,获得AECⅠ样外观。伴随其形态学改变,AECⅡ逐渐停止表达其特异性蛋白SP-C,开始表达AECⅠ特异性蛋白AQP5。高氧组给O2后24、48及72h,SP-CmRNA、SP-C+细胞的表达率及荧光指数(fluorescenceindex,FI)较同时间点的空气组明显降低,AQP5的上述指标在24h和48h则较空气组明显增加。高氧组给O2后72h,AQP5的表达开始减弱,与同时间点的空气组相比较无明显差异。结论:高氧诱导的早产大鼠AECⅡ转分化在肺泡上皮细胞损伤的修复中起重要作用。
- 卢红艳常立文汪鸿李文斌王华
- 关键词：转分化高氧肺损伤早产大鼠
- 高氧暴露胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体蛋白质组学初步研究以及ND4动态表达
- 2008年
- 目的初步分析高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar epithelial cell Ⅱ，AECⅡ）线粒体蛋白质表达谱的改变并就NADH脱氢酶亚单位4（NADH—dehydrogenase subunit4，ND4）的动态表达进行研究。方法原代培养胎鼠AECⅡ并随机分为空气组和高氧组，采用双向电泳检测线粒体蛋白差异性表达，运用RT—PCR和Western blot方法分别检测ND4 mRNA及其蛋白表达。结果与空气组比较，高氧暴露24h导致55种AECⅡ线粒体蛋白质出现差异性表达；高氧暴露6、12、24和48h，原代胎鼠AECⅡ ND4 mRNA（1．20±0．12，1．20±0．12，0．69±0．07和1．54±0．10）表达均较对照组（2．3±0．13，4．61±0．43，2．15±0．14和2．21±0．21）显著降低，差异均有统计学意义（P均〈0．01）。高氧暴露12和24h时，原代胎鼠AECⅡ ND4蛋白表达（1．58±0．21和1．33±0．10）较对照组（2．77±0．19和2．23±0．05）下降，差异有统计学意义（P均〈0．01）。结论高氧暴露导致AECⅡ线粒体（包括呼吸链）功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素。
- 李文斌常立文卢红艳容志惠汪鸿刘伟
- 关键词：高氧症线粒体蛋白质类NADH脱氢酶
- 维甲酸对高氧暴露下原代培养的胎鼠肺泡II型上皮细胞和成纤维细胞增殖与凋亡的影响被引量：10
- 2007年
- 探讨高氧暴露对原代培养的胎鼠肺泡II型上皮细胞(AECII)、成纤维细胞(LFs)增殖和凋亡的影响以及维甲酸(RA)的保护作用机制。通过建立高氧暴露原代培养的胎鼠AECII和LFs模型,以RA作为干预方式,采用流式细胞术(膜联蛋白V-PI双标记)检测AECII和LFs凋亡,West-ern印迹检测AECII增殖细胞核抗原(PCNA)、p53及caspase-3表达和LFsPCNA表达。结果发现:(1)与空气对照比较,高氧暴露12h,膜联蛋白V(+)PI(-)和膜联蛋白V(+)PI(+)标记AECII数均显著升高(14.41±1.15vs2.80±0.19,P<0.01;61.07±3.06vs1.49±0.11,P<0.01);RA对空气暴露下AECII坏死、凋亡无明显影响,但明显下调高氧暴露下膜联蛋白V(+)PI(-)和膜联蛋白V(+)PI(+)标记AECII数(8.04±0.79vs14.41±1.15,P<0.01;27.57±2.32vs61.07±3.06,P<0.01)。(2)高氧、RA对LFs坏死、凋亡无明显影响。(3)高氧暴露12h,明显降低AECIIPCNA表达(P<0.01),显著提高其p53(P<0.01)和caspase-3活性片段(P<0.01)表达;RA显著上调高氧暴露下AECIIPCNA表达(P<0.01),下调其p53和caspase-3活化片段表达(P<0.01)。(4)高氧、RA对LFsPCNA表达无明显影响。由此提示,高氧暴露,导致AECII大量凋亡、坏死,增殖受到抑制,同时,LFs所受影响较小,两种细胞对高氧暴露的差异性行为可能是导致未成熟肺组织异常重构的重要原因;RA通过降低AECII凋亡、坏死从而对高氧肺损伤具有保护作用。
- 李文斌常立文容志惠王华卢红艳汪鸿刘伟
- 关键词：高氧维甲酸肺成纤维细胞
