毛吉炎
- 作品数：24 被引量：33H指数：4
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- 特异促进肝细胞CYP3A4基因高表达的慢病毒表达载体及其构建方法与应用
- 本发明提供一种特异促进肝细胞CYP3A4基因高表达的慢病毒表达载体，包括pLVX-AcGFP-C1表达载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和CYP3A4基因cDNA序列；所述多克隆位点包括Xho I酶...
- 徐新云毛侃琅何晓阳毛吉炎应明
- 文献传递
- 细胞色素氧化酶2E1基因沉默对三氯乙烯致L02肝细胞毒性的影响被引量：5
- 2013年
- 目的通过RNA干扰技术，构建细胞色素氧化酶（CYP）2E1基因慢病毒表达载体，研究CYP2E1基因沉默对三氯乙烯（TCE）致肝细胞毒性的影响。方法设计合成shRNA片段连接到慢病毒载体，筛选单菌落，经聚合酶链式反应（PCR）和测序鉴定后提取质粒，转导L02肝细胞中，筛选CYP2E1缺陷型细胞，利用荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法（Westernblot）鉴定干扰效果。以不同浓度（0、0．25、0．50、1．00、2．00、4．00mmol/L）TCE分别对L02肝细胞和CYP2E1基因沉默细胞染毒，测定TCE对2种细胞的存活率及IC50，应用流式细胞仪测定细胞凋亡率，采用实时荧光定量PCR检测细胞凋亡基因和癌基因mRNA表达水平。结果正常L02肝细胞对TCE的IC50为15．1mmol／L，CYP2E1沉默细胞对TCE的IC50为23．6mmol／L。随TCE剂量增加两组细胞凋亡率升高，2．0、4．0mmol／LTCE染毒剂量时，CYP2E1沉默细胞的凋亡率明显低于L02肝细胞组，差异有统计学意义（P〈O．05或P〈0．01）。TCE染毒后CYP2E1沉默细胞的抗凋亡基因Bcl-2表达水平比L02肝细胞升高15％-60％，凋亡基因caspase-3和caspase-9表达水平比L02肝细胞下降30％-60％，差异均有统计学意义（尸〈O．01）。抑癌基因p53表达水平明显高于L02肝细胞，升高81％-278％；癌基因c．fos和k-ras明显低于L02肝细胞组，下降20％～68％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论利用慢病毒介导RNA干扰技术成功构建了CYP2E1基因沉默细胞。沉默CYP2E1基因可降低TCE对肝细胞毒性，抑制部分凋亡基因与癌基因表达，提示CYP2E1基因在三氯乙烯代谢过程中发挥重要作用，与三氯乙烯毒性存在一定关系。
- 徐新云毛吉炎毛侃琅刘国红慈捷元杨细飞吴德生黄海燕张然黄新凤
- 关键词：三氯乙烯慢病毒载体基因沉默
- 三氯乙烯对肝细胞代谢酶基因与凋亡基因表达的影响被引量：13
- 2011年
- 目的:探讨三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)对人L02肝细胞代谢酶基因CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA表达水平的影响。方法:以1%二甲亚砜(DMSO)为溶剂对照,用不同浓度TCE(0.25、0.5、1.0和2.0mmol/L)染毒L02肝细胞24h,另外用同一浓度1.0mmol/L TCE染毒细胞3～24h,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术检测L02肝细胞中CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA的表达。结果:不同剂量TCE染毒后CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1 mRNA表达明显上升,CYP1A2升高36%～726%,CYP3A4升高56%～525%,CYP2E1升高15%～94%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2表达水平也明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。用1.0mmol/L TCE染毒3～24h,同样发现肝代谢酶基因和凋亡基因表达增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:TCE可诱导L02肝细胞中代谢酶基因及凋亡基因表达变化,肝代谢酶基因和凋亡基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。
- 徐新云刘月峰柯跃斌毛吉炎袁建辉周丽杨淋清杨细飞黄海燕洪文旭
- 关键词：三氯乙烯L-02肝细胞代谢酶凋亡基因
- 三氯乙烯药疹样皮炎患者免疫相关基因的表达水平被引量：5
- 2011年
- 目的探讨三氯乙烯（TCE）药疹样皮炎患者外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T—bet的mRNA表达。方法选取TCE药疹样皮炎患者8例为病例组，8例健康人为对照组，抽取两组对象的外周血，采用实时荧光定量PCR（real—timequantitativePCR）技术检测外周血免疫相关基因Foxp3、GATA3、CTLA4、T—bet的mRNA的表达水平。结果与对照组比较，病例组Foxp3、GATA3、CT—LA4基因mRNA表达水平分别升高115％、97％和241％，差异有统计学意义（P〈0．01）；与对照组比较，病例组T—bet基冈mRNA表达水平下降47％，差异有统计学意义（P〈O．01）。结论TCE药疹样皮炎的部分免疫相关基斟表达水平发生明显改变，这些基因可能在TCE引起的变态反应中发挥重要作用。
- 徐新云刘月峰易娟柯跃斌袁建辉黄海燕毛吉炎毛侃琅
- 关键词：三氯乙烯皮炎超敏反应基因表达
- CYP3A4高表达细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响
- 目的:构建CYP3A4基因高表达载体,转染L02肝细胞,建立CYP3A4高表达细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响。方法:根据GenBank提供的CYP3A4基因cDNA序列设计引物,PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒高表...
- 毛侃琅徐新云毛吉炎
- 关键词：肝细胞CYP3A4慢病毒载体三氯乙烯
- 文献传递
- CYP2E1基因RNA干扰载体的构建与表达被引量：4
- 2012年
- 目的:构建CYP2E1基因shRNA慢病毒表达载体,为研究CYP2E1在药物代谢和环境污染物代谢中的作用提供技术支持。方法:通过NCBI检索CYP2E1序列,设计合成3对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体PLKO.1-puro,将重组质粒转化到感受态JM107中。挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒。将质粒和包膜蛋白质粒共转染到293FT细胞,收集病毒上清,转导肝细胞L02,利用嘌呤霉素筛选得到CYP2E1缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果结果:PCR和测序结果证明双链shRNA已经正确插入慢病毒载体PLKO.1-puro,共转染293FT细胞得到高滴度病毒,转导L02细胞筛选出CYP2E1基因沉默细胞,荧光定量PCR检测shRNA3的最高抑制效率为86.9%,Western blot鉴定shRNA3基本无CYP2F1表达。结论:利用慢病毒介导RNAi技术成功构建了CYP2E1基因沉默细胞。
- 毛吉炎徐新云何晓阳毛侃琅黄海燕刘庆成
- 关键词：CYP2E1RNA干扰慢病毒
- 人支气管上皮细胞聚-ADP-核糖水解酶缺陷细胞株的构建及鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的建立高效、稳定的人支气管上皮细胞(16HBE)的聚-ADP-核糖水解酶(PARG)缺陷细胞株,为研究PARG在环境毒物诱导细胞损伤中的作用及了解聚-ADP-核糖基化反应的功能奠定基础。方法设计并合成能编码特异靶向人PARG基因的短发夹RNA(shRNA)的oligo DNA,将之插入到真核表达载体plko.1-puro中构建重组质粒,鉴定成功后转染至正常的16HBE细胞中,RT-PCR及western blot检测完成筛选细胞株的PARG基因及蛋白水平的表达,并使用流式细胞仪分析构建成功细胞株的生长周期变化。结果重组质粒测序鉴定正确;RT-PCR及western blot检测显示最终选定的缺陷细胞株干扰效率达80%以上,效果显著(与正常细胞相比,P<0.05);且缺陷细胞株的生长周期未见明显变化(P>0.05)。结论该研究成功构建了高效、稳定的人支气管上皮细胞的PARG缺陷细胞株,为阐明ADP-核糖基化反应的作用机制及其生物学效应提供了可靠的平台。
- 蔡剑锋黄海燕刘建军杨淋清吴德生夏菠毛吉炎胡恭华刘庆成李习艺庄志雄
- 关键词：慢病毒载体
- 三氯乙烯所致职业病的发病机制与防治技术研究
- 李智民徐新云张健杰柯跃斌刘国红王金林毛侃琅邱少宏李辉毛吉炎司徒洁刘璐刘健林辉郭妍
- 所属科学技术领域：预防医学与卫生学。主要技术内容：该项目重点开展了三氯乙烯（简称TCE）发病机制研究、临床治疗技术和现场干预措施研究三方面。三氯乙烯发病机制研究：率先开展免疫相关基因、肝代谢酶基因、基因多态性、分子克隆、...
- 关键词：
- 关键词：职业病三氯乙烯发病机制
- Graves病患者外周血中树突状细胞及相关细胞因子的变化被引量：1
- 2015年
- 目的检测Graves病人外周血细胞因子和树突状细胞(DCs)不同亚群的数量和表达情况,初步探讨DCs细胞亚群在疾病中的作用。方法利用流式细胞仪检测30例Graves病患者和30名健康体检者的外周血树突状细胞亚群数量,同时利用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)及IL-6等细胞因子的水平。结果测得Graves组髓样树突状细胞(p DC)和浆细胞样树突状细胞(m DC)值均高于正常对照组。ELISA检测细胞因子发现,Graves患者血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6水平均高于正常对照组,其中TNF-α显著升高(P<0.01),而IL-2水平显著低于对照组(P<0.01)。结论 Graves病人中p DC和m DC水平升高,细胞因子分泌失调,Th1/Th2失衡,从而导致机体自身免疫反应的产生。
- 吴嘉谢谦张宁波毛吉炎袁建辉
- 关键词：GRAVES病树突状细胞细胞因子
- CYP3A4沉默细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的构建CYP3A4基因沉默载体,转染L02肝细胞,建立CYP3A4沉默细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响。方法根据GenBank提供的CYP3A4基因mRNA序列设计合成shRNA,将shRNA连接到pLKO.1-puro中,将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到CYP3A4沉默细胞株,通过荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP3A4沉默细胞进行染毒12h,观察凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)表达变化。结果测序证明插入pLKO.1-puro载体的干扰序列与设计的序列一致,荧光定量PCR检测CYP3A4沉默细胞CYP3A4基因表达比正常L02肝细胞下降77.3%,Western blot实验显示CYP3A4沉默细胞CYP3A4蛋白表达水平比正常L02肝细胞下降84.6%。CYP3A4沉默细胞经三氯乙烯染毒后Bcl-2表达水平显著高于L02细胞的表达水平;Caspase-3表达水平无明显改变;Caspase-8仅在TCE高剂量组表达下降;Caspase-9在TCE剂量≥1.0 mmol/L表达水平下降;癌基因c-fos、c-myc、k-ras和p53表达水平都有一定程度下降,部分剂量组存在显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论三氯乙烯对正常肝细胞和CYP3A4沉默细胞凋亡基因和癌基因表达存在明显差异,提示CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素,与三氯乙烯毒性存在一定关系。
- 徐新云毛侃琅袁建辉毛吉炎吴德生黄海燕谢杏秦逍云谭琴
- 关键词：肝细胞CYP3A4慢病毒载体三氯乙烯
