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iNOS基因重组逆转录病毒的包装及高滴度病毒液的制备被引量：1: 2006年; 目的利用逆转录病毒载体PLXSN介导iNOS基因转染,为逆转录病毒介导的iNOS转基因防治血管移植术后再狭窄的研究奠定实验基础。方法采用QIAGEN plasmid Maxi Kit纯化PLXSN-iNOS;通过脂质体介导的DNA转染法将PLXSN-iNOS导入包装细胞PA317中;经G418筛选获得抗性克隆,命名为PA317/iNOS;提取抗性克隆细胞基因组DNA,用PCR进行鉴定;用NIH3T3细胞测定病毒上清滴度。结果PA317/iNOS细胞能稳定合成和分泌重组逆转录病毒颗粒,并在约142 bp处扩增出特异的片段;PLXSN-iNOS病毒上清的最高滴度为1.6×106CFU/mL。结论逆转录病毒载体PLXSN能有效介导iNOS基因的转染。; 张子力林京黄晓玲韩涛; 关键词：一氧化氮合酶基因转移逆转录病毒

一氧化氮和花生四烯酸在弓形虫侵染宿主细胞中的作用: 林建银彭碧文郑春福林京胡建石; 一、课题来源与背景：　　本课题为自选课题。弓形虫病是重要的人兽共患寄生虫病，严重危害人类健康和优生优育政策。因此弓形虫感染是一个严重的世界性公共卫生问题。　　二、研究目的与意义：该研究主要探讨一氧化氮（NO）和花生四烯酸...; 关键词：; 关键词：弓形虫花生四烯酸一氧化氮

iNOS转基因在血管平滑肌细胞的表达: 2006年; 目的研究逆转录病毒介导诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因在体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)中的表达。方法通过脂质体介导的DNA转染法将PLXSNiNOS导入PA317细胞中;经G418筛选获得抗性克隆;用NIH3T3细胞测定病毒上清滴度;将病毒上清转染体外培养的VSMC;采用RT-PCR、Westernblot检测VSMC内iNOS mRNA和蛋白的表达。结果PLXSNiNOS转染体外培养的VSMC 48 h后,在VSMC内可检测到外源性iNOS mRNA和蛋白;而用PLXSN转染体外培养的VSMC 48 h后未能检测到外源性iNOSmRNA和蛋白表达。结论逆转录病毒介导iNOS基因可高效转染体外培养的VSMC,并在细胞内表达iNOS蛋白。; 林京张子力黄晓玲韩涛; 关键词：一氧化氮合酶基因转移逆转录病毒科

外源性一氧化氮对弓形虫速殖子凋亡的诱导作用被引量：24: 2001年; 目的　探讨一氧化氮 (NO)是否能诱导弓形虫速殖子凋亡。方法　采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的原位末端标记法 (TUNEL)、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳检测弓形虫速殖子凋亡的特征。结果　TUNEL标记法检测表明 ,NO供体亚硝基铁氰化钠 (SNP)可诱导弓形虫速殖子凋亡 ,并呈剂量和时间依赖性 ;NO清除剂 ,N 乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的弓形虫速殖子凋亡 ;不含NO的SNP类似物 ,铁氰化钾不能诱导弓形虫速殖子凋亡。透射电镜下见SNP处理 15～ 2 0h的速殖子具有凋亡的典型形态学特征 :核染色质凝集、核固缩、核碎裂和凋亡小体形成。琼脂糖凝胶电泳显示SNP处理的弓形虫速殖子DNA片段呈现凋亡特征性的梯形条带。; 林京胡建石林建银; 关键词：一氧化氮刚地弓形虫细胞凋亡

一氧化氮诱导弓形虫速殖子凋亡及其钙信号机制: 目的:探讨一氧化氮(Nitric Oxide,NO)能否诱导弓形虫速殖子凋亡以及Ca<'2+>信号传导途径是否参与NO诱导的虫体凋亡.方法:采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记法(TUNEL)、透射电镜和...; 林京; 关键词：一氧化氮刚地弓形虫钙; 文献传递

亚硝基铁氰化钠处理的弓形虫速殖子的超微结构特征被引量：1: 2001年; 目的　观察一氧化氮 (NO)供体亚硝基铁氰化钠 (SNP)处理的弓形虫速殖子的超微结构特征。方法　应用透射电镜观察SNP处理的速殖子的超微结构。结果　发现SNP处理的速殖子大部分具有凋亡的典型形态学特征 :核染色质凝集 ,核固缩 ,核碎裂 ,凋亡小体形成 (个别速殖子形态表现为胀亡细胞、溶解性坏死细胞和坏死型凋亡细胞特征 )。; 林京胡建石林建银; 关键词：弓形虫超微结构

生物化学双语教学探索被引量：8: 2006年; 生物化学双语教学是医学生掌握生物化学领域最新知识和技能,具备国际交流能力的需要。针对本校生物化学双语教学的实施情况及实施效果,对双语教学中存在的问题及其解决办法进行探讨。; 林京蔡文秀盛键黄山杨俐丽; 关键词：生物化学双语教学高等医科院校

改良植块贴壁法建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型被引量：16: 2006年; 目的:建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型。方法:参照传统的主动脉平滑肌细胞培养方法,在动物体重、中膜的取材、植块贴壁过程、培养基选择、细胞传代等多个关键环节进行改进,成功建立了大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型;用倒置相差显微镜对培养细胞进行形态学观察,用特异性α-SM-actin单克隆抗体免疫组织化学对培养细胞进行鉴定。结果:台盼蓝检查传代细胞的存活率大于96%;培养细胞排列呈梭形及“峰”“谷”状的结构特征;免疫组织化学染色鉴定培养细胞中的平滑肌细胞的纯度为97%。结论:此培养方法可作为研究血管平滑肌细胞生物学行为和移植血管再狭窄机制的有效模型。; 林京张子力; 关键词：细胞培养

一氧化氮经钙信号转导途径诱导弓形虫速殖子凋亡被引量：4: 2003年; 目的　为探讨胞浆Ca2 + 是否为一氧化氮 (NitricOxide,NO)诱导弓形虫速殖子凋亡的重要信号分子。方法　采用脱氧核苷酸末端转移酶 (TdT)介导的缺口末端标记法 (TUNEL)、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡以及应用Fura - 2荧光负载技术测定胞浆游离钙浓度 [Ca2 + ]i。结果　NO供体亚硝基铁氰化钠 (Na2 Fe(CN) 5NO ,SNP)诱导弓形虫速殖子凋亡过程中胞浆 [Ca2 + ]i明显升高。NO清除剂 ,N -乙酰半胱氨酸能明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡及SNP诱导的速殖子胞浆[Ca2 + ]i升高 ,而不含NO的SNP类似物 ,铁氰化钾 [K3 Fe(CN) 6]不能诱导速殖子凋亡及其胞浆 [Ca2 + ]i升高。胞外钙螯合剂EGTA ,和L型电压依赖性钙通道阻滞剂异搏定 ,完全或部分抑制SNP引起的速殖子胞浆 [Ca2 + ]i升高 ,胞内钙螯合剂BAP TA/AM及胞外钙螯合剂EGTA明显抑制SNP诱导的速殖子凋亡。结论　证明NO的供体SNP诱导弓形虫速殖子凋亡主要通过促进胞外钙内流 ,胞浆 [Ca2 + ]i升高所致。; 林京林建银彭碧文胡建石; 关键词：一氧化氮弓形虫钙

弓形虫速殖子细胞质游离钙浓度的测定被引量：2: 2000年; 目的　研究弓形虫与宿主细胞之间相互作用的钙通道机制。　方法　以急性期感染小鼠腹水收集的RH株刚地弓形虫速殖子为材料 ,采用荧光染料 Fura- 2与细胞质游离钙结合 ,通过荧光分光光度计技术和 SuperIon Probe Software计算机软件测定弓形虫速殖子细胞质游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)。　结果　正常弓形虫速殖子[Ca2 + ]i为 (2 0 5 .0 2± 18.6 ) nm ol/ L,符合文献报道的静息状态下真核细胞 [Ca2 + ]i浓度范围。　结论　本方法简便、易行 ,相对费用低。; 林京胡建石林建银; 关键词：荧光光度测定法弓形虫

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林京