杨应彬
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 供职机构：重庆大学生物医学工程联合学院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 含短C肽人胰岛素原类似物DesB^30在毕赤酵母中的表达及纯化被引量：6
- 2008年
- 合成含短C肽AAK,并去掉B链第30位苏氨酸(T)的人胰岛素原类似物:HMPIDesB30(human mini-proinsulin des B30)的cDNA,将其插入大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒pPIC9K.用电转移的方法将重组质粒HMPIDesB30/pPIC9K转入甲醇酵母GS115.用含不同G418浓度的YPD平板筛选高拷贝重组子.经优化条件下的高密度发酵,发酵液用SIPI-40大孔树脂吸附,大孔吸附树脂洗脱液经SP柱进一步纯化后,再用10～20mmol/L Zn2+沉淀,能得到纯度为95%的HMPIDesB30.通过16.5%Tricine SDS-PAGE、HPLC和质谱分析,表达产物分子质量与理论分子质量相符,经高密度发酵,表达量可达1.0g/L.纯化回收率可达60%.说明人胰岛素原类似物HMPIDesB30能在甲醇酵母中高效分泌表达,并能通过经济有效的方法纯化.
- 高剑坤蔡绍皙范开冯强陈海蓉张益胡伟杨应彬
- 关键词：人胰岛素原甲醇酵母
