李青
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
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- ZCWCC1蛋白在L02肝细胞脂肪变性中的表达变化被引量：2
- 2015年
- 目的研究ZCWCC1蛋白在人L02肝细胞脂肪变性中的表达变化并探讨其机制。方法培养中加用500μmol/L的油酸处理L02肝细胞,建立肝细胞脂肪变性体外模型,采用油红染色评价脂质蓄积程度,采用免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察ZCWCC1蛋白在L02肝细胞脂肪变性时的表达改变,以Western blot对其进行半定量评价,并使用赖氨酸蛋白酶抑制剂N-乙基马来酰亚胺(N-Ethylmaleimide,NEM)及蛋白酶体抑制剂MG132对ZCWCC1蛋白表达变化的相关机制进行初步探讨。结果油红染色及细胞甘油三酯含量测定证明L02肝细胞脂肪变性体外模型成功建立,激光共聚焦显微镜观察发现ZCWCC1蛋白主要定位在胞核内,其荧光信号随油酸诱导时间延长而减弱,Western blot检测结果显示,ZCWCC1表达水平也随油酸诱导时间延长(0、3、6、12、24、48 h)而降低[(56 283±303)、(56 753±539)、(55 561±996)、(56 257±326)、(48 339±712)、(43 022±2 198),P<0.01]。NEM处理可使ZCWCC1降解增加,MG132处理可逆转ZCWCC1在L02肝细胞脂肪变性中的下降趋势。结论 ZCWCC1蛋白在L02肝细胞的脂肪变性过程中表达下降,可能与泛素-蛋白酶体途径有关。
- 王涛雷增杰王斌李青王春华熊吉赖姝婕刘琴陈东风
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病脂肪变性L02肝细胞泛素-蛋白酶体途径
- 巨大后颅底沟通性脑膜瘤切除术的护理
- 2000年
- 张燕杜淑兰罗晓娟李青
- 关键词：脑膜肿瘤切除术护理
- 过表达MORC2通过下调p53含量抑制L02肝细胞脂肪变性
- 2015年
- 目的研究过表达MORC2对人L02肝细胞脂肪变性程度的影响及可能机制。方法利用慢病毒转染技术在L02肝细胞中过表达MORC2,qRT-PCR及Western blot鉴定过表达效果后,对L02肝细胞进行脂肪变性诱导,测定细胞甘油三酯(triglyceride,TG)含量并比较过表达前后L02肝细胞的脂肪蓄积程度;利用芯片技术对过表达MORC2前后的基因表达谱进行检测与Pathway分析,筛选过表达MORC2时发生变化的通路并选择对脂代谢有调控作用的p53进行研究;Western blot检测在L02肝细胞脂肪变性诱导时过表达MORC2对p53蛋白含量的影响;在过表达MORC2的基础上对L02肝细胞过表达p53,qRT-PCR及Western blot鉴定p53过表达效果后,通过TG测定观察过表达p53对过表达MORC2改变的L02肝细胞脂肪蓄积程度产生的影响。结果 qRT-PCR及Western blot证明过表达MORC2成功;过表达MORC2的L02肝细胞在脂肪变性诱导后TG含量较MORC2正常表达的L02肝细胞明显降低(P<0.01);基因表达谱芯片及Pathway分析显示脂代谢调控相关的p53通路在过表达MORC2后发生变化;Western blot显示过表达MORC2后,L02肝细胞中p53蛋白水平在脂肪变性诱导前后均降低;qRT-PCR及Western blot验证p53过表达成功,且过表达p53可部分解除MORC2对L02肝细胞脂肪变性的缓解作用。结论过表达MORC2可通过下调p53从而缓解肝细胞脂肪变性。
- 王涛雷增杰王斌李青王春华刘琴魏艳玲王军陈东风
- 关键词：非酒精性脂肪性肝病脂肪变性L02肝细胞P53
- 巨噬细胞表型转换在NAFLD发生过程中的可能作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者网膜脂肪、皮下脂肪中巨噬细胞数量及不同表型,以及其与NAFLD严重程度的关系及意义。方法选择2012年4～12月于第三军医大学大坪医院野战外科研究所住院的NAFLD伴单纯性胆囊结石患者27例(NAFLD组),以及同期单纯性胆囊结石但排除NAFLD及其他一切肝病的肝功能正常的单纯性胆囊结石患者28例(非NAFLD组)。对两组患者的年龄、性别、体质量指数(BMI)、腹围、血糖、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素、游离脂肪酸(FFA)进行比较。使用CD68标记巨噬细胞、CD11C标记M1亚群巨噬细胞,CD206标记M2亚群巨噬细胞,免疫组织化学染色检测其网膜脂肪组织、皮下脂肪组织的巨噬细胞及M1亚群,M2亚群数量。结果 NAFLD组和非NAFLD组的年龄、性别、腹围、血糖、ALT、AST、总胆红素(TB)、FFA比较,差异无统计学意义(P>0.05)。而BMI、胰岛素、HOMA指数、TG在NAFLD组明显高于非NAFLD组,差异有统计学意义(P<0.05)。在NAFLD组中,网膜脂肪M1亚群、皮下的脂肪M1亚群及M2亚群巨噬细胞数量明显增高,与非NAFLD组比较,差异有统计学意义(P<0.01),三者与NAFLD活动度积分(NAS)评分呈正相关(r=0.465、r=0.657、r=0.496,P<0.05)。其中网膜及皮下均以M1亚群巨噬细胞增高明显(P<0.01)。网膜及皮下脂肪组织的M1/M2在NAFLD组中较非NAFLD组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),但与NAS评分相关不显著(r=0.168、r=0.242,P>0.05)。结论 NAFLD患者存在胰岛素抵抗及血脂代谢紊乱,网膜脂肪及皮下脂肪中的巨噬细胞数量及其表型转换可能参与了NAFLD的疾病进展。
- 邵小娟王晓敏王斌熊吉李青陈东风
- 关键词：巨噬细胞表型转换非酒精性脂肪性肝病
- 沉默PKCδ表达对L02肝细胞脂肪变性和内质网应激的影响被引量：1
- 2014年
- 目的研究蛋白激酶Cδ亚型(protein kinase Cδ,PKCδ)与肝细胞脂肪变性、内质网应激的关系,探讨其在非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)发病机制中的作用。方法用混合脂肪酸构建人正常肝细胞L02脂肪变性模型,油红O染色和甘油三酯(TG)试剂盒检测细胞脂变程度,实时荧光定量PCR检测PKCδ、Bip、XBP-1s mRNA表达,Western blot检测其蛋白表达。通过siRNA瞬时转染技术沉默PKCδ在L02细胞中的表达后观察上述指标表达变化。结果油酸和棕榈酸酯2∶1混合比例能够成功诱导肝细胞脂肪变性,与对照组单个细胞脂变面积(14.47±9.28)和TG含量(2.30±0.62)μg/mg相比,脂肪酸16 h组脂变面积(333.06±42.36)和TG含量(30.86±6.24)μg/mg均显著增加(P<0.05)。脂肪酸组肝细胞PKCδ、Bip、XBP-1s mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高(P<0.05),具有时间依赖性。在相同脂肪酸诱导液处理的条件下,PKCδsiRNA转染组细胞脂变程度(30.92±1.29)%较对照组(55.32±6.58)%明显减轻(P<0.05),且PKCδsiRNA转染组Bip、XBP-1s的表达较对照siRNA转染组明显降低。结论 PKCδ在NASH形成发展中发挥重要作用,沉默PKCδ能够通过抑制内质网应激减轻肝细胞脂肪变性程度。
- 赖姝婕王军王斌魏艳玲熊吉李青李砚樊丽琳陈东风
- 关键词：非酒精性脂肪性肝炎蛋白激酶C肝细胞脂肪变性内质网应激
- 肝星状细胞具有向肝细胞样细胞分化的干细胞潜能被引量：4
- 2013年
- 目的探讨肝星状细胞是否能体外诱导分化为肝细胞样细胞以及在这过程中某些干细胞标记物的表达和变化。方法采用标准胶原酶灌注联合percoll密度梯度离心法提取并纯化原代大鼠肝星状细胞,免疫荧光鉴定细胞表型;将原代肝星状细胞分为对照组和实验组进行体外培养,对照组肝星状细胞不加任何细胞因子培养24 h,实验组肝星状细胞加入bFGF 20μg/L、FGF420μg/L、HGF 20μg/L、IL-6 1μg/L细胞因子诱导7 d;倒置相差显微镜下观察诱导细胞形态的变化,Real-time PCR和细胞免疫荧光技术检测肝星状细胞诱导前后肝细胞ALB、AFP mRNA和蛋白的表达情况,以及诱导前后干细胞标记物mRNA和蛋白水平的表达及变化。结果①通过胶原酶灌注联合percoll密度梯度离心法获得的大鼠肝星状细胞,其特异性蛋白Desmin和GFAP表达阳性率≥95%。②实验组大鼠肝星状细胞经过bFGF、FGF4、HGF、IL-6等细胞因子诱导7 d后,与对照组细胞相比细胞形态由星形变为类圆形或多角形,转录水平出现肝细胞特异性标记物ALB的表达(P<0.01)和AFP的表达(P<0.05),同时实验组ALB和AFP蛋白表达呈阳性,而对照组则呈阴性。③实验组大鼠肝星状细胞经过bFGF、FGF4、HGF、IL-6等细胞因子诱导7 d后,与对照组相比干细胞标记物P75NTR转录水平表达下降(P<0.05),CD90、c-kit、sox-2、oct-4等转录水平表达显著下降(P<0.01),并伴有干细胞标记物蛋白水平的表达下调或无表达。结论初步证明肝星状细胞可能具有潜在的干细胞特性,在体外可诱导分化形成肝细胞样细胞,在诱导过程中肝星状细胞的干细胞标记物明显下调。
- 罗茜王斌雷增杰李青李砚熊吉陈潇迪张霹雲魏艳玲王军陈东风
- 关键词：肝星状细胞干细胞细胞分离分化
- 肝细胞脂肪变性模型中Sec61α的表达及可能作用机制被引量：4
- 2014年
- 目的探讨肝细胞脂肪变性模型中Sec61α的表达及可能机制。方法用软脂酸与油酸混合物诱导L02肝细胞发生脂肪变性,建立非酒精性脂肪性肝病肝细胞体外模型,按0、2、4、8、12 h及16 h收获细胞;随后应用Sec61抑制剂EeyarestatinⅠ处理肝细胞,分为正常对照组、脂肪变性组、DMSO组及抑制剂组,通过油红O染色、qRT-PCR及Western blot检测Sec61α、GRP78、GRP94、及Bcl-2的表达变化。结果软脂酸与油酸混合物成功诱导肝细胞发生脂肪变性。与对照细胞相比,脂肪变肝细胞Sec61αmRNA相对表达量在脂肪变早期下降(2、4 h,P>0.05),晚期升高(8、12 h,P<0.05);GRP78在8 h开始升高,16 h达峰(P<0.01)。Sec61α与GRP78的蛋白水平与mRNA水平表达在时间梯度上变化一致。EeyarestatinⅠ处理显著减轻肝细胞脂肪变程度;与脂肪变性组相比,抑制剂组肝细胞Sec61α、GRP78明显降低(P<0.01),GRP94、Bcl-2则显著升高(P<0.01)。结论 Sec61α可能通过调节肝细胞内质网应激,参与肝细胞脂肪变的形成。
- 王军黄殿静赖姝婕熊吉魏艳玲李青李砚陈潇迪王斌陈东风
- 关键词：脂肪变性内质网应激GRP78GRP94BCL-2
