李青
- 作品数：14 被引量：43H指数：4
- 供职机构：暨南大学第二临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD4^+CD25^+T细胞在特应性皮炎患儿外周血中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨CD4^+CD25^+T细胞在特应性皮炎发病中的可能作用。方法:用流式细胞仪对40例AD患儿和45例健康儿童外周血CD4^+CD25^+、CD4^+、CD25^+淋巴细胞亚群等进行检测,并结合临床资料进行相关分析。结果:AD儿童组CD4^+CD25^+/CD4^+与对照组相比明显升高(P=0.018,P<0.05),婴幼儿组无明显差异(P=0.15,P>0.05),两组CD4^+、CD25^+细胞相比、轻中重组两两相比、局限型与泛发型相比,其差异均无统计学意义(均大于0.05)。结论:CD4^+CD25^+调节性T细胞可能在特应性皮炎的发病中起一定的作用,但对病情的判断无重要意义。
- 张雅洁李青李青
- 关键词：CD4^+CD25^+T细胞CD4^+T细胞CD25^+T细胞
- 移植途径对人脐带间充质干细胞治疗小鼠糖尿病效果的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:观察不同途径移植人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对小鼠糖尿病的治疗效果。方法:利用增强绿色荧光蛋白和萤光素酶报告系统(EGFP/Luc)标记hUCMSCs,通过胰腺包膜下途径或尾静脉途径将携带萤光标记的hUCMSCs移植到链脲霉素诱导的糖尿病模型小鼠体内。移植后利用萤光素酶报告基因追踪hUCMSCs在活体内的迁移和定位;组织学检测小鼠胰岛形态变化;功能学实验动态检测小鼠血糖、血清胰岛素水平和糖耐量。结果:活体生物发光成像显示胰腺包膜下途径移植的hUCMSCs主要定位于胰腺,尾静脉途径移植的hUCMSCs主要定位于肺,仅少量细胞向胰腺部位迁移。组织学检测发现,胰腺包膜下途径移植的小鼠胰岛边界清晰,无炎症细胞浸润;而尾静脉途径移植的小鼠胰腺组织有少量炎症细胞浸润和纤维化形成。功能学检测发现胰腺包膜下移植较尾静脉移植降低小鼠血糖作用显著,血糖可降至接近正常水平,且血清胰岛素水平明显升高,葡萄糖的调节能力显著增强。结论:移植途径对hUCMSCs治疗糖尿病的效果有影响。胰腺包膜下移植在降低小鼠血糖、升高胰岛素水平及改善胰岛功能方面均优于尾静脉移植。
- 蒋豆蔻李青杨晓菲李阳李富荣
- 关键词：人脐带间充质干细胞1型糖尿病
- 生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物的制备被引量：3
- 2006年
- 目的制备生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物。方法将原核高效表达的sHLA-A*2402-BSP融合蛋白及β2m和HLA-A*2402限制性抗原肽EB病毒BRLF1蛋白中的九肽NH2-TYPVLEEMF-COOH进行稀释、复性、折叠,形成HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,并在BirA酶作用下进行生物素化,使生物素结合到HLA-A*2402-抗原肽复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的sHLA-A*2402-抗原肽复合物单体。利用特异性单克隆克体(W6/32和兔抗人2β微球蛋白抗体)及链霉亲合素进行ELISA和Western blot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。结果折叠复合物中,主要含有HLA-A*2402-肽复合物单体及β2m两种成分,其中HLA-A*2402-肽复合物单体可生物素化。结论成功制备出生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物单体,为进一步构建四聚体及制备人工抗原提呈细胞奠定了基础。
- 卢小玲吴雄文翁秀芳李青梁智辉龚非力
- 关键词：生物素化
- 人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外段亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行前后拼接,并利用引物所带的BSP编码序列,构建单链β2m-HLA-A2-BSP融合基因,将测序正确的β2m-HLA-A2-BSP融合基因插入原核表达载体pET-22b中,转化BL21(DE3)细菌,SDS-PAGE检测其表达,融合蛋白于体外抗原肽存在条件下稀释复性后由Western blot鉴定其空间构象。结果经DNA序列分析表明:同义突变与预期结果一致,β2m和HLA-A2-BSPl、inker的连接顺序、方向及序列完全正确,表达载体转化BL21(DE3)细菌后可表达β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白,SDS-PAGE显示该融合蛋白分子量为45 kD,与理论值一致,将融合蛋白与特异性抗原肽在体外进行稀释复性后经Western blot鉴定表明该复合物能与HLA-Ⅰ类分子特异性结合的单克隆抗体W6/32结合。结论人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白的构建及其表达获得成功,经体外复性可获得HLA-Ⅰ类分子天然构象。
- 熊敏杨敬宁李青吴雄文
- 原核表达、体外折叠的HLA-G5促进人外周血单核细胞产生TNF
- 2006年
- 通过原核表达获得HLA-G5重链和轻链(β2m),经初步纯化后,利用稀释法与人工合成的九肽(KGPPAALTL)一起进行体外复性折叠,形成HLA-G5-抗原肽复合物,经非变性PAGE/Western blot和夹心ELISA法鉴定,证实复性后成功获得天然构象的HLA-G5。利用PBMC受LPS刺激后产生TNF的特点,观察原核表达、体外折叠的HLA-G5对人PBMC分泌TNF的影响。TNF分泌量采用TNF敏感的L929细胞进行生物法测定,结果显示原核表达、体外折叠的HLA-G5促进人PBMC分泌TNF-α。
- 褚利霞吴雄文夏芳珍鈡茂华李青翁秀芳卢小玲张彩娥陆盛军梁智辉龚非力
- 关键词：稀释复性TNF
- 可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物的体外折叠与四聚体化
- 2006年
- 目的研究可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物的体外折叠与四聚体化。方法将原核高效表达的可溶性HLA-A*2402-BSP融合蛋白及β2微球蛋白(β2m)与HLA-A*2402限制性抗原肽Epstein-Barr病毒(EBV)即刻早期BRLF1蛋白中的九肽NH2-DYNFVKQLF-COOH进行稀释复性折叠,形成HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体,并在BirA酶的作用下进行生物素化,使生物素结合到HLA-A*2402-pBRLF1复合物中H链C端的BSP序列上形成生物素化的可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体。利用特异单抗(W6/32和兔抗人β2m抗体)及链霉亲合素进行ELISA和Western blot,检测稀释复性和生物素化的折叠产物。然后用此生物素化的单体分子进一步构建成HLA-A*2402-pBRLF1四聚体来检测人工抗原提呈细胞(aAPCs)诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。结果折叠复合物中,主要含有HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体及β2m两种成分,其中HLA-A*2402-pBRLF1复合物单体可生物素化和四聚体化。应用HLA-A*2402-pBRLF1四聚体对特异性CTL检测结果说明体外成功地构建了HLA-A*2402-pBRLF1四聚体。结论HLA-A*2402-pBRLF1四聚体构建成功,为特异性CTL的检测提供了有力的工具。
- 卢小玲吴雄文翁秀芳李青梁智辉龚非力
- 关键词：生物素化四聚体
- 一种碱裂解菌液直接电泳快速筛选重组子的方法被引量：4
- 2005年
- 目的 :从碱裂解法提取质粒DNA的原理 ,经过实验摸索获得一种快速、经济、结果可靠的菌液直接碱裂解电泳筛选重组子的方法。方法 :不需提取质粒DNA ,只需将细菌培养液碱裂解后直接进行普通琼脂糖凝胶电泳分析 ,就可以快速筛选出转化重组子。结果 :结果和提取质粒酶切鉴定鉴定结果一致。结论 :经实验证明菌液直接碱裂解电泳筛选重组子是一种快速、经济、可靠的方法。
- 熊敏李青李文涵费世江吴雄文
- 关键词：重组子
- 模拟肺癌外周血微转移癌细胞富集检测方法的建立被引量：2
- 2007年
- 目的制备特异的纳米免疫磁性微球,结合免疫细胞化学技术研制肺癌细胞富集检测试剂盒,探讨在肺癌患者外周血中微转移癌细胞检测的可行性及灵敏度。方法用反相微乳法制备纳米磁性微球,然后以碳二亚胺为交联剂将抗体与微球连接,制备纳米免疫磁性微球;将人肺腺癌细胞(A549)与PBMC及全血混匀建立癌细胞微转移模型,经纳米免疫磁性微球吸附和磁性分离后进行肺癌细胞的免疫细胞化学鉴定,检测此方法的特异性及灵敏度,建立癌细胞富集检测方法。结果制备的纳米免疫磁性微球能够特异地与A549细胞结合并能将细胞磁性分离,当PBMC与A549比为5×106:1时可检测到癌细胞,并且能检测出1ml外周血中1个癌细胞,未有假阳性。结论制备的肺癌细胞富集检测试剂能有效的从外周血中分离和鉴定出微转移的癌细胞,具有较高的灵敏度,为临床提供了一种简便、快速、敏感的肿瘤微转移病灶检测技术,可提高肺癌转移及复发的诊断率。
- 李青吴雄文李富荣
- 关键词：人肺腺癌细胞微转移
- 纳米免疫磁珠富集和检测非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞的临床意义被引量：7
- 2007年
- 目的探讨利用自主研发的肺癌细胞富集检测试剂盒检测非小细胞肺癌(NSCLc)患者循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性及临床价值。方法采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测4组标本(A组:Ⅰ期NSCLC组,18例;B组:Ⅱ～Ⅳ期NSCLC组,33例;C组:肺部良性病变组,20例;D组:健康志愿者组,20例)外周血中的肿瘤细胞;同时,采用单纯免疫细胞化学(ICC)法及巢式荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞角蛋白19(CK19 mRNA)、肺特异性X蛋白(LUNX mRNA)的表达作对照。结果采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测,A、B、C、D组患者的CK阳性细胞检出率分别为33.3%、60.6%、0%和0%。采用巢式RT-PCR方法检测,A、B、C、D组患者CK19 mRNA表达的阳性率分别为38.9%、63.6%、20.0%和0%,A、B、C、D组患者LUNX mRNA表达的阳性率分别为44.4%、69.7%、10.0%和0%。采用单纯ICC法检测,4组患者的CTCs检出率均为0%。肺癌细胞富集检测试剂盒与单纯ICC法检测比较,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌细胞富集检测试剂盒与巢式RT-PCR方法检测比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组与B、C、D组患者CK阳性细胞的检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);阳性率与病理类型、细胞分化程度和临床分期有密切关系(P<0.05)。结论开发的肺癌细胞富集检测试剂盒是检测早期NSCLC患者CTCs的敏感方法,有助于发现隐形微转移、重新确定临床分期及指导患者术后的个体化治疗。
- 黄同海王正李富荣齐晖周汉新李青
- 关键词：纳米免疫磁珠微转移巢式PCR
- 纳米技术在检验医学中的应用与研究进展被引量：1
- 2006年
- 李青李富荣吴雄文
- 关键词：生物医学领域生物分子纳米微粒计量单位
