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李瑾

作品数：9 被引量：23H指数：3
供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 7篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 6篇细胞
  • 4篇肝癌
  • 3篇生物学
  • 2篇凋亡
  • 2篇血循
  • 2篇血循环
  • 2篇原核表达
  • 2篇生物学活性
  • 2篇生物学活性鉴...
  • 2篇肿瘤
  • 2篇细胞检测
  • 2篇活性
  • 2篇活性鉴定
  • 2篇IL-24
  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白诱导
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质类
  • 1篇凋亡作用
  • 1篇血管

机构

  • 9篇第二军医大学
  • 1篇南方医科大学...

作者

  • 9篇殷正丰
  • 9篇李瑾
  • 7篇康晓燕
  • 6篇钱海华
  • 3篇吴孟超
  • 2篇王翠红
  • 2篇杨之斌
  • 1篇施乐华
  • 1篇罗祥基
  • 1篇温莹浩
  • 1篇张小峰
  • 1篇董刚
  • 1篇王孟龙
  • 1篇徐文
  • 1篇姜治国
  • 1篇陈玮
  • 1篇艾莉

传媒

  • 4篇第二军医大学...
  • 2篇中国肿瘤生物...
  • 1篇中华肝胆外科...
  • 1篇实用肿瘤杂志
  • 1篇肿瘤

年份

  • 1篇2009
  • 2篇2007
  • 3篇2006
  • 1篇2004
  • 1篇2003
  • 1篇2002
共 9 条 记 录，以下是 1-9
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排序方式：
重组人成纤维细胞生长因子-20的原核表达、生物学活性鉴定及抗血清制备被引量：1
2006年
目的：表达具有生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子-20（rhFGF-20），并制备rhFGF-20抗血清。方法：应用RT—PCR从人前列腺组织总RNA中扩增FGF-20的cDNA，将其克隆到pET24a中，在大肠杆菌中诱导表达，经NTA—Ni^2＋-琼脂糖亲和层析纯化，应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、细胞增殖试验进行分析鉴定，并免疫新西兰雄性白兔制备多克隆抗体，免疫双扩散法测定抗体效价。结果：构建的pET24aFGF-20能在大肠杆菌中高表达；诱导表达的rhFGF-20蛋白主要存在于包含体中，经包含体溶解、Ni^2＋-NTAHis—Bind Resins亲和层析后，纯化产物呈单一条带；细胞增殖试验显示其能促进成纤维细胞生长，并具有剂量依赖性（浓度为50～5000ng／ml）；制备的抗血清效价为1：32，可与hFGF20产生免疫反应。结论：大肠杆菌表达的rhFGF-20蛋白具有刺激成纤维细胞增殖的活性，制备的抗血清具有特异性。
姜治国殷正丰钱海华康晓燕罗祥基李瑾
关键词：原核表达免疫血清
mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用被引量：5
2009年
目的:探讨mda-7/IL-24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制。方法:构建携带mda-7基因的重组腺病毒载体Ad.mda-7。以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予Ad.GFP、Ad.mda-7和ALLN(毒胡萝卜素,N-Ac-L-L-norleucinal)+Ad.mda-7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase-3活化、细胞增殖相关抗原ki-67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Westernblotting检测caspase-12、caspase-3和Bax的表达。结果:Ad.mda-7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为(312.6±30.2)mm3和(520.6±30.0)mm3(P<0.01),两组的肿瘤质量分别为(0.321±0.031)g和(0.534±0.030)g(P<0.01);Ad.mda-7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Ad.mda-7可抑制肝癌组织ki-67表达、微血管密度和促进caspase-3的表达。经ALLN处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda-7对肝癌细胞的致凋亡作用(P<0.05),并且下调Ad.mda-7诱导的caspase-12、caspase-3和Bax的表达。结论:Ad.mda-7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡。
张小峰殷正丰艾莉康晓燕徐文李瑾施乐华
关键词：MDA-7IL-24肝癌凋亡CASPASE
腺病毒介导IL-24联合化疗药物增强对肝癌细胞PLC/PRF/5增殖的抑制被引量：5
2007年
目的:研究腺病毒介导IL-24基因(Ad.IL-24)与化疗药物联用对肝癌细胞株PLC/PRF/5增殖的抑制作用。方法:用Ad.IL-24分别联合化疗药物氟尿嘧啶(fluorouracil,5-Fu)和表柔比星(epirubicin,EPI)处理培养的肝癌细胞株PLC/PRF/5,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率。结果:10 MOI Ad.IL-24与25μg/ml5-Fu联合应用后72h,PLC/PRF/5细胞增殖抑制率达(67.4±0.58)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(46.8±0.74)%和5-Fu组的(29.3±0.60)%(均P<0.05);10MOIAd.IL-24与2.5μg/mlEPI联合应用后72h,PLC/PRF/5细胞增殖抑制率达(72.5±0.92)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(46.8±0.74)%和EPI组的(32.2±0.69)%(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,Ad.IL-24与5-Fu或EPI联合应用明显导致细胞在G2/M期阻滞;Ad.IL-24+5-Fu组细胞凋亡率为(52.15±2.32)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(28.36±3.49)%和5-Fu组的(8.27±2.61)%(均P<0.05);Ad.IL-24+EPI组细胞凋亡率为(58.67±1.73)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(28.36±3.49)%和EPI组的(11.82±1.91)%(均P<0.05)。结论:Ad.IL-24与5-Fu或EPI联用能显著提高对肝癌细胞株PLC/PRF/5增殖的抑制作用。
温莹浩殷正丰康晓燕李瑾钱海华陈玮
关键词：白介素24表柔比星氟尿嘧啶
重组人中期因子的原核表达、纯化及生物学活性鉴定被引量：7
2004年
目的 :表达和纯化具有生物学活性的重组人中期因子蛋白。方法 :应用 RT- PCR从人肝细胞癌组织总 RNA中扩增中期因子 c DNA,将其克隆到表达载体 p ET- 2 4 a,在大肠杆菌中诱导表达 ,经肝素 -琼脂糖亲和层析柱纯化 ,应用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹和细胞增殖试验对纯化产物进行分析鉴定。 结果 :构建的重组质粒 p ET- HMK能在大肠杆菌中高表达 ,诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中 ,经肝素 -琼脂糖柱亲和层析后纯化产物呈单一条带 ,特异性抗体反应证实是重组人中期因子 ,细胞增殖试验显示其能有效促进 NIH 3T3细胞生长 ,并且具有剂量依赖性。结论
钱海华康晓燕殷正丰王翠红李瑾吴孟超
关键词：原核表达纯化生物学活性
外周血循环中肿瘤细胞检测的临床意义与研究现状
2003年
越多的资料表明,恶性实体瘤的复发转移主要是通过淋巴及血液系统播散.
李瑾殷正丰
关键词：外周血循环肿瘤细胞血循环
重组人IL-24蛋白诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡被引量：1
2007年
目的研究重组人IL-24蛋白(rhIL-24)选择性诱导肝癌细胞生长抑制和凋亡的作用。方法重组由Igk前导肽、IL-24 cDNA(不含自身信号肽)和myc-tag组成的融合基因(Igk7m),构建表达载体pcDNA3.1-Igk7m,稳定转染293细胞,表达并粗提分泌性rhIL-24蛋白。以人肝癌细胞株PLC/PRF/5(p53突变型)、SMMC-7721(p53野生型)和正常人肝细胞株WRL-68为靶细胞,用活细胞计数法和TUNEL法分析rhIL-24处理对培养的靶细胞生长和凋亡的影响。结果经测序鉴定,融合基因各片段的核苷酸序列和总阅读框架完全正确。应用Western blot在筛选的转基因293细胞克隆和其培养上清中均检测到rh IL-24蛋白,分子量分别约为25 kDa和35 kDa。与WRL-68对照组相比,分泌性rhIL-24蛋白粗提液处理可显著抑制PLC/PRF/5和SMMC-7721肝癌细胞的生长增殖(P<0.01)。rhIL-24蛋白处理还可显著增加PLC/PRF/5和SMMC-7721的凋亡细胞百分率(P<0.01),而对正常肝细胞WRL-68无明显影响(P>0.05)。结论rhIL-24蛋白能选择性诱导培养的肝癌细胞株PLC/PRF/5和SMMC-7721生长抑制和凋亡。
王翠红康晓燕杨之斌李瑾钱海华殷正丰
关键词：肝肿瘤重组蛋白质类凋亡
肝素-ELISA法检测血清中期因子及其对肝癌诊断的初步应用被引量：2
2006年
目的：建立中期因子（midkine,MK）的测定方法,初步探讨血清MK浓度测定对肝癌的诊断价值.方法：根据MK可结合肝素的特点,应用肝素-抗体双夹心原理,建立肝素-ELISA,并检测20例健康献血者、20例良性肝占位性病变患者、20例肝硬化患者以及104例肝细胞癌（HCC）患者血清MK的质量浓度.结果：肝素-ELISA检测MK的最小值为15 ng/L,可测范围为15～1 000 ng/L,＜500 ng/L时呈线性关系（r=0.97）.测定结果表明,正常献血者、良性肝占位性病变患者和肝硬化患者血清MK浓度分别为（56±11）、（74±19）和（89±43）ng/L,而HCC患者血清MK浓度为（199±87）ng/L,与前3组之间有显著差异（P＜0.05）.HCC患者血清MK阳性率达83.7%,与其他3组之间具有显著性差异（P＜0.001）.结论：应用肝素-ELISA测定血清MK的质量浓度对肝癌具有诊断价值.
李瑾钱海华康晓燕杨之斌吴孟超殷正丰
关键词：肝素酶联免疫吸附肝细胞癌
重组病毒rAAV2-PD-L1的构建及其转染小鼠血管内皮细胞的生物学效应
2006年
目的:构建腺相关病毒rAAV2介导的PD-L1表达系统,检测感染rAAV2-PD-L1的血管内皮细胞共刺激T细胞分泌细胞因子的作用。方法:以鼠肝脏组织来源的总RNA为模板,应用RT-PCR扩增PD-L1 cDNA,克隆入穿梭质粒pSNAV1,脂质体法转染包装细胞BHK21,筛选获得重组病毒rAAV2-PD-L1。以rAAV2-PD-L1感染小鼠血管内皮细胞株2F-2B后,与活化的小鼠T细胞共培养,ELISA法检测培养上清IFNγ浓度。结果:测序结果表明,克隆的小鼠PD-L1 cDNA和重组质粒pSNAV-PD-L1序列正确。重组病毒rAAV2-PD-L1经PCR扩增出目的基因片段,在SDS-PAGE电泳上显示AAV2三条特征带,纯度大于98%。病毒物理滴度为4×1012virus genome/ml;蛋白浓度为0.355 mg/ml。感染rAAV2-PD-L1的血管内皮细胞高表达PD-L1。活化T细胞与其共培养后,培养上清IFNγ浓度显著降低。结论:构建的重组病毒rAAV2-PD-L1可感染血管内皮细胞,并且共刺激可抑制活化T细胞分泌IFNγ。
康晓燕王孟龙董刚李瑾钱海华殷正丰
关键词：PD-L1腺相关病毒内皮细胞
肝癌病人血循环中肝源性细胞检测的研究进展被引量：2
2002年
殷正丰李瑾吴孟超
关键词：肝癌血循环
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