李沐洁
- 作品数：10 被引量：49H指数：4
- 供职机构：中国计量学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金浙江省重点科技创新团队项目杭州市重大科技创新项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2012年
- [目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。
- 邹晓楠龚云飞奚茜李沐洁张晓峰方结红陈宗伦王唯芬张明洲
- 关键词：恩诺沙星人工抗原多克隆抗体
- 玉米赤霉烯酮单克隆抗体制备及免疫分析被引量：3
- 2013年
- 采用活泼酯法将玉米赤霉烯酮（Zaralenone，ZEN）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联合成免疫原ZEN—BSA和包被原ZEN—OVA，经紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后免疫BALB/c小鼠；挑选产生高效价和高敏感性抗体的小鼠进行抗原超强免疫．取脾细胞与SP2／0细胞融合获得1株稳定分泌抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体的杂交瘤细胞（3D8）。经鉴定，该抗体亚类为IgG1，轻链为k型。经体内诱生腹水并纯化获得效价为l：2．048x106的单克隆抗体。建立了基于单克隆抗体的ZEN间接竞争ELISA法（ic—ELISA），该方法ic50和检出限分别为22．89pg／mL和10．07pg/mL。与a-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、a-玉米赤霉醇和β-玉米赤霉醇的交叉反应率分别为95％、8％、12％、6％和5％，而与黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、伏马毒素B1和赭曲霉毒素A未见有交叉反应。在玉米、大麦、小麦和燕麦中加标的回收率在86．4％～104．8％之间。该方法灵敏特异。可作为快速检测谷物中玉米赤霉烯酮的初筛方法。
- 李沐洁张明洲奚茜陈宗伦王唯芬龚云飞
- 关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体间接竞争ELISA
- 恩诺沙星直接竞争ELISA检测试剂盒的研制被引量：3
- 2013年
- 目的：应用多克隆抗体技术研制一种检测动物食品中恩诺沙星残留直接竞争酶联免疫检测试剂盒。方法：利用直接竞争ELISA法检测人为添加到动物食品中恩诺沙星的含量，与高效液相色谱的检测结果比较，并测定试剂盒的各项指标。结果：恩诺沙星质量浓度0．1～8．1ng／mL，标准曲线的线性回归方程y=-0．3769x＋0．7899（R2=0．9924），方法的检测灵敏度IC50=0．55ng／mL，IC50=0．11ng／mL；板内平均变异系数为3．73％，板间平均变异系数为7．42％；猪肝、猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪血清、牛奶、蜂蜜组织样品中ENR最低检测限分别为3．24．3．33，6．08，0．89，1-34，0．64，0．73，0．58g／kg；添加25．0-200g／kg恩诺沙星时，回收率80．9％～100％。采用ELISA和HPLC两种检测方法的相关性大于95％。结论：本文研制的试剂盒可用于检测动物食品中恩诺沙星的残留。
- 邹晓楠龚云飞奚茜李沐洁张晓峰张明洲
- 关键词：多克隆抗体恩诺沙星动物食品
- 禽类食品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 试验采用高碘酸钠法合成了磺胺二甲嘧啶的人工SMZ-BSA和SMZ-OVA,紫外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定证明抗原耦联成功。在此基础上,建立间接竞争ELISA法,将磺胺二甲嘧啶添加到鸡蛋和鸡肉样品中,分别用ELISA和高效液相色谱（HPLC）分析方法检测。结果表明,在0.1~50 ng/mL浓度范围内,方法的检测灵敏度IC10=0.18 ng/mL。鸡蛋实际样品的检出限可达到2.0 ng/g,鸡肉实际样品检出限可达到5.0 ng/g。研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有较高的相符性,可用于鸡蛋与鸡肉样品中磺胺二甲嘧啶残留含量分析的大量样品的筛查。
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦奚茜李沐洁
- 关键词：ELISA鸡蛋鸡肉
- 链霉素残留检测直接竞争ELISA法的建立被引量：8
- 2013年
- 目的：在多克隆抗体的基础上研制1种用于检测牛奶、蜂蜜中链霉素残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法：以兔抗链霉素多抗为包被原,以链霉素-辣根过氧化物连接物为标记物,TMB为显色底物,建立了1种链霉素残留量检测的竞争性直接酶联免疫快速检测方法,并与高效液相色谱（HPLC）分析方法比较和验证。结果：用该检测方法分别检测牛奶、蜂蜜中的链霉素残留情况。结果表明,在0.5~40.5 ng/mL的浓度范围内标准曲线方程为y=-0.4341x＋1.1786（r=0.9708）,半抑制率IC50为3.60 ng/mL,最低检测限IC10为0.43 ng/mL,平均批内与批间变异系数分别为5.78%与8.11%。在牛奶、蜂蜜样品中的检测限分别为2.7 ng/mL、2.8 ng/mL。在添加10.0~400.0 ng/mL范围内,平均回收率在97%~107%。除双氢链霉素外,与其他抗生素药物均无交叉反应。牛奶、蜂蜜样品采用ELISA和HPLC 2种检测方法的相关系数分别为0.99和0.97,说明本研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有很好的相符性。结论：直接竞争ELISA法可以满足牛奶、蜂蜜中链霉素残留的检测要求。
- 奚茜张明洲李沐洁龚云飞王旻子陈宗伦王唯芬
- 关键词：链霉素
- 赭曲霉毒素A直接竞争ELISA试剂盒的研制被引量：6
- 2012年
- 在多克隆抗体的基础上研制了赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫检测(cd-ELISA)试剂盒。在0～10 ng/mL范围内,该试剂盒50%抑制率(IC50)为1.09 ng/mL,检测灵敏度(IC15)为0.08 ng/mL;与赭曲霉毒素B、C的交叉反应率分别为6.28%和0.16%,而与黄曲霉毒素B1等生物毒素未见有交叉反应;板内与板间平均变异系数分别为2.21%和2.79%;花生、玉米和玉米粉3种样品中OTA的检测低限分别为1.71,1.26和1.85μg/kg,平均添加回收率在83.80%～91.40%;与HPLC检测方法具有较高的相关性,相关系数(R2)分别为0.940、.88和0.90;检测时间只需20 min,可用于花生、玉米及玉米粉中OTA的批量快速筛查。
- 李沐洁奚茜张明洲陈宗伦王唯芬
- 关键词：赭曲霉毒素A多克隆抗体
- 磺胺二甲嘧啶快速直接竞争ELISA试剂盒的研制及应用被引量：2
- 2011年
- 在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶(SMZ)残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒,并与高效液相色谱(HPLC)分析方法比较和验证。将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中,用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的磺胺二甲嘧啶残留,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。研究结果表明,磺胺二甲嘧啶浓度在0.5～50ng.mL-1,方法的检测灵敏度IC10=0.47ng.mL-1,板内平均变异系数为7.4%,板间平均变异系数为9.27%。猪肝、猪肉与鸡肉组织样品中SMZ最低检测限分别为3.91、4.81与1.59μg.kg-1。在添加10.0～50.0μg.kg-1时,平均回收率在85%～110%。试剂盒的检测时间为12.6min,在4℃至少可以保存6个月。研制的试剂盒可以满足猪肝、猪肉和鸡肉中磺胺二甲嘧啶残留的现场快速检测。
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦李沐洁奚茜
- 关键词：磺胺二甲嘧啶ELISA试剂盒猪肝猪肉鸡肉
- 三聚氰胺人工抗原及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2011年
- 采用戊二醛法将三聚氰胺(Melamine,MEL)偶联到牛血清白蛋白(BSA)上合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白(MEL-BSA).三聚氰胺甲醛树脂法对三聚氰胺衍生化,再偶联到鸡卵清蛋白(OVA)合成包被原三聚氰胺-鸡卵清蛋白(MEL-OVA).对纯化后的合成抗原进行紫外扫描、红外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定.免疫新西兰大白兔,检测抗体的生成.结果表明,免疫兔血清的效价达到了1∶20 000,从而为进一步建立三聚氰胺的免疫检测方法奠定了基础.
- 龚云飞王唯芬张明洲陈宗伦彭雪李沐洁奚茜
- 关键词：三聚氰胺人工抗原多克隆抗体
- 链霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2013年
- 通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE分析偶联情况,计算得链霉素与cBSA、OVA的分子偶联比分别为7.6:1与17.7:1。经动物免疫获得效价为1:40000的链霉素多克隆抗体,采用间接竞争ELISA测定IC50为3.32ng/mL,与双氢链霉素的交叉反应率为105.21%,与同类的其他药物均无交叉反应。
- 奚茜李沐洁龚云飞陈宗伦方结红王唯芬张明洲
- 关键词：链霉素人工抗原多克隆抗体间接ELISA法
- 三聚氰胺胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：12
- 2012年
- 通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的三聚氰胺抗原检测方法,对奶制品及饲料中的三聚氰胺残留水平监测提供参考。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的三聚氰胺单克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将MEL-OVA(三聚氰胺和卵清白蛋白的偶练物)和纯化的羊抗鼠IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。结果显示,制备的试纸监测体系方法检出限为50 g/L。试纸条对牛奶、奶粉和饲料中的三聚氰胺残留的检出限分别为100 g/L、100 ng/g和200 ng/g。将该法与LC-MS/MS法对比检测牛奶、奶粉和饲料样品,在试纸条检测范围内,与LC-MS/MS法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性。制备的三聚氰胺胶体金检测试纸在常温干燥环境下至少可保质6个月,能够检测出三聚氰胺含量大于50 g/L的样品,适用于现场实际样品三聚氰胺残留水平监测,具有良好的应用前景。
- 龚云飞陈宗伦奚茜李沐洁王唯芬王旻子应永飞张明洲
- 关键词：三聚氰胺胶体金免疫层析试纸
