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点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶及其制法和用途: 本发明公开了一种新的脯氨酰内肽酶[EC3.4.21.26]，该酶是点状产气单胞菌点状亚种(Aeromonas punctata subsp.punctata)的脯氨酰内肽酶。具体地，本发明公开了该脯氨酰内肽酶的氨基酸序列...; 陈常庆李民沈国祥史济平; 文献传递

高密度培养大肠杆菌TG1/pGEX-hCT和高表达重组人降钙素被引量：9: 2000年; 目的 :高密度、高表达培养重组大肠杆菌 TG1/p GEX- h CT,生产重组人降钙素 (rh CT)。方法和结果 :应用 NBSBio Flo30 0 0型 5 L 自控发酵罐 ,采用分批培养和补料分批培养相结合的培养技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧 ,使重组菌 E.coli TG1/p GEX- h CT发酵光密度 [D(6 0 0 ) ]达到 5 8.6 ,人降钙素和 GST融合蛋白 (GST- h CT)的含量达到 3.2 g/L。结论 :本研究为工业化生产重组 h CT奠定了基础。; 窦鸿李民毛积芳陈常庆; 关键词：降钙素多肽激素大肠杆菌

扇贝超氧化物歧化酶的纯化及性质研究被引量：8: 1998年; 采用加热、盐析及DEAE－SephadexA－50柱层析的方法，从扇贝内脏团中分离得到一种高等电点的超氧化物歧化酶（SOD）。该酶由281个氨基酸组成，等电点为8．30。纯酶的比活为2616．4U／mg蛋白（邻苯三酚自氧化法），最大紫外吸收峰270．5nm，为Cu．Zn－SOD，由一个亚基组成，亚基分子量为15000Dr。此外还研究了该酶其他的理化性质。; 王跃军孙谧李民马英杰向葆卿; 关键词：超氧化物歧化酶纯化

基因工程菌高密度发酵液中碳源物质甘油的定量检测及其浓度的优化控制被引量：26: 1999年; 比较了高碘酸氧化法、铜离子络合法、高压液相色谱法和甘油激酶法四种不同的方法定量测定重组工程菌ＹＫ５３７／ｐＳＢ－ＴＫ高密度发酵液中甘油（作为细菌生长的碳源物质）的浓度，发现甘油激酶法可以排除发酵液中其他物质的干扰，精确测定甘油的含量。在此基础上对发酵培养基中甘油的浓度进行了优化，结果表明，甘油浓度控制在较低的水平有利于菌体密度的提高。在５Ｌ自动发酵罐中，控制甘油浓度在５ｇ／Ｌ左右，经２０ｈ的培养，最终细菌密度达到１２０ＯＤ６００（相当于４８ｇＤＣＷ／Ｌ），重组蛋白ｒｈＴＮＦα的表达量占细菌总蛋白的３０％左右。; 杨如燕李民陈常庆; 关键词：重组大肠杆菌高密度发酵甘油肿瘤坏死因子

重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶的纯化和鉴定: 2000年; 报道重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶 (简称apPEP)的基因工程下游工艺研究。工程菌株E .coliBL2 1/ pKKH PEP表达产物apPEP为可溶性蛋白 ,在NBSBioFlo 30 0 0型 5L自控发酵罐中经 14h培养每升发酵液可达到 2 2 5 g干重菌体 ,含apPEP 3 0g左右。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后 ,依次经SephadexG 2 5、HighperformanceQsepharoseFF(HP Q)、Phenylseparose 6FF柱层析分离纯化 ,每升发酵产物最终可得 0 86 g纯度达96 %的重组apPEP ,比活力达到 6 5 5u/mg ,整个纯化工艺的蛋白回收率为 8 2 % ,活力回收率为 2 4 4%。纯化的apPEP经电喷雾质谱测定分子量为 76 46 4± 30D ,N端氨基酸序列与基因序列推导的一致。等电点为 pI6 0左右。与Aeromonashydrophila来源的PEP(pI =5 5 )相近。; 李民陈常庆王德宝; 关键词：脯氨酰内肽酶高密度发酵纯化比活力

重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNFα)工程菌高密度发酵研究被引量：7: 2000年; 报道了 rh TNFα重组菌发酵条件及高密度、高表达发酵的研究。首先研究了营养成份对其生长和表达的影响 ,确定了半合成发酵培养基 ;筛选出了 rh TNFα生长和表达的最适宿主菌 E.coli YK5 37;研究了影响高表达的几个关键因素 ,建立了该类型重组菌的诱导表达条件。结果表明限制发酵过程中乙酸积累、控制在指数生长期进行诱导、持续诱导时间不超过 5 h是实现高密度、高表达发酵的关键条件。采用半经验补料流加公式 ,在 NBS Bio Flo30 0 0型 5 L 发酵罐中利用恒溶氧 -补料培养批技术 ,限制甘油浓度在 5 g/ L,可使 E.coli YK5 37/ p SB- TR最终菌体密度和 rh TNFα的产量分别达到 A6 0 0 12 6和 8.4g/ L。; 李民徐皓周逸明杨如燕陈常庆; 关键词：肿瘤坏死因子高密度发酵 RHTNFΑ 工程菌

重组大肠杆菌高密度发酵研究进展被引量：96: 2000年; 重组大肠杆菌的高密度发酵是提高基因工程产品产量的一个非常有效的手段 ,是现代发酵工程研究的一个热点。本文就高密度发酵中影响重组大肠杆菌发酵产率的几个因素 ,包括宿主菌、培养基、培养条件、补料方法以及高密度发酵过程中存在的问题和对策加以讨论 ,着重探讨了高密度下大肠杆菌产生的有害代谢副产物———乙酸的产生机制、抑制作用机理。; 李民陈常庆; 关键词：重组大肠杆菌高密度发酵乙酸

利用恒溶氧-补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组人骨形成蛋白-2A被引量：49: 1998年; 对表达人骨形成蛋白２Ａ（ＢＭＰ２Ａ）的重组大肠杆菌ＹＫ５３７／ｐＤＨＢ２ｍ在５００ｍｌ摇瓶中进行了培养条件的摸索实验，继后用５Ｌ自控发酵罐进行分批培养和分批补料培养，以获取ｒｈＢＭＰ２Ａ。两种培养方式结果比较表明，在培养过程中保持３０％～４０％左右的溶解氧和限制性流加葡萄糖可以使ＢＭＰ２Ａ的含量达到２７８ｇ／Ｌ，最终菌体密度为ＯＤ６００５３（相当于干菌２１２ｇ／Ｌ），重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的２５％。该培养技术的关键是：（１）在培养过程中保持适当的溶解氧；（２）限制性流加葡萄糖；（３）４２℃起始诱导的时间控制在对数生长中期，持续表达时间为４ｈ；（４）细菌持续生长的比生长速率控制在０３ｈ１左右。; 李民陈常庆朴勤陈苏民; 关键词：重组大肠杆菌分批补料

脯氨酰内肽酶培养条件的优化及高密度发酵被引量：12: 2000年; 基因工程菌E.coliBL21/pGEMPEP可以组成型表达重组的点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶(PEP),但培养条件极大地影响着酶的产量,为了获得高效表达,首先测定了工程菌表达PEP的稳定性并考察了培养温度、pH、发酵时间、碳源、氮源、无机盐等对产酶的影响,得到了优化的发酵条件,L9(34)正交试验进一步明确了摇床转速、培养温度、pH值、培养时间对产酶量的影响都有高度的统计学意义。在此基础上利用NBSBioFlo3000型5L自控发酵罐进行了高密度、高表达发酵、经20h培养,最终菌体密度达OD60060(相当于干菌体225g/L),PEP表达量为28%,每升发酵液中含PEP酶315g。; 李民修朝阳陈常庆; 关键词：高密度发酵正交实验

脯氨酰内肽酶基因工程研究和重组大肠杆菌高密度发酵研究: 一、脯氨酰内肽酶基因工程研究.1)采用功能筛选法从国内一株微生物中获得了apPEP基因,并得到GeneBank的认证;2)首次实现了产气单胞菌脯氨内肽酶(简称apPEP)在大肠杆菌中的高效表达,产物具有活性且表达量在30...; 李民; 关键词：脯氨酰内肽酶基因工程高密度发酵

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李民