李冀
- 作品数：2 被引量：11H指数：1
- 供职机构：西北工业大学生命学院更多>>
- 发文基金：西北工业大学基础研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细菌青霉素结合蛋白被引量：11
- 2013年
- 青霉素结合蛋白(penicillin binding protein,PBP)是一类在细菌细胞壁肽聚糖生物合成过程中起重要作用的酶类。在聚合过程中,它主要发挥糖基转移酶、肽基转移酶和D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶(D,D-羧肽酶)活性。PBP数量和结构的改变是导致细菌产生β-内酰胺类抗生素耐药性的重要原因之一。本文对青霉素结合蛋白的分类命名、结构功能、耐药机制等方面进行了综述。
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- 关键词：青霉素结合蛋白细菌耐药性Β-内酰胺类抗生素
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a转肽酶区的原核表达及其纯化
- 2015年
- 目的原核表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)转肽酶区,并进行纯化及鉴定。方法 PCR扩增编码PBP2a转肽酶区的mec Af基因片段,克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-6p-mec Af,经双酶切(Bam HⅠ和Eco RⅠ)及测序鉴定正确后,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21进行诱导表达;经蛋白亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果重组表达质粒p GEX-6p-mec Af经双酶切(Bam HⅠ和Eco RⅠ)及测序鉴定证明构建正确;表达产物的相对分子质量约63 000,表达量约占菌体总蛋白的14.5%,纯化后纯度达90%。结论成功构建了PBP2a转肽酶区的原核表达质粒,目的蛋白在E.coli中获得高效表达,为制备单克隆抗体及建立MRSA快速检测方法奠定了基础。
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- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2A原核细胞
