曹立雪
- 作品数：11 被引量：72H指数：5
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- PCR-SSCP技术快速检测结核分枝杆菌三种基因突变被引量：4
- 2005年
- 刘旭红陈旭庚张眉眉苏娅何雅慧王莉尚艳萍吴雪琼曹立雪
- 关键词：结核分枝杆菌基因突变
- 应用膜芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变
- 了解结核分枝杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变情况,研究rpoB基因突变与RFP最小抑菌浓度(MICs)之间的关系;研制一种新型的DNA芯片,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测.用膜芯片可...
- 曹立雪
- 关键词：结核分枝杆菌利福平RPOB基因药物耐受性
- 文献传递
- 应用基因阵列法快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变被引量：6
- 2004年
- 目的 研制一种新型的基因阵列 ,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测。方法 根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并制作基因阵列 ,用生物素标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断 ,与基因阵列杂交 ,同时以聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术及DNA测序法为对照。结果 111株结核分枝杆菌临床分离株经PCR SSCP分析 ,4 1株RFP敏感株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同 ;70株耐RFP菌株中 ,6 3株(90 % )SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株不同 ,其余 7株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同。基因阵列检测结果 4 1株RFP敏感株杂交图谱与标准株完全相同 ,70株耐RFP临床分离株中 ,6 3株检测到rpoB基因突变 ,检出率为 90 % ;其中 37株 (5 3% ) 5 31位丝氨酸 (Ser)置换 ,15株 (2 1% ) 5 2 6位组氨酸(His)置换 ,11株 (16 % )其他位置的氨基酸置换。基因阵列检测结果与PCR SSCP及测序结果一致。结论 用基因阵列法可简便、快速、准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。
- 曹立雪吴雪琼梁建琴李洪敏张俊仙
- 关键词：结核分枝杆菌RPOB基因突变DNA探针
- 结核分枝杆菌利福平耐药性的研究进展被引量：12
- 2004年
- 本文旨在阐明结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的规律,以及rpoB基因突变与利福平最低抑菌浓度(MIC)的关系。结核分枝杆菌的rpoB基因突变是引起利福平耐药性的主要原因,耐利福平分离株的rpoB基因突变主要集中在507～533位密码子的81bp的区域内,约80%的菌株发生531位或526位密码子突变。不同类型rpoB基因突变的结核分枝杆菌对利福平的耐受性也不同,通常发生531位密码子突变的菌株的MIC≥64μg/mL。
- 曹立雪林艳丽吴雪琼
- 关键词：结核分枝杆菌利福平最低抑菌浓度RPOB基因耐药性
- 应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变被引量：18
- 2005年
- 目的 应用聚合酶链反应 (PCR) 寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法 以传统药敏试验、PCR 单链构象多态性和PCR 直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、rrs和embB的寡核苷酸探针,通过反向斑点杂交检测 78株结核菌临床分离株PCR产物。结果 18株结核菌药物敏感株的 4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中, 59株为耐RFP株,rpoB基因突变率为 93. 2%,最常见的突变位点为 531位和 526位密码子, 33株为耐SM株,rpsL基因突变率为 75. 8%,均为 43位密码子AAG→AGG突变,rrs基因突变率为 9 .1%,均为 513位A→C突变,rpsL和rrs基因总突变率为 84 .8%; 43株为耐EMB株,embB基因突变率为 58 .1%,均为 306位密码子突变。结论 应用PCR 寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变,检测其耐药性。
- 吴雪琼梁建琴曹立雪李洪敏张俊仙陆阳
- 关键词：结核菌寡核苷酸探针聚合酶链反应PCR产物RPSL基因
- 复合PCR-膜芯片技术对结核分枝杆菌链霉素耐药性的快速检测
- 2004年
- 目的 应用复合聚合酶链反应 (复合 PCR) -膜芯片技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 ( SM)的耐药性。方法 设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐 SM基因 rps L和 rrs的寡核苷酸探针制作膜芯片 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的 rps L和 rrs基因复合 PCR产物进行反向斑点杂交 ,并与 PCR-单链构象多态性 ( PCR- SSCP)和 PCR-直接测序 ( PCR- DS)结果比较。结果 5 2株结核分枝杆菌临床分离株中 ,9株敏感株rps L和 rrs基因的 SSCP图谱、膜芯片杂交结果与标准株完全相同 ;4 3株耐 SM菌株中 ,33株存在 rps L 基因4 3位密码子 AAG→ AGG突变 ,5株有 rrs基因 5 13位 A→C突变 ,1株有 rrs基因 5 13位 A→ T突变 ,突变率为 90 .7%。结论 膜芯片技术检测结核分枝杆菌耐 SM基因型灵敏度高、特异性强、简便、快速 。
- 梁建琴吴雪琼曹立雪李洪敏张俊仙
- 关键词：结核分枝杆菌链霉素RPSL基因药物耐受性聚合酶链反应
- 科研过程质量评估体系探讨被引量：5
- 2003年
- 徐忠华傅雅慧曹立雪付玉喜
- 关键词：医学院校科研管理
- 反向斑点杂交技术检测耐链霉素结核分枝杆菌基因型被引量：4
- 2004年
- 梁建琴吴雪琼曹立雪李洪敏张俊仙
- 关键词：反向斑点杂交技术基因型
- 应用PCR-反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌耐链霉素基因型被引量：5
- 2004年
- 目的 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 (SM)的耐药性。方法 设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐SM基因rpsL和rrs的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交 ,并与PCR -单链构象多态性 (PCR -SSCP)和PCR -直接测序 (PCR -DS)结果比较。结果 5 3株结核分枝杆菌临床分离株中 ,三种检测方法符合率为 10 0 %。 9株敏感株rpsL和rrs基因的SSCP图谱、膜杂交结果与标准株完全相同 ;44株耐SM菌株中 ,3 3株存在rpsL基因 43位密码子AAG→AGG突变 ,6株有rrs基因 5 13位A→C突变 ,1株有rrs基因 5 13位A→T突变 ,突变检出率为 90 .9%,40株耐SM菌株和 9株敏感株可用膜杂交方法检测出来 ,与传统药敏试验方法检测符合率为 49/5 3。结论 应用膜反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐SM基因型灵敏度高、特异性好、简便、快速 。
- 梁建琴吴雪琼曹立雪张俊仙李洪敏
- 关键词：结核分枝杆菌链霉素基因型耐药性基因变异
- 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇基因型的研究被引量：12
- 2004年
- 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对乙胺丁醇 (EMB)耐药性。设计与合成用于检测结核分支杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应 (PCR)产物进行反向斑点杂交 ,并与PCR 单链构象多态性 (PCR SSCP)和PCR 直接测序 (PCR DS)结果比较。对 81株结核分支杆菌临床分离株进行分析 ,31株EMB敏感株中 ,2 6株embB基因的SSCP图谱、膜反向斑点杂交结果与标准株 (H37Rv)完全相同 ;其余 5株SSCP图谱出现泳动变位 ,其中 3株E1b杂交阳性 ,PCR DS分析为embB基因 30 6位密码子ATG→GTG突变 ;2株E1d杂交阳性 ,PCR DS分析为embB基因 30 6位密码子ATG→ATA突变。 5 0株耐EMB菌株中 ,2 4株PCR SSCP图谱与标准菌株相同 ,E1杂交阳性 ;2 6株PCR SSCP图谱出现泳动变位 ,其中 18株E1b杂交阳性 ,2株E1c杂交阳性 ,5株E1d杂交阳性 ,1株E1e杂交阳性 ,未发现E1f杂交阳性 ,与PCR SSCP、PCR DS分析结果一致。突变检出率为 5 2 %。膜反向斑点杂交技术可能成为检测部分结核分支杆菌乙胺丁醇耐药基因型简便、快速的方法。
- 梁建琴吴雪琼曹立雪李洪敏张俊仙
- 关键词：结核分支杆菌乙胺丁醇EMBB基因药物耐受性结核病
