曹文明
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- AKT基因转染人脐带间质干细胞来源exosomes的分离及鉴定
- 2014年
- 该研究构建人AKT基因重组腺病毒载体(Ad-AKT),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC),分离hucMSC分泌的exosomes,检测exosomes中的成分变化,为exosomes的临床研究提供实验基础。该实验设计含有EcoR I、Xho I的限制性酶切位点的引物,PCR扩增AKT,将扩增产物克隆到带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标记的穿梭质粒上。重组穿梭质粒经线性化处理后,与腺病毒骨架质粒在Stbl3中重组,筛选获得含有AKT的重组腺病毒质粒,PCR鉴定并测序。重组病毒质粒用Pac I酶切线性化,转染293A细胞,制备高效表达的Ad-AKT,并转染hucMSC。结果表明,AKT基因重组腺病毒能高效转染hucMSC,hucMSC中AKT蛋白表达增多,并且转染AKT基因的hucMSC来源的exosomes(AKT-MSC-exosomes)中AKT蛋白也增多,说明通过基因修饰可以获得过表达目的蛋白的exosomes,为exosomes的来源及应用研究提供可选择的方法。
- 马洁赵媛媛曹文明孙晓仙孙丽钱晖许文荣朱伟
- 关键词：AKT腺病毒EXOSOMES脐带间质干细胞
- 脐带MSC来源外体上调Smad7表达修复大鼠急性心肌损伤被引量：1
- 2015年
- 目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外体(huc-exosomes)对SD大鼠急性心肌梗死(AMI)的修复作用及其可能的分子机制。方法体内构建SD大鼠AMI模型,分为假手术组、AMI+PBS组和AMI+exosomes组,小动物高频彩色超声仪检查心功能;72 h后处死取心肌组织,western blot检测组织内Smad7蛋白变化;体外培养心肌细胞系H9C2及原代培养心肌组织细胞,免疫荧光法鉴定原代培养心肌组织细胞,分为正常氧+PBS、正常氧+exosomes、缺氧+PBS、缺氧+exosomes 4组,分别提取各组的蛋白质或RNA,用定量PCR、western blot分别检测Smad7 mRNA和蛋白质变化。结果成功构建了SD大鼠AMI模型,超声心动图结果显示,尾静脉注射huc-exosomes可改善AMI大鼠的心功能。定量PCR及western blot结果显示,exosomes处理使心肌细胞中Smad7 mRNA和蛋白质的表达水平均上调。结论 huc-exosomes对AMI有修复作用,exosomes可能通过调节Smad7的表达促进细胞修复,Smad7可作为huc-exosomes介导损伤修复的判断指标。
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- 关键词：SMAD7脐带
- 构建大鼠急性心肌梗死模型并初步探讨人脐带间充质干细胞的修复作用被引量：3
- 2013年
- 目的构建大鼠急性心肌梗死(AMI)模型并初步探讨人脐带间充质干细胞(hucMSCs)对大鼠AMI损伤的修复效果。方法用小动物呼吸机维持呼吸,开胸后快速挤出大鼠心脏,结扎左冠状动脉前降支,并结合双层荷包缝合法构建模型。经心电图,超声心动图和TTC染色多方面验证。尾静脉注射hucMSCs,观察大鼠AMI损伤修复效果。结果成功构建了大鼠AMI模型,建模后成活率高(79.2%)。与模型+PBS组左心室收缩期容积[LV Vol;s(μL):164.73±15.54]和左心室收缩期内径[LVID;s(mm):5.77±0.23]相比,模型+MSCs组[LV Vol;s(μL):116.08±9.06]和[LVID;s(mm):4.96±0.17]明显降低,F分别为75.10和107.96,P均<0.01。与模型+PBS组左心室射血分数[LVEF(%):45.55±3.71]和左心室收缩分数[LVFS(%):23.56±2.38]相比,模型+MSCs组[LVEF(%):53.99±2.32]和[LVFS(%):28.76±1.52]明显增高,F分别为65.80和62.94,P均<0.05。HE染色结果表明,模型+MSCs组细胞损伤程度明显轻于模型+PBS组。结论成功构建大鼠AMI模型并初步证明hucMSCs可以促进大鼠AMI损伤修复,为进一步研究其机制奠定了基础。
- 赵媛媛曹文明马洁孙晓仙孙丽钱晖许文荣朱伟
- 关键词：急性心肌梗死动物模型人脐带间充质干细胞
