易玲
- 作品数：26 被引量：36H指数：2
- 供职机构：首都医科大学附属北京胸科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京科技计划项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学经济管理更多>>
- 一种大鼠抗小鼠CD137抗体或其功能性片段、工具抗体及其应用
- 本发明公开了一种大鼠抗小鼠CD137抗体或其功能性片段、工具抗体及其应用，涉及生物技术领域。该抗体具有高特异性、高亲和力、且抗体与小鼠CD137分子的结合表位明确，可用于鼠CD137分子的检测。特别是本发明所提供的大鼠抗...
- 易玲张洪涛王小珏褚洪迁闫卓红
- EGFR和PD-L1双靶向嵌合抗原受体构建及表达被引量：1
- 2020年
- 目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤,酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性,流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能,Fortebio测定抗体亲和力,抗体全长测序,经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment,scFv);人EGFR单克隆抗体杂交瘤系,经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因,构建scFv,克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接,克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体,使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞,获得包装病毒,感染293V细胞,FACS测定CAR膜表达,ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况,转染激活人外周血T细胞,验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3,具备高度配受体封阻性能,经人源化改造后,亲和力稳定(2.67×10 -10 mol/L),EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2),其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后,细胞膜表面表达EGFR-scFv,检测培养上清存在PD-L1-ScFv;CTZ0431-2感染293V细胞后,细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达,双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体,EGFR-CAR中度结合亲和力,此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。
- 李姝萍王小珏杨斌王和林王和林闫卓红易玲韦攀健郝建清张洪涛
- 天然调节T细胞与结核病免疫病理关联
- 2010年
- 目的检测调节性T细胞（Tr）在结核病病人是否增高，确证Tr与结核免疫病理的关联性，为Tr功能研究提供疾病模型。方法流式细胞术（FACS）分选CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T等主要淋巴细胞亚群，通过RT—PCR测定Foxp3基因在正常和结核病病人T细胞亚群中的表达，FACS多色分析Foxp3T细胞在CD4＋CD25＋细胞群体中的分布，累积病例分析Tr细胞在外周血扩增情况，免疫组化方法分析Tr在结核病理的浸润，结合临床资料分析Tr数量的改变与结核病的关联性。结果Foxp3基因在正常和结核病病人CD3＋CD4＋T细胞中特异性扩增，FACS分析表明Foxp3F要表达于CD4＋CD25＋。“亚群中，占CD4＋CD25highT细胞的80％以上，以CD4＋CD25highFoxp3＋三联标志检测40例正常与51例活动性结核病病人外周血Tr占CD4＋T细胞比例分别为（0．23±0．20）％和（1．01±1．00）％，结核病病人较正常人高4．4倍，Tr在结核病明显扩增（P〈0．01），结核病理组织中有高频率Foxp3＋细胞浸润。Tr扩增与结核病有效治疗和预后的关联性有深入探讨价值。结论Tr细胞在结核病病人增高，并与结核免疫病理损伤相关，结核病可作为Tr细胞功能研究的疾病模型。
- 赵雁林王敬张海青易玲李惠文韦攀健赵丹王小珏郑小芳张洪涛
- 关键词：天然调节性T细胞结核病免疫病理
- 一株针对人EGFR的单链抗体克隆与哺乳细胞表达被引量：1
- 2018年
- 目的：制备特异性抗人表皮生长因子受体（EGFR）的单链抗体（sc Fv）,鉴定其生物学活性,为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法：从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA,利用5’RACE技术扩增轻链和重链可变区（VL、VH）基因,构建具有VL、VH基因的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性;Fortebio检测抗原抗体间的亲和力,流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果：获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH,成功构建EGFR-sc Fv,特异性与天然EGFR蛋白结合,亲和力达3.22×10-9mol/L。结论：成功构建了抗人EGFR单链抗体,为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础。
- 高鑫韦攀健闫卓红易玲王小珏杨斌张洪涛
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体
- 小鼠4-1BB分子的配体识别主要区域定位及结构分析被引量：2
- 2009年
- 目的明确4-1BB分子的配体结合4-1BB分子胞外区的关键区域和基本结构。方法分区表达鼠4-1BB胞外区结构域及其天然配体，利用ELISA和Western blot等方法对4—1BB分子的配体识别结构域进行定位。结果4—1BB分子半胱氨酸富集结构域（cysteine-rich domain，CRD）Ⅱ是配体结合的主要结构域，不结合CRDⅠ和CRDⅢ。免疫刺激性抗4-1BB单克隆抗体2A，主要结合4—1BB分子CRD与跨膜区之间的连接区（STP区），同时对包括CRDⅡ的各个CRDs有弱识别，可封阻4-1BB与其配体结合。结论4-1BB分子配体的主要识别区位于4-1BB分子胞外CRDⅡ，具有空间结构特点，此为进一步分析结合区及其关键氨基酸提供了资料。
- 易玲赵雁林王小珏韦攀健张洪涛
- EGFRvIII和EGFR的双特异性人源抗体及其应用
- 本发明公开了一种EGFRvIII和EGFR的双特异性人源抗体及其应用，涉及生物医药技术领域。本发明公开的人源抗体具有如SEQ ID NO.6‑8所示的轻链CDR和SEQ ID NO.11‑12所示的重链CDR。该人源抗体...
- 张洪涛易玲闫卓红王小珏
- 自身免疫性疾病患者PD-L1自身抗体的筛查
- 2017年
- 目的调查自身免疫性疾病和结核病患者PD—L1自身抗体产生情况。方法以重组人PD-L1蛋白为抗原，间接ELISA和免疫印迹法对血清样本进行测定，包括63例类风湿性关节炎（RA）、38例系统性红斑狼疮（SLE）、42例强直性脊柱炎（AS）、28例干燥综合征（ss）、50例结核病（TB）和60例健康人对照。结果ELISA结果显示，与健康人对照组（0．1317±0．0284，N=20）相比，RA（0．1996±0．0579，P〈0．0001）、SLE（0．1689±0．0338，P=0．0005）和AS组（0．1729±0．0619，P=0．0107）PD-LI自身抗体水平显著增高，而SS组（0．1341±0．0397，P=0．6834）无显著性差异。与健康人对照组（0．1541±0．0139，N=40）相比，结核病组（0．1709±0．1069，P=0．4215）PD—L1自身抗体水平无显著差异，但存在ELISA检测阳性个体，经免疫印迹证实存在PD—L1自身抗体。在46％RA、26％SLE、29％AS、1l％SS和12％TB中可检出PD-L1自身抗体，而健康人对照组未检出。结论自身免疫性疾病可检测到PD-L1自身抗体，此为进一步研究PD-L1与免疫相关疾病和免疫检查点调控机理奠定了基础。
- 闫卓红王小珏郑小芳易玲韦攀健贾红艳杨斌张洪涛
- 关键词：PD-L1自身抗体自身免疫性疾病免疫印迹
- 卡介苗缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨卡介苗（BCG）缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用。方法选取主流结核病血清学检测抗原的4种不同组合试剂A（结核分枝杆菌抗体IgG检测试剂）、B（结核分枝杆菌抗体检测试剂）、C（结核杆菌特异性抗体检测试剂）、D（活动性结核抗体检测ELISA系统），通过免疫印迹、胶体金和酶联免疫吸附等免疫学方法检测109例活动性结核患者和97名健康人群[分为结核菌素纯蛋白衍生物试验（PPD）阳性和阴性组]的结核抗体，应用贝叶斯概率统计学方法，综合分析不同抗原组合对结核病检测准确率的影响。结果试剂A、B、C、D对活动性结核病IgG检出率分别是80．0％、66．7％、80．7％、56．0％，明显高于健康人群的23．9％、8．9％、6．6％、1．0％，差异均有统计学意义（X2值分别为47．53，51．59，90．48，69．68，均P〈0．01）。其中试剂A、B对健康人群结核抗体检出率随PPD阳性反应强度而增高（X2值分别为2．124，2．220，均P〈0．05），试剂C、D对健康人群结核抗体检出率与PPD反应强度无相关性（X2值分别为0．122，0．479，均P〉0．05），试剂D的准确率最高，其对活动性肺结核患者IgM检出率为2．1％。结论IgG检出的敏感性与抗原的选择及组合数量呈正相关，高的检测敏感性常伴随特异性的损失，选择BCG缺失抗原可显著提高检测特异性。
- 郑小芳易玲韦攀健贾红彦李惠文赵雁林张洪涛
- 关键词：结核抗原卡介苗血清学诊断
- EGFRvIII和EGFR的双特异性人源抗体及其应用
- 本发明公开了一种EGFRvIII和EGFR的双特异性人源抗体及其应用，涉及生物医药技术领域。本发明公开的人源抗体具有如SEQ ID NO.6‑8所示的轻链CDR和SEQ ID NO.11‑12所示的重链CDR。该人源抗体...
- 张洪涛易玲闫卓红王小珏
- 文献传递
- 天然调节T细胞与结核病免疫病理关联被引量：2
- 2010年
- 目的 检测调节性T细胞（Tr）在结核病病人是否增高,确证Tr与结核免疫病理的关联性,为Tr功能研究提供疾病模型.方法 流式细胞术（FACS）分选CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T等主要淋巴细胞亚群,通过RT-PCR测定Foxp3基因在正常和结核病病人T细胞亚群中的表达,FACS多色分析Foxp3 T细胞在CD4＋CD25＋细胞群体中的分布,累积病例分析Tr细胞在外周血扩增情况,免疫组化方法分析Tr在结核病理的浸润,结合临床资料分析Tr数量的改变与结核病的关联性.结果 Foxp3基因在正常和结核病病人CD3＋ CD4＋T细胞中特异性扩增,FACS分析表明foxp3主要表达于CD4＋ CD25high亚群中,占CD4＋ CD25highT细胞的80%以上,以CD4＋CD2high Foxp3＋三联标志检测40例正常与51例活动性结核病病人外周血Tr占CD4＋T细胞比例分别为（0.23±0.20）%和（1.01±1.00）%,结核病病人较正常人高4.4倍,Tr在结核病明显扩增（P〈0.01）,结核病理组织中有高频率Foxp3＋细胞浸润.Tr扩增与结核病有效治疗和预后的关联性有深入探讨价值.结论 Tr细胞在结核病病人增高,并与结核免疫病理损伤相关,结核病可作为Tr细胞功能研究的疾病模型.
- 赵雁林王敬张海青易玲李惠文韦攀健赵丹王小珏郑小芳张洪涛
- 关键词：天然调节性T细胞结核病免疫病理
