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海人藻酸受体GluK2亚基复制缺陷型腺病毒的构建: 2014年; 目的:构建海人藻酸(kainate,KA)受体GluK2亚基复制缺陷型腺病毒重组体。方法:以GluK2-pcDNA3.1真核表达载体为模板,经PCR扩增GluK2目的基因,然后将其亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,后将重组的穿梭质粒与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共同电转入BJ5183电穿孔感受态细胞筛选阳性同源重组子。阳性重组体经限制性内切酶PacⅠ消化,经脂质体转染入HEK293细胞进行包装与扩增。接着腺病毒经大量提取纯化后进行滴度测定。结果:GluK2腺病毒具有较强的感染能力(6.75×109ifu/ml)并可表达目的蛋白。结论:GluK2复制缺陷型腺病毒成功构建。GluK2腺病毒可高效感染原代神经元及神经细胞系,为进一步研究其对神经元的调控作用奠定基础。; 杜彩萍徐镇胡书群李婷侯筱宇; 关键词：腺病毒复制缺陷型

PSD-95及其突变体的重组腺病毒对皮质神经元的感染: 2009年; 目的构建PSD-95（postsynaptic density-95）及其突变体PSD-95Y523F和PSD-95Y533F（523和533位酪氨酸分别突变成苯丙氨酸）的复制缺陷型重组腺病毒载体，并检测腺病毒颗粒对体外原代培养皮质神经元的感染能力。方法双酶切将PSD-95及其突变体的基因分别从载体peDNA3．1（＋）亚克隆至穿梭载体pAdTrack—CMV中；电穿孔法将穿梭重组体转化到电转感受态细胞BJ5183中，使其与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组；同源重组体经PacI酶切线性化，脂质体法转入HEK293H细胞中进行病毒包装；病毒颗粒分别感染HEK293T细胞和原代皮质神经元，荧光检测或免疫印迹方法检测目的蛋白的表达水平。结果经酶切电泳鉴定和序列测定证明同源重组体中含序列正确的目的基因；重组腺病毒颗粒感染HEK293T细胞后，免疫印迹显示有较高水平的目的蛋白表达；重组腺病毒具有感染原代皮质神经元的能力，在未成熟神经元（体外培养5—9天）中感染率低，而在成熟神经元（体外培养13天）中感染率较高。结论成功构建了PSD-95、PSD-95Y523F、PSD-95Y533F的重组腺病毒载体；获得具有感染能力的重组腺病毒颗粒，易于感染成熟的神经元。; 徐镇杜彩萍侯筱宇; 关键词：PSD-95 腺病毒载体酪氨酸磷酸化

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徐镇