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徐皓
作品数:
4
被引量:33
H指数:3
供职机构:
中国科学院上海生命科学研究院
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相关领域:
化学工程
生物学
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合作作者
陈常庆
苏州医学院
李民
苏州医学院
杨如燕
中国科学院上海生命科学研究院
刘惠
中国科学院上海生命科学研究院
高长寿
中国科学院上海生命科学研究院
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陈常庆
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生物工程学报
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2000
2篇
1998
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重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNFα)工程菌高密度发酵研究
被引量:7
2000年
报道了 rh TNFα重组菌发酵条件及高密度、高表达发酵的研究。首先研究了营养成份对其生长和表达的影响 ,确定了半合成发酵培养基 ;筛选出了 rh TNFα生长和表达的最适宿主菌 E.coli YK5 37;研究了影响高表达的几个关键因素 ,建立了该类型重组菌的诱导表达条件。结果表明限制发酵过程中乙酸积累、控制在指数生长期进行诱导、持续诱导时间不超过 5 h是实现高密度、高表达发酵的关键条件。采用半经验补料流加公式 ,在 NBS Bio Flo30 0 0型 5 L 发酵罐中利用恒溶氧 -补料培养批技术 ,限制甘油浓度在 5 g/ L,可使 E.coli YK5 37/ p SB- TR最终菌体密度和 rh TNFα的产量分别达到 A6 0 0 12 6和 8.4g/ L。
李民
徐皓
周逸明
杨如燕
陈常庆
关键词:
肿瘤坏死因子
高密度发酵
RHTNFΑ
工程菌
人肿瘤坏死因子及其突变体的基因工程下游工艺研究
被引量:5
1998年
研究了重组人肿瘤坏死因子(rhTNFα)及其突变体[Lys2]人肿瘤坏死因子[Lys2]rhTNFα)的基因工程下游工艺。rhTNFα和[Lys2]rhTNFα的温控表达工程菌株在B.BraunE10型15L自控罐中经发酵每升可得50g湿菌体。rhTNFα和[Lys2]rhTNFα的表达水平仍能保持在50%以上,且表达产物为可溶性蛋白。所得菌体经超声破菌、硫酸铵沉淀,然后依次用DEAESepharoseFF、CMSepharoseFF和SephacrylS200柱层析进行分离纯化,由每升发酵液菌体最终可得1g左右的纯品,纯度达到98%左右,rhTNFα的比活为~15×108IU/mg,[Lys2]rhTNFα的比活为~6×108IU/mg。
徐皓
高长寿
刘惠
邓芳
潘华
陈常庆
关键词:
肿瘤坏死因子
突变型
发酵
高密度发酵生产突变型重组人肿瘤坏死因子rhTNFα-DK2的研究
被引量:19
1998年
通过对发酵基质和发酵关键参数的优化,确定了发酵培养基的磷酸盐浓度为0.15M,甘油浓度为1.2ml/L,补料中甘油浓度为20ml/L,发酵过程中溶解氧控制在30%~60%,pH控制在6.85左右。在5L在NBS-Bioflo3000型自动控制发酵罐中采取加速补料的补料分批培养,重组大肠杆菌YK537/pSB-TK经10h30°C培养和5h42°C诱导培养,最终密度达到60OD600,rhTNFα-DK2的表达量占菌体总蛋白的50%以上,每升发酵液纯化可得到近2g的rhTNFα-DK2。
徐皓
李民
阮长庚
陈常庆
关键词:
补料分批培养
人肿瘤坏死因子
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