徐清
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- hErmin160蛋白的表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2008年
- 目的:对hErmin氨基端160个氨基酸(hErmin160)蛋白进行表达、鉴定和纯化并制备其多克隆抗体,为研究hEr-min功能奠定基础.方法:PCR扩增编码hErmin160的核苷酸序列,克隆入原核表达载体pET41-b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达hErmin160融合蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定,经镍柱纯化后,免疫家兔,制备其多克隆抗体,并对免疫后抗血清进行亲和纯化,用Western-Blot检测抗体纯化的效果.结果:测序证实获得hEr-min氨基端前160个氨基酸的编码序列;SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量为51ku,与理论值相符;灰度扫描分析hErmin160融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的10%,纯化产物纯度达92%;Western Blot确认所表达的蛋白;抗血清和纯化后的多克隆抗体WestermBlot反应均为阳性.结论:利用大肠杆菌融合表达系统,获得了较高纯度的可溶形式hErmin160融合蛋白,并通过亲和纯化成功制备hEr-min160多克隆抗体.
- 徐清赵玮钦王涛关路媛陈南春张斌
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- Nkx2.2的克隆及其在C6细胞中的表达
- 2009年
- 目的:克隆大鼠转录因子Nkx2.2,构建其真核表达载体,并观察其在大鼠C6胶质瘤细胞系中的表达.方法:利用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增包含Nkx2.2编码区的cDNA片段,克隆连接至pMD20-T载体,再以pMD20-T-Nkx2.2为模板扩增出Nkx2.2编码区序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)中,测序验证后,转染C6胶质瘤细胞.用anti-His抗体和间接免疫荧光染色法检测Nkx2.2在C6细胞中的表达.结果:测序证实所克隆的Nkx2.2编码区正确地连接入pcDNA3.1-myc-his(-)中,免疫荧光检测证实其在C6细胞中得到了有效表达.结论:成功克隆了大鼠Nkx2.2编码区片段,构建了其真核表达载体,并在C6细胞中得到了有效表达,为进一步研究Nkx2.2基因的功能,尤其是探讨其在神经系统中的作用奠定了基础.
- 王伟王涛徐清关路媛张斌
- 关键词：克隆C6细胞真核表达
- Sirt2基因的克隆及其在HEK293中的表达
- 2009年
- 目的:克隆大鼠Sirt2基因,构建其真核表达载体并在HEK293细胞中表达。方法:利用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增出包含Sirt2编码区的cDNA片段,产物纯化后T-A克隆连接至pMD20-T载体。以此为模板,将该基因编码区克隆入真核表达载体pcDNA3.1myc-his(-)中,转染HEK293细胞检测其表达。结果:测序证实所克隆的Sirt2编码区cDNA正确地插入pcDNA3.1myc-his(-)中,经免疫荧光检测证实其在HEK293细胞中得到表达。结论:成功克隆了大鼠Sirt2 cDNA,构建了其真核表达载体,并在HEK293细胞中得到有效表达,为进一步研究大鼠Sirt2的功能奠定了基础。
- 王涛王伟徐清关路媛张斌
- 关键词：真核表达克隆CDNA
- 睡眠剥夺条件下大鼠中枢神经系统c-fos和nestin的表达特点被引量：4
- 2008年
- 目的:分析睡眠剥夺条件下大鼠中枢神经系统c-fos和nestin在不同部位的表达特点,为进一步研究睡眠剥夺所造成生理影响的分子机制提供线索.方法:采用小平台水环境法建立大鼠睡眠剥夺24,48,72h模型,设立大平台对照组和正常饲养对照组,RT-PCR方法分别检测各组大鼠海马、皮质和小脑中c-fos和nestin的表达水平.结果:与对照组相比,睡眠剥夺组c-fos表达升高,nestin表达降低.结论:睡眠剥夺影响大鼠中枢神经系统c-fos和nestin基因的表达.
- 关路媛王涛徐清王伟陈苏民张斌
- 关键词：睡眠剥夺逆转录聚合酶链反应C-FOSNESTIN
