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重组人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中的表达与纯化: ＜正＞目的组织因子（tissue factor,TF）起始的外源性凝血途径在包括动脉粥样化损伤、败血症、肿瘤、炎症等许多疾病的病理生理过程中起到重要作用,其介导的凝血及血栓形成导致相关疾病恶化甚至患者死亡。组织因子途径抑...; 程旭徐伟杰宋丽萍刘兰霞董霞张海玲朱敦皖冷希岗; 文献传递

功能化多壁碳纳米管对血管内皮细胞毒性的初步研究: 2009年; 目的由于碳纳米管的广泛应用，其对人类及环境造成的影响日益受到人们的关注。血管是碳纳米管进人人体的首要通道之一，因此探讨功能化与原始状态的多壁碳纳米管对血管内皮细胞的细胞毒性作用具有重要意义。方法自人脐静脉分离血管内皮细胞，免疫组化进行细胞鉴定。选择0．5～1μm经羧基修饰的功能化多壁碳纳米管（f-CNTs）与同等长度未经修饰的多壁碳纳米管（p-CNTs）制备颗粒悬液，与血管内皮细胞共育后，利用噻唑蓝实验（MTT比色法）检测细胞活力，透射电镜进行细胞形态学观察；制备碳纳米管透析液，通过MTT实验检测其对细胞的毒性作用。结果①2种纳米管均对原代脐静脉内皮细胞（HUVEC）产生一定的毒性作用，而且其细胞毒性随剂量递增呈上升趋势。与细胞共育24h后，p-CNTs的毒性大于f-CNTs；而共育48h及72h后，f-CNTs毒性大于p-CNTs。②透射电镜实验表明，f-CNTs共育细胞内空腔明显多于p-CNTs，而空腔内f-CNTs聚集体紧密程度明显小于p-CNTs。③对2种多壁碳纳米管透析后的细胞培养基对细胞活力无明显影响。结论根据上述结果笔者推测，p-CNTs细胞毒性的主导因素是聚集程度，f-CNTs对细胞毒性的主导因素为表面效应。进入细胞的碳纳米管数目增多，造成细胞损伤或阻断细胞内代谢通路，可能是共育后期f-CNTs细胞毒性大于p-CNTs的原因。; 朱筠董霞宋丽萍王海徐伟杰朱敦皖冷希岗; 关键词：细胞毒性血管内皮细胞

包括人类组织因子途径抑制因子的重组质粒及高表达人类组织因子途径抑制因子重组酵母菌: 本发明公开了包括人类组织因子途径抑制因子的重组质粒及高表达人类组织因子途径抑制因子重组酵母菌，包括人类组织因子途径抑制因子的重组质粒，是以序列表SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3所述序列为PCR引物，mTFPI...; 冷希岗徐伟杰朱筠董霞宋丽萍; 文献传递

人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中高拷贝表达: 2011年; 目的构建高拷贝表达重组人组织因子途径抑制因子的毕赤酵母并对蛋白表达条件进行初步优化，为相关研究奠定基础。方法将PCR扩增得到的TFPIcDNA片段与表达质粒pPIC9K连接构建重组质粒rhTFPI—pPIC9K，采用PCR方法及DNA测序对其进行鉴定。将重组质粒转化酵母细胞GSI15，利用G418抗性实验筛选含有高拷贝TFPIcDNA的毕赤酵母菌株，采用WesternBlot和TFPI检测试剂盒分析重组蛋白表达。通过改变诱导温度、诱导时间及甲醇浓度对重组蛋白表达条件进行初步优化。结果PCR扩增rhTFPI-pPIC9K得到预期的扩增条带（1．2kb），经酶切图谱分析及测序确认成功构建表达质粒rhTFPI—pPIC9K。实时定量PCR结果显示，通过G418筛选获得了含高拷贝基因的酵母细胞，WesternBlot结果显示含基因拷贝数与蛋白表达量呈正相关。通过对表达条件的优化，明显提高了TFPI重组蛋白的表达量，重组TFPI表达量高达（9．95±0．78）mg／L，活性达到（3．91±1．37）U／mL。结论成功构建了高效表达TFPI重组蛋白的毕赤酵母细胞株，为TFPI功能研究及在相关疾病防治中的应用提供了坚实的实验基础。; 程旭徐伟杰宋丽萍刘兰霞董霞张海玲朱敦皖冷希岗; 关键词：组织因子途径抑制因子毕赤酵母

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徐伟杰

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