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无脊椎动物体液免疫研究进展被引量：3: 2009年; 无脊椎动物的体液免疫机制近年来逐渐得到重视。无脊椎动物缺乏真正的抗体和特异性的免疫细胞,机体防御反应依靠非特异的先天免疫结构。无脊椎动物的自然免疫是由细胞免疫和体液免疫共同完成的。阐明无脊椎动物的体液免疫机制对于研究免疫系统的进化有重要作用,同时对于无脊椎动物的资源开发与利用有积极的促进作用,本文仅对近年来无脊椎动物体液免疫机制的研究进展作一综述。; 曾祥兴张驰李康生; 关键词：无脊椎动物体液免疫

Zwint-1及其变异体Zwint-1v在HeLa细胞不同细胞周期中的亚定位被引量：3: 2011年; 目的:探讨Zw10结合因子-1(zeste white 10 interactor-1,Zwint-1)及其变异体(Zwint-1v)在HeLa细胞不同细胞周期中的亚定位。方法:采用胸腺嘧啶核苷双阻断法将HeLa细胞同步化,通过瞬时转染及间接免疫荧光检测,观察Zwint-1及Zwint-1v在HeLa细胞不同细胞周期中的亚定位。结果:在HeLa细胞间期,Zwint-1野生型定位于细胞质,而Zwint-1v定位于细胞核;在分裂期,Zwint-1野生型及Zwint-1v定位于纺锤体与着丝粒上。Zwint-1v定化较野生型更趋近于细胞核。结论:Zwint-1及Zwint-1v在HeLa细胞不同细胞周期的亚定位存在差异。; 张驰李蕊李康生; 关键词：HELA细胞

人天然免疫分子Tetherin基因的克隆表达及其对流感病毒增殖的影响被引量：1: 2014年; 目的:研究人天然免疫分子Tetherin的抗流感病毒作用。方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆Tetherin基因并构建真核表达质粒,经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定后,脂质体转染法将Tetherin导入犬肾上皮细胞(MDCK),间接免疫荧光检测Tetherin细胞中的定位。利用流感病毒H1N1(PR8)病毒空斑形成实验检测Tetherin与流感病毒增殖的关系。结果:RT-PCR扩增出543 bp片段,成功克隆Tetherin;免疫荧光结果表明Tetherin定位于细胞膜。PR8空斑形成实验提示在转染与未转染Tetherin的MDCK中,病毒空斑没有明显形状大小或数量的区别。结论:Tetherin不能有效抑制流感病毒增殖。; 邓玉雪李蕊张驰代剑平陈小璇王革非李康生; 关键词：天然免疫 TETHERIN 流感病毒抗病毒

负链RNA病毒反向遗传通用载体的构建与鉴定: 2010年; 目的:用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术,其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体,可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA。为此,构建负链RNA病毒反向遗传通用的载体。方法:为提高转染和表达效率,首先改造pcDNA3载体,通过酶切删除pcDNA3载体中非必需序列,在保留Amp抗性的前提下,通过酶切去除pcDNA3载体中非必需的Kan抗性表达盒与CMV启动子前区。利用长引物合成含有反向polI启动子与多克隆位点的基因片段。将合成后的片段酶切、补平粘端、连接,反向插入至经改造后的pcDNA3载体中,构建反向遗传通用表达载体。采用PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序进行验证。结果:PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序结果表明,载体构建正确,合成及插入序列与预期设计完全一致。结论:成功构建具有CMV与polI双向启动子的反向遗传通用载体,为建立负链RNA病毒反向遗传平台提供了研究基础。; 王革非张驰曾祥兴张衡陈幼莹李卫中李康生; 关键词：RNA病毒

A型流感病毒NS1蛋白羧基端PL结构域影响NS1在细胞核内的定位被引量：3: 2010年; A型流感病毒NS1蛋白羧基端4个氨基酸可以与PDZ结构域(the domain of PSD95,Dig and ZO-1)相结合,称为PL结构域(PDZ ligand domain).对不同亚型或毒株的流感病毒而言,其NS1蛋白PL结构域的组成存在比较大的差异.有研究发现这种差异能够影响NS1与宿主细胞蛋白的相互作用进而影响病毒的致病力.为进一步探讨PL结构域对NS1蛋白生物学特性的影响,首先构建出4种不同亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H5N1、H9N2)来源的NS1绿色荧光蛋白表达质粒.在此基础上,对野生型H3N2病毒NS1表达质粒进行人工改造,将其PL结构域缺失或者替换为其他亚型流感病毒的PL结构域,制备出4种重组NS1蛋白表达质粒.通过比较上述不同NS1蛋白在HeLa细胞中的定位情况发现,只有野生型H3N2病毒的NS1蛋白可以定位于核仁当中,而野生型H1N1、H5N1、H9N2病毒的NS1蛋白以及PL结构域缺失或替代的H3N2病毒NS1蛋白都不能定位于核仁.而通过比较上述NS1蛋白在流感病毒易感的MDCK细胞中的定位,进一步发现所有这些蛋白均不定位于核仁.上述结果表明:PL结构域的不同可以明显影响NS1蛋白在HeLa细胞核内的定位和分布,这有可能造成其生物学功能的差异.同时,NS1蛋白在细胞核内的定位还与宿主细胞的来源有着密切关系.; 张丹桂李卫中王革非张衡曾俊陈幼莹张驰曾祥兴李康生; 关键词：A型流感病毒 NS1蛋白核仁

A549和MDCK细胞外源性表达人APOBEC-3F和APOBEC-3G对流感病毒复制和突变的影响: 2010年; 目的:研究人载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽-3F(human apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic-polypeptide 3F,hA3F)和hA3G对流感病毒的复制和突变的影响。方法:外源性hA3F和hA3G通过脂质体转染至A549和MDCK细胞中,经Western blotting和间接免疫荧光鉴定后,用流感病毒进行感染,通过检测半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)和空斑实验确定病毒滴度;使用不同初始感染剂量,绘制动态的病毒生长曲线,以确认hA3F和hA3G对流感病毒复制的影响。Western blotting检测流感病毒感染后转染细胞表达外源性hA3F和hA3G的情况。病毒在转染细胞和对照细胞中连续传代,RT-PCR和测序分析其血凝素HA基因的突变频率。结果:TCID50检测和空斑实验结果表明在hA3F和hA3G表达细胞中,流感病毒的滴度与对照细胞间差异无统计学意义(P>0.05);病毒生长曲线表明,不同初始感染剂量、不同感染时相,转染hA3F和hA3G的细胞对人流感病毒的抑制作用与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果表明感染后48h仍能够在MDCK细胞中检测到hA3F和hA3G的重组蛋白。病毒HA片段的测序分析表明,转染hA3F和hA3G的细胞对流感病毒基因组的致突变频率与对照细胞间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究表明hA3F和hA3G这两个重要的APOBEC成员,对人流感病毒的复制效率及突变频率无明显作用。; 王革非彭程曾祥兴张驰李康生; 关键词：流感病毒突变 A549

稳定表达重组人CD317细胞系的构建及其对流感病毒的抗性研究: 2015年; 目的:研究表达重组人CD317细胞系对流感病毒的抵抗作用。方法:将CD317基因真核表达质粒转染MDCK细胞,用含有G418培养基进行筛选,挑取抗性细胞克隆扩大培养,免疫荧光检测重组CD317表达。用流感病毒PR8感染稳定表达重组人CD317;MTT法检测细胞活力并评价其对流感病毒的抗性作用,收集感染细胞提取RNA,用定量RT-PCR检测流感病毒在细胞中的载量。结果:免疫荧光结果表明挑取抗性细胞克隆稳定表达重组人CD317;CCK-8检测显示PR8感染后,CD317活性高于对照的空载体表达细胞。定量RT-PCR表明,PR8在该稳定表达CD317的细胞中基因载量高于空载体细胞。结论:稳定表达重组人CD317可抵抗流感的破坏作用,提示CD317可抑制PR8释放。; 王革非张驰李康生; 关键词：流感病毒细胞活性

人免疫缺陷病毒TAT蛋白转导肽与人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F/3G串联锌结合域的融合表达: 2010年; 目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多步酶切克隆得到APOBEC3F/3G的3个串联ZBRs基因片段,并将其与人免疫缺陷病毒(HIV)的TAT蛋白转导域基因克隆至原核表达载体(pET32a),转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。结果:酶切和测序鉴定,得到含有HIV-TAT和3个ZBRs基因的重组质粒;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析,融合蛋白在BL21(DE3)中获得表达,占菌体总蛋白的20%。结论:获得含HIV-TAT和3个ZBRs的融合表达重组蛋白,为进一步研究APOBEC3F/3G抗病毒机制,也为其在抗病毒治疗中的应用打下基础。; 王革非彭程张驰曾祥兴李康生; 关键词：载脂蛋白B 蛋白转导

无脊椎动物细胞免疫研究进展被引量：4: 2009年; 无脊椎动物的细胞免疫机制近年来逐渐得到重视。无脊椎动物缺乏真正的抗体和特异性的免疫细胞，机体防御反应依靠非特异的固有免疫结构。无脊椎动物的自然免疫是由细胞免疫和体液免疫共同完成的。因而阐明无脊椎动物的细胞免疫机制对于研究免疫系统的进化有重要意义，同时对于无脊椎动物的资源开发和资源利用有积极的促进作用。; 曾祥兴张驰李康生; 关键词：无脊椎动物细胞免疫免疫细胞血细胞体腔细胞

人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究: 2011年; 目的:研究人流感病毒(H1N1)及禽流感病毒(H5N1)感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法:分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素(IL)-1β、-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α变化。结果:与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1。结论:H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关。; 张驰王革非李康生; 关键词：H1N1 H5N1 流感病毒

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张驰

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