张晴
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 果蝇polycomblike蛋白多克隆抗体的制备及纯化被引量：1
- 2012年
- 目的构建、表达并纯化polycomblike(Pcl)6×His融合蛋白,制备该融合蛋白的大鼠多克隆抗体,纯化并鉴定该多克隆抗体。方法通过PCR反应从野生型果蝇W1118成虫cDNA中扩增Pcl基因部分片段,构建pRSETA-Pcl重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,Ni-NTA superflow层析柱纯化该融合蛋白,Western-blotting分析检测。用纯化的融合蛋白免疫SD大鼠,制备抗Pcl的多克隆抗体,溴化氰活化琼脂糖凝胶4B偶联法纯化多克隆抗体,Western-blotting检测该抗体的效率及特异性。结果成功构建原核表达质粒pRSETA-Pcl,大量表达并纯化Pcl融合蛋白。免疫大鼠获得多克隆抗体并纯化,Western-blotting及免疫组织化学染色结果表明该抗体可以检测Pcl全长蛋白及内源性蛋白。结论本研究获得了纯化的Pcl融合蛋白,成功制备并纯化了特异性较高的抗Pcl多克隆抗体,为进一步研究Pcl基因的功能奠定了基础。
- 张晴汪晓纯金丽华
- 关键词：果蝇原核表达多克隆抗体
- 果蝇jumeaux蛋白多克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的原核表达及纯化重组果蝇jumeaux(jumu)蛋白,制备大鼠抗果蝇jumu多克隆抗体。方法用RT-PCR方法扩增jumu基因,并将其克隆到原核表达载体pRSETA中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导His-jumu融合蛋白的表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot方法鉴定基因片段的正确性及蛋白表达的特异性后,用Ni-NTA亲和层析柱纯化带有6×His标签的融合蛋白,用纯化后的蛋白免疫SD大鼠制备多克隆抗体。以Western blot、免疫荧光染色法鉴定抗体的特异性,并用制备的抗体检测jumu在果蝇不同器官中的表达情况。结果成功构建了pRSETA-jumu原核表达质粒,jumu融合蛋白在大肠杆菌内高表达并纯化,免疫SD大鼠得到抗jumu多克隆抗体。用Western blot和免疫荧光染色检测发现制备的抗体有较强的特异性,并能检测内源性蛋白。通过免疫荧光染色发现jumu的表达存在组织特异性,且在唾液腺中的表达量最高。结论成功获得了抗jumu蛋白的特异性抗体,为进一步研究jumu蛋白的功能和作用机制奠定了基础。
- 郝阳光张晴金丽华
- 关键词：多克隆抗体免疫荧光染色基因功能
