张春燕
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
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- SND1蛋白与HuR蛋白相互结合作用
- 2014年
- 人源SND1（staphylococcal nuclease domain containing 1）蛋白由N端的SN（staphylococcal nucleases）结构域和C端的TSN（Tudor-SN5）结构域组成,其中SN结构域又包含SN1~SN4四个重复的功能片段.本课题组前期研究结果表明,SND1蛋白可以通过SN结构域与G3BP（Ras-GAP SH3 domain-binding protein）蛋白相互结合,共同参与细胞应激颗粒（stress granules,SGs）的形成.SGs是真核细胞在受到氧化应激、病毒感染等外界刺激时在胞浆内形成的与RNA代谢相关的颗粒状结构.对于SGs的成分鉴定及相互作用的分析一直是学者们研究的热点.本研究中,免疫共沉淀实验结果表明,以抗SND1抗体可以共沉淀出HeLa细胞内另一个重要的应激相关人类抗原R（human antigen R,HuR）蛋白.另外,利用脂质体转染法将pcDNA3-FLAG-HuR重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,成功过表达外源性的FLAG-HuR融合蛋白,再以抗FLAG标签抗体又可以反向共沉淀出内源性SND1蛋白,证明SND1与HuR之间存在蛋白质间的相互结合作用.细胞免疫荧光实验结果表明,当给予HeLa细胞0.5 mmol/L亚砷酸钠氧化应激时,SND1与HuR蛋白共同定位于胞浆中的SGs结构中.GST-pulldown实验结果进一步表明截短的SN结构域可以结合HuR蛋白,其中以SN1功能片段的结合能力最强,表明SND1蛋白是通过SN结构域与HuR蛋白形成应激复合物,参与SGs的胞浆组装.并不定位于SGs的TSN结构域亦可结合HuR蛋白,提示SND1-HuR的蛋白相互作用可能并不局限于SGs,具有其它方面的功能意义.
- 高星杰张毅宋娟付雪苏超张桂敏张春燕于林姚智杨洁
- 关键词：免疫共沉淀结构域
- Tudor-SN通过调控染色质重塑促进DNA损伤修复的分子机制
- 目的： 人体在自然条件下，会被环境中各种刺激因素以及细胞内源性应激造成DNA发生损伤，严重影响了细胞内信息遗传和基因编码的方式。在遭受刺激后，细胞会通过激活一套完整精细的过程，包括DNA断裂识别，检查点的激活，染色质重...
- 张春燕
- 关键词：细胞学DNA损伤染色质重塑
- pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒的构建及鉴定
- 2016年
- 目的构建并鉴定pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒,为深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病的生物学作用奠定基础。方法提取He La细胞总RNA,反转录出含Argonaute1的c DNA;以Argonaute1 c DNA为模板,采用PCR法扩增出带有EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切的目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到pmCherry-C1载体上;将构建成功的pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒转染入He La细胞内,以Western blotting法检测Argonaute1与樱桃红(Cherry)蛋白的融合表达情况;以激光共聚焦显微镜观察细胞内Argonaute1蛋白与细胞应激颗粒的标记蛋白(G3BP)及加工体的标记蛋白(DCP1α)的应激共定位关系。结果以EcoRⅠ、Bam HⅠ单、双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误;融合蛋白表达阳性;当细胞受到应激时,Argonaute1蛋白与G3BP、DCP1α蛋白共定位。结论本研究成功构建重组pmCherry-C1-Argonaute1质粒。该质粒可有效表达Cherry标记的Argonaute1融合蛋白,有助于深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病领域的生物学作用。
- 崔晓腾高星杰张春燕付雪苏超任媛媛杨洁
- 关键词：重组质粒融合蛋白
- 生物信息学科研转化教学的方法与实践被引量：8
- 2010年
- 生物信息学(bioinformatics)是一门交叉学科,已经成为生命科学研究领域的重要工具,具有很强实践性和进展性。在教学中把前沿性的科研成果融入教学实践,充实教学内容,使科研转化教学并促进教学的进步。将丰富的科研资源转化为教学资源,发挥生物信息学的应用特性,形成培养学生能力的实践教学模式。
- 邢军王兆月耿鑫张春燕田心
- 关键词：生物信息学实践教学
- 活细胞内以光漂白荧光损失(FLIP)技术分析HuR蛋白的应激动力学行为
- 2014年
- 人类抗原R(human antigen R,HuR)是一种多功能RNA结合蛋白,参与细胞应激颗粒(stress granules,SGs)的构成。SGs是细胞在受到外界环境刺激时在胞浆中形成的颗粒状结构。该研究是利用光漂白荧光损失(fl uorescence loss in photobleaching,FLIP)技术对活细胞内的HuR蛋白颗粒进行应激动力学分析。首先,利用脂质体将RFP-HuR重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,以Western blot和细胞免疫荧光实验确定是否实现对于HuR蛋白的红色荧光蛋白(red fl uorecent protein,RFP)标记;然后以405 nm激光束脉冲式重复光漂白HuR应激颗粒,分别监测同一漂白细胞内的其他HuR颗粒以及核内荧光信号,并以邻近的未漂白细胞作为对照组。实验结果表明,转染重组质粒后可有效表达RFP-HuR融合蛋白,且与SGs标记蛋白G3BP存在共定位关系。在第一个光漂白循环,漂白区荧光密度便从2 500 a.u.降低至0 a.u.;而经过约12个漂白循环(240 s)后,邻近HuR颗粒的荧光密度从漂白前的1 800 a.u.左右降低并维持在200 a.u.左右,表明活细胞内的HuR颗粒呈现高度的动态性;而胞核区荧光密度亦从4 400 a.u.降低至2 000 a.u.左右,表明HuR蛋白是一种核浆穿梭蛋白,在SGs、胞浆及胞核之间存在一定的动态平衡。利用FLIP技术可以分析并比较SGs不同成分的应激动力学属性,有助于进行SGs相关临床疾病的分子机制探讨。
- 高星杰张毅付雪苏超张春燕张桂敏尹洁王鑫廷姚智杨洁
- 关键词：活细胞荧光标记
- 可兴奋神经元典型放电的计算机仿真被引量：2
- 2004年
- 目的 :在计算机上仿真可兴奋神经元的3类典型放电形式并用于神经编码算法的研究。方法 :用对模拟神经元放电的Chay 模型进行数值计算的方法 ,仿真不同参数下神经元的放电。结果 :实现了可兴奋神经元的3类典型的放电形式 :周期性重复放电 ,簇放电及两者混合类型放电。结论
- 张春燕田心
- 关键词：放电类型
- DTI对正常成人脑结构年龄相关性变化及白质纤维束的研究
- 目的：
弥散张量成像(DTI)是利用水分子的弥散变化反映组织结构变化的新型成像方法。本研究旨在通过定量测定各不同年龄组人群的白质纤维和灰质核团的各向异性及平均弥散系数(DCavg)的变化间接反映脑显微结构随年龄增长...
- 张春燕
- 关键词：弥散张量成像年龄增长DTI
- 文献传递
- SND1低表达宫颈癌CasKi细胞稳定株的构建及其生物学功能变化被引量：1
- 2017年
- 目的构建SND1低表达的人宫颈癌CasKi细胞稳定株,探讨SND1低表达对CasKi细胞生物学功能的影响。方法 CasKi细胞随机分为六组,空白对照组不做处理,阴性对照组、干扰1~4组分别转染TRC2-p LKO-puro Vector的空载慢病毒液及SND1 shRNA(1~4)慢病毒液,用嘌呤霉素筛选CasKi细胞稳定株。分别用Western blotting技术、RT-PCR技术检测CasKi细胞内SND1蛋白、mRNA表达,确认转染效率。用CCK-8法检测CasKi细胞增殖活力(OD_(450)值),用细胞划痕实验检测CasKi细胞相对迁移距离。结果空白对照组细胞全部死亡,阴性对照组及干扰1~4组细胞部分存活,证明细胞稳定株转染构建成功。干扰1~4组SND1蛋白、mRNA相对表达量与空白对照组、阴性对照组比较,P均<0.05;干扰3、4组与其他组比较,P均<0.05。干扰3、4组OD_(450)值、相对迁移距离与空白对照组、阴性对照组比较,P均<0.05。结论成功构建了SND1低表达的CasKi细胞稳定株;SND1低表达的CasKi细胞增殖和迁移能力降低。
- 孟浩付晓张春燕辛灵彪任媛媛杨洁何津岩
- 关键词：子宫颈肿瘤CASKI细胞细胞迁移
- 重组pCMV-N-Tudor-SN点突变质粒的构建及表达被引量：1
- 2016年
- 目的:构建Tudor-SN蛋白的Serine426(S426)、Serine781(S781)、Threonine240(T240)和Threonine429(T429)的点突变质粒,并使该重组质粒能够在He La细胞中融合表达。方法:利用定点突变技术,对Tudor-SN蛋白进行S426A、S781A、T240A、T429A点突变,通过双酶切的方法获得Tudor-SN.Mutants片段,最后将其连入到p CMV-N-Flag载体中。在He La细胞中转染该质粒,利用Western blot技术检测质粒表达效率。结果:(1)重组质粒经双酶切鉴定,可以观察到载体与Tudor-SN.Mutants的条带。(2)转染突变质粒后可看出He La细胞中有Flag蛋白表达。结论:质粒构建成功,可以用于下一步科学研究使用。
- 杨文栋苏超张春燕赵亚丽任媛媛高星杰杨洁何津岩
- 关键词：重组质粒
- 神经元群体编码的方法研究及应用
- 郑旭媛陶华英崔林阳张春燕邢立军韩丽英
- 采用群体编码有利于神经信息表达的稳定性和精确性，并且通过组合可以产生比神经元数目多的不同表示，从而提高了神经系统的表达能力。该课题对神经元群体放电的频率和时间编码模式进行探索性研究，进行了算法仿真和程序编制。以癫痫动物特...
- 关键词：
