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人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞被引量：4: 2012年; 为建立稳定的猪血管内皮细胞系,用于猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型,本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),通过G418或嘌呤霉素筛选阳性克隆,并进行细胞传代研究和细胞形态学及表型鉴定。分别获得了两种方法建立的永生化猪血管内皮细胞系SUVEC-hT和SUVEC-ST。两种细胞系均呈铺路石样单层排列生长,具有高度的增殖活性,在传代70代后不表现任何衰老细胞的特征,并保持接触生长抑制。SUVEC-hT细胞系持续表达hTERT、CD31、CD34和von Willebrand factor,并能摄取Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)。SUVEC-ST细胞系持续表达SV40 LT、CD31和CD34,并能摄取Dil-Ac-LDL。两个细胞系均保持正常的核型并对CSFV敏感。结果表明通过表达外源的hTERT或SV40 LT,SUVEC已被永生化,并且保留了血管内皮细胞的主要生物学特征。; 张思春余乐李素涂长春; 关键词：猪血管内皮细胞人端粒酶催化亚基 SV40 LT 永生化

人端粒酶催化亚基和SV40大T抗原介导的猪血管内皮细胞永生化研究: 血管内皮细胞（EC）指血管内表面形成的单层扁平细胞，它们在多种生理过程中发挥着重要的作用。猪的血管内皮细胞是猪瘟病毒（CSFV）的主要靶细胞，其感染CFSV后可引起严重的广泛性出血，是导致病猪死亡的主要原因之一。因此EC...; 张思春; 关键词：血管内皮细胞人端粒酶催化亚基永生化; 文献传递

猪瘟病毒蛋白E2、N^(pro)基因的克隆表达及纯化被引量：2: 2012年; 克隆了猪瘟病毒(CSFV)石门株E2和Npro基因,并分别插入pGEX-6p-1表达载体中,构建了原核重组表达质粒。经IPTG诱导后,应用SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组质粒均得以成功表达。使用超声法破碎菌体获得蛋白,将带有GST标签的融合蛋白进行亲和层析,其中E2和Npro的表达形式分别为包涵体表达和可溶性蛋白表达。将E2变性后重折叠,应用亲和层析法纯化蛋白,Western blot检测发现CSFV蛋白E2能够被CSFV阳性血清识别,具有良好的反应原性,而Npro不能与CSFV阳性血清反应。; 高璐璐张思春郭焕成涂长春; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白原核表达

SV40 LT抗原介导的蝙蝠胎儿肾细胞永生化被引量：1: 2014年; 蝙蝠是许多新发人兽共患病病毒的自然储存宿主,由于缺乏蝙蝠细胞系,只能利用其他哺乳动物细胞系来分离蝙蝠病毒,因此成功分离的几率较低。为建立稳定的蝙蝠细胞系,本研究利用胰酶消化法培养东亚水鼠耳蝠(Myotis petax)的胎儿原代肾细胞。利用重组逆转录病毒转导法将SV40 LT抗原基因转导入蝙蝠胎儿原代肾细胞,经嘌呤霉素筛选获得LT基因整合和表达的阳性细胞,并进行连续传代培养。RT-PCR和western blot检测表明转导的细胞中有SV40 LT基因的整合和表达。转导细胞在软琼脂中培养不能够形成克隆,表明其未发生癌性转化。对第33代的转导细胞进行单细胞克隆,获得了3个衍生的细胞系,其中Mp-Ki03细胞系已培养至第60代。病毒感染试验表明蝙蝠西江病毒和蝙蝠轮状病毒均可以感染该转导细胞系。本研究通过SV40 LT抗原建立了永生化的蝙蝠胎儿肾细胞系,并且该细胞系对蝙蝠病毒易感,对分离与鉴定蝙蝠病毒以及研究病毒感染蝙蝠细胞的机制具有重要的作用。; 张思春杨凡力余乐何彪涂长春; 关键词：蝙蝠肾细胞 SV40 永生化

人端粒酶催化亚基和SV4O大T抗原永生化猪脐静脉血管内皮细胞: 为了建立稳定的猪血管内皮细胞系，为猪瘟病毒(CSFV)的致病机理研究提供理想的细胞模型，本研究利用逆转录病毒分别转导人端粒酶催化亚基(hTERT)基因或SV40大T抗原(SV40 LT)基因进入猪脐静脉血管内皮细胞，G4...; 张思春余乐李素涂长春; 关键词：猪瘟病毒脐静脉血管内皮细胞人端粒酶催化亚基抗原基因; 文献传递

猪脐静脉血管内皮细胞的分离及体外培养研究: 本研究旨在建立一种操作简单且能获得大量细胞的猪脐静脉血管内皮细胞体外分离培养方法。采集新生健康长白猪脐带，分离出脐静脉血管，灌注0．1％的I型胶原酶于37℃水浴消化l0 min后收集细胞培养于含20％胎牛血清的M199培...; 余乐张思春李素杨凡力涂长春; 关键词：猪瘟体外培养内皮细胞; 文献传递

猪脐静脉血管内皮细胞的分离及体外培养研究被引量：1: 2012年; 为建立一种操作简单并且能获得大量猪血管内皮细胞的分离培养方法,本研究采集新生健康长白猪脐带,取其脐静脉血管,灌注0.1%的Ⅰ型胶原酶,于37℃水浴消化10 min后收集内皮细胞,培养于含20%胎牛血清的M199培养基中,长满单层后用胰酶消化传代培养。并对培养的细胞形态学、相关抗原和其他特征以及对病毒的易感性进行鉴定。结果表明,Ⅰ型胶原酶消化后可获得大量内皮细胞,细胞培养后的形态学观察显示细胞贴壁生长良好,呈典型的铺路石状排列;第Ⅷ因子相关抗原和细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白均呈阳性,内皮细胞比率可高达100%。传3代后的生长曲线显示细胞传代后延迟期小于1 d,对数生长期约3 d,第5 d进入平台期,第7 d开始脱落死亡。病毒感染试验表明所获得的内皮细胞对猪瘟病毒高度易感,病毒生长与常用的PK-15没有区别。上述研究结果表明本研究建立的血管内皮细胞分离培养方法简便有效,为大量制备原代血管内皮细胞提供了可靠的方法。; 余乐张思春李素杨凡力涂长春; 关键词：猪瘟病毒脐静脉血管内皮细胞

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张思春