张征
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠UT-B重组腺病毒载体的构建及体外转染Caco-2细胞后基因表达
- 2013年
- 目的采用GatewayTM技术构建含大鼠尿素转运蛋白B(Urea transporter B,UT-B)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fuorescent protein,EGFP)的重组腺病毒载体,并以该载体体外转染Caco-2细胞,观察Caco-2细胞内UT-B的表达。方法分别以pMD18-UT-B和IRES2-EGFP质粒为模板,PCR扩增UT-B和IRES-EGFP序列,通过引物重叠区进行PCR拼接,并在UT-B-IRES-EGFP两端引入attB1、attB2重组臂序列。PCR产物经BP重组系统将UT-B-IRES-EGFP融合基因重组到入门载体pDONR221中,构建入门克隆。入门克隆与表达载体pAD/CMV/V5-DEST使用LR重组系统进行体外重组,构建表达克隆pAD-UT-B-IRES-EGFP,pAD-UT-B-IRES-EGFP转化DH-5α,筛选阳性克隆,PCR及测序验证。pAD-UT-BIRES-EGFP用Pac I酶切线性化后由Lipofectamine 2000介导转染293A细胞,包装病毒,收集病毒液并测定滴度。重组的腺病毒体外感染培养的Caco-2细胞,RT-PCR观察Caco-2细胞中UT-B mRNA的表达。结果成功构建了pAD-UT-B-IRES-EGFP载体,经PCR及测序验证,表达载体包含UT-B基因,且序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列一致。重组的腺病毒感染Caco-2细胞后可检测到UT-B mRNA的表达。结论利用GatewayTM系统成功构建了包含UT-B和IRES-EGFP的腺病毒表达载体,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 张征刘怡晟蒋更如陈凉潘曙明
- 关键词：腺病毒载体CACO-2细胞
- 大鼠尿素转运蛋白B基因克隆及真核表达载体的构建
- 2012年
- 目的克隆sD大鼠尿素转运蛋白B（ureatransporterB，UT-B）的CDS全长基因并构建其真核表达载体。方法从SD大鼠肾髓质中提取总RNA并经逆转录反应获取总cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增UT-B基因的CDS区全长片段，PCR产物加＂A＂尾后克隆至pMD-18T克隆载体，双酶切后获取UT-B片段，T4DNA连接酶将UT-B片段与KpnI和BamHI双酶切后的真核表达载体pcDNA3-1（-）连接，构建大鼠UT-B真核表达载体pcDNA3．1（-）-UT-B。结果成功克隆了sD大鼠UT-B基因，构建的pcDNA3．1（-）-UT-B载体经PCR扩增、KpnI和BamHI双酶切鉴定及测序验证，表达载体包含UT-B基因，且UT-B碱基序列与GeneBank中收录的大鼠UT-B序列-致。结论成功克隆了该基因并构建了其真核表达载体pcDNA3．1（-）-UT-B，为进-步进行UT-B基因转染治疗尿毒症的研究奠定了基础。
- 陈凉刘怡晟蒋更如张征潘曙明
- 关键词：基因克隆尿毒症
- 血液灌流对急性毒物中毒患者凝血功能的影响
- 目的：探讨血液灌流(HP)对急性中毒患者凝血功能的影响.方法：检测32例急性中毒患者第一次行HP前后的凝血指标和血小板数值及观察临床出血情况.结果：HP治疗1小时后的血小板数值较治疗前有显著的下降(P＜0.05),凝血指...
- 吴增斌王树云陈凉张征郑晨赵洁徐雯潘曙明
- 关键词：急性毒物中毒血液灌流凝血功能
- 文献传递
- 卡泊芬净治疗非白血病危重病侵袭性肺部真菌感染疗效分析
- ＜正＞危重病侵袭性真菌感染（invasive fungal infection,IFI）发生率高,病死率高,日益受到关注。随着免疫抑制人群增加,唑类抗真菌药物作为预防或经验性治疗在临床应用日益广泛,临床分离到的病原菌逐渐...
- 宋志芳谢伟殷娜段宝华张征
- 文献传递
- 卡泊芬净治疗非白血病危重病侵袭性肺部真菌感染疗效分析
- 研究背景与目的:危重病侵袭性真菌感染(invasive fungalinfection, IFI)发生率高,病死率高,日益受到关注。随着免疫抑制人群增加,唑类抗真菌药物作为预防或经验性治疗在临床应用日益广泛,临床分离到的...
- 宋志芳谢伟殷娜段宝华张征
- 关键词：侵袭性肺部真菌感染念珠菌卡泊芬净
- 文献传递
- 卡泊芬净治疗疑真菌感染致消化道大出血成功1例报告
- ＜正＞消化道出血临床常见,严重时可以危及生命。在危重病综合救治的过程中,能引起消化道出血的因素很多,但真菌感染导致出血的报道不多。我们近期遇见乙状结肠癌术后合并医院获得性肺炎（HAP）导致呼吸衰竭的老年患者,救治过程中因...
- 宋志芳谢伟殷娜张征
- 文献传递
- 血液灌流对急性中毒患者凝血功能的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨血液灌流(hemoperfusion,HP)对急性毒物中毒患者凝血功能的影响。方法急性毒物中毒患者32例均在洗胃、导泻、利尿及对症支持等常规治疗基础上行HP治疗,分别于第1次行HP前及行HP治疗后1,2h检测凝血酶原时间(prothrombin time,PT),部分凝血酶原时间(activated partial thromboplastin time,APTT),凝血酶原时间的国际正常化比率(international normalized ratio,INR)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB),D-二聚体(D-dimer,D-D)及血小板计数(platelet,PLT),并观察患者出血情况。结果 HP治疗1,2h时PLT均低于治疗前(P<0.05),治疗2h时PLT较治疗1h时增高(P<0.05);HP治疗2h时D-D水平与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05);HP治疗1,2h时PT,APTT,INR,FIB与治疗前比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗过程中发生透析导管处渗血2例,消化道出血1例,血尿1例,口腔出血1例,皮肤大片瘀斑1例。结论 HP治疗可导致患者血小板计数下降,不影响其他凝血功能。
- 吴增斌王树云陈凉张征郑晨赵洁徐雯潘曙明
- 关键词：中毒血液灌流血小板凝血功能抗凝
