张仕强
- 作品数：19 被引量：55H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 细胞外囊泡介导高效繁殖非洲猪瘟病毒的方法
- 本发明提供了一种高效繁殖非洲猪瘟病毒的方法。传统非洲猪瘟病毒繁殖依赖于原代巨噬细胞，成本高，批次间变异大，无法大规模工业化生产，严重阻碍了非洲猪瘟疫苗的研发和生产。本发明首先提取非洲猪瘟病毒感染的猪肺泡巨噬细胞的细胞外囊...
- 张仕强樊港杨玢王妍贺鑫
- 新媒体时代兽医临床诊断学教学改革初探被引量：4
- 2016年
- 新媒体时代的到来使新媒体教学成为改进教学方法、提高教学质量的重要手段。笔者通过在兽医临床诊断学教学过程中的认识体会,对新媒体教学在教学内容与教学形式上的应用进行分析。新媒体教学方法的应用在一定程度上改善了课堂教学效果,增进了师生之间的沟通交流,激发了学生对该门课程学习的兴趣。因此,还应对其进行不断的探索和改进。
- 王妍李勤凡李蓉张仕强
- 关键词：教学改革兽医临床诊断学新媒体时代教学内容教学形式
- 多重PCR方法鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌
- 2024年
- 为建立鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌(DEC)多重PCR检测方法,对陕西关中奶牛场犊牛粪便中分离的大肠埃希菌进行检测。以EAEC(astA、aggR、pic)、EHEC(stx1、stx2)、EPEC(escV、bfpB)、EIEC(invE)和ETEC(lt、stp、sth)5类DEC中11种毒力基因为目标,uidA基因为阳性对照,建立两体系(体系Ⅰ和Ⅱ)多重PCR检测方法,通过改变引物浓度、退火温度等检测条件进行优化,并对其特异性和灵敏度进行检测。结果显示,体系Ⅰ检测EAEC、EHEC,体系Ⅱ检测EPEC、EIEC、ETEC,除astA引物浓度为0.5μmol/L,其余均为0.3~0.4μmol/L;退火温度以59℃最佳;ETEC的检测下限最低(1.09×10^(3)CFU/mL),其余依次为EHEC(1.27×10^(3) CFU/mL)、EIEC(2.43×10^(3) CFU/mL)、EPEC(5.71×10^(3) CFU/mL)、EAEC(7.98×10^(3) CFU/mL);经验证该方法只对DEC毒力基因产生特异性,而对沙门菌、化脓隐秘杆菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、金黄葡萄球菌不产生特异性条带;应用此方法对183株犊牛腹泻源E.coli进行了检测,共检出17株DEC,其中EAEC 6株、ETEC 4株、EPEC 4株、EHEC 2株、EIEC 1株,经单一PCR验证结果一致。本研究建立的检测5类DEC多重PCR方法可对样品采用两体系、同一PCR反应程序进行检测。该方法的建立为牛源DEC中常见毒力基因的检测及分子流行病学调查提供了方法与借鉴。
- 熊昊飞张理坤程璐尚远昊冯玉树李冰慧李勤凡张仕强王妍
- 关键词：致泻性大肠埃希菌多重PCR毒力基因犊牛腹泻
- 携带CD163报告载体的猪诱导多能干细胞株的建立被引量：2
- 2023年
- 猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)是包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在内的多种高致病病毒的受体细胞,是研究病毒与宿主互作机制的重要模型。然而PAM来源有限,难以满足当前需求。利用猪诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)向巨噬细胞定向诱导是解决PAM细胞数量不足的有效方法。CD163是PAM细胞的重要标记,也是PRRSV等病毒的主要受体。建立实时报告CD163激活程度的报告系统对于建立并优化猪iPSCs向PAM的诱导分化体系具有指导意义。本研究利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统,设计靶向CD163终止密码子的sgRNA并构建相应的打靶载体,将其导入到猪PAM中的检测报告系统。进一步将该报告系统导入猪iPSCs中,通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和EDU染色等手段来检测其安全性。将猪内源CD163的报告载体系统转染至原代PAM中,检测到了红色荧光的表达,证明了该载体系统的可靠性;将CD163-reporter系统转染至猪iPSCs中,获得CD163 reporter-iPSCs。结果表明,CD163 reporter-iPSCs可以维持正常的多能性基因的表达,并具有与正常猪iPSCs一致的克隆形态和增殖能力。证实成功构建了CD163的报告载体,并将其转染至猪iPSCs,获得含有CD163报告载体的猪iPSCs系。该报告载体既不影响猪iPSCs的多能性,又能够实时指示CD163的表达,为深入解析猪iPSCs分化为PAM的机制以及解析PRRSV等重大病原与宿主的互作研究奠定了基础。
- 岳威张炬庆吴晓龙杨昕淳沈巧艳于帅祝振硕王承宝张仕强华进联
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导多能干细胞
- 诱导猪肺泡巨噬细胞CD163受体表达的细胞因子筛选被引量：1
- 2022年
- 猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)中的CD163受体作为明星分子不仅参与正常的生理活动,而且作为重要的病毒受体介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵宿主靶细胞,因此其表达调控的研究备受关注。为了探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白介素10(IL-10)、白介素3(IL-3)和地塞米松(dexamethasone)及其组合对PAM中CD163受体表达的促进作用,通过RT-qPCR和免疫荧光染色在原代PAM中从mRNA和蛋白水平对不同因子及其组合中CD163受体的表达情况进行检测。结果显示,M-CSF、GM-CSF、TGF-β1、IL-10、IL-3和dexamethasone都能在一定范围内促进CD163受体的表达,通过组合发现dexamethasone+IL-10对于CD163受体表达的促进作用最为显著,为进一步开展CD163的表达调控研究奠定了基础。
- 刘源马卓媛樊港楚电峰张仕强王妍
- 关键词：肺泡巨噬细胞地塞米松白介素10
- Ash2l-1/Ash2l-2在小鼠胚胎干细胞中的表达特异性及互补效应被引量：1
- 2018年
- H3K4me3是一种重要的表观遗传修饰,主要由MLL(mixed lineage leukemia)甲基转移酶复合体催化,对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,m ESCs)自我更新能力的维持具有重要作用。ASH2L是MLL复合体中一个重要的核心亚单位,参与调控m ESCs中染色质的开放状态。ASH2L在m ESCs中有2个异构体:ASH2L-1(80 k Da)和ASH2L-2(65 k Da),且以ASH2L-2的表达为主;而在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中,只有ASH2L-1表达。目前,Ash2l-1和Ash2l-2在m ESCs中的作用尚不清楚。本文利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,建立了Ash2l-1^(–/–)和Ash2l-2^(–/–)m ESCs。通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和q RT-PCR发现,Ash2l-1^(–/–)和Ash2l-2^(–/–)m ESCs在碱性磷酸酶、多能性调控转录因子(Oct4、Nanog、Sox2和Klf4)的表达与野生型对照无显著差异。通过拟胚体分化实验,发现Ash2l-1^(–/–)m ESCs诱导的拟胚体在Snai2(外胚层标记基因)和Gata4(内胚层标记基因)的表达上显著低于野生型m ESCs诱导的拟胚体(P<0.01)。通过Western blotting,发现Ash2l-1^(–/–)m ESCs中ASH2L-2的表达显著上调(P<0.01),Ash2l-2^(–/–)m ESCs中ASH2L-1的表达显著上调(P<0.01),而Ash2l-1^(–/–)和Ash2l-2^(–/–)m ESCs中,基因组H3K4me3的表达与野生型对照并无显著差异。这表明Ash2l-1和Ash2l-2之间存在补偿效应。利用JASPAR和KEGG预测分析发现,Ash2l-1和Ash2l-2启动子区分别具有3个和16个潜在的多能性转录因子结合位点,这些转录因子可能介导实现Ash2l-1和Ash2l-2之间的补偿效应。以上结果表明,Ash2l-1和Ash2l-2之间的补偿效应可能参与m ESCs多能性的维持和基因组H3K4me3的调控。
- 谢晶范辰张景龙张仕强谷峰
- 关键词：小鼠胚胎干细胞
- 新生牛精原干细胞体外增殖调控的研究
- 精原干细胞(spermatogonial stem cell)是雄性动物生殖腺内的一群具有高度自我更新能力和多向分化潜能，能向子代传递遗传信息的细胞。由于精原干细胞在医学、遗传学、转基因动物研究等方面有着广阔的应用前景，...
- 张仕强
- 关键词：精原干细胞密度梯度离心酶消化法睾丸细胞增殖脂质体法
- 文献传递
- 牛精原干细胞体外长时间存活增殖及鉴定
- 探索了血清浓度以及SCF、LIF、GDNF对牛精原干细胞体外存活和增殖的影响,并对其进行了鉴定．试验1:以高糖DMEM为基础培养液,添加浓度为0％、2．5％、5％和10％的胎牛血清(Fetal bovine serum,...
- 毕聪明张仕强彭树英吕宁张涌
- 关键词：精原干细胞SCFLIFGDNF
- 文献传递
- 不同培养条件对牛精原干细胞增殖的影响与特性鉴定被引量：6
- 2007年
- 探索血清浓度以及干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对牛精原干细胞体外增殖的影响,并对其进行鉴定。试验1:以高糖DMEM为基础培养液,添加浓度为0%、2.5%、5%和10%的胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS),分为4个试验组。结果表明,血清浓度影响牛精原干细胞的体外增殖,添加2.5%的FBS比较合适。试验2:培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及GDNF,可增加精原干细胞的数量,其中加入20μg/L SCF、80μg/L GDNF、10μg/L LIF后,与对照组比较能显著提高精原干细胞数(P<0.05)。采用碱性磷酸酶染色、细胞免疫组织化学染色和RT-PCR对牛精原干细胞进行鉴定,结果碱性磷酸酶染色呈弱阳性;细胞免疫组织化学染色Integrinβ1阳性、c-kit阳性;经RT-PCR扩增,获得了120 bp的Gfrα1序列和280 bp的c-kit序列,与预期的产物大小一致。因此,培养液中添加2.5%FBS、20μg/L SCF、80 ng/mL GDNF、10μg/L LIF对精原干细胞的增殖有利。
- 张仕强毕聪明彭树英吕宁张涌
- 关键词：精原干细胞SCFLIFGDNF
- 一种建立猪iPS细胞系的培养基及其培养方法
- 本发明公开了一种建立猪iPS细胞系的培养基及其培养方法，经过OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC四个转录因子进行转染，并通过培养基的诱导培养，第9天时出现典型的猪iPS细胞能够高效获得猪iPS细胞；所获得的猪iPS细...
- 张仕强郭燕杰王华岩
- 文献传递
