尹龙勃
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
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- 发文基金：浙江省重大科技专项基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
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- 缺失gE基因的牛Ⅰ型疱疹病毒构建及其体外增殖特性比较
- 2010年
- 为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺失突变体pBHV1-△gN-△gE则未能观察到细胞病变。病毒噬斑大小和生长曲线试验表明,在感染细胞内和培养基中,rBHV1-△gE滴度与亲本毒株BHV1无明显差异,而rBHV1-△gN显著降低;重组病毒rBHV1-△gE和前期构建的rBHV1-△gN形成的噬斑均显著小于亲本病毒,其大小分别为亲本病毒的18%和64%。rBHV1-△gE和rBHV1-△gN的构建将有助于阐明gE与gN协同作用机制和为研制BHV1新型基因标记疫苗奠定基础。
- 尹龙勃尹文玲叶伟成孙学强杨鸣琦王一成袁秀芳张存
- 关键词：感染性克隆
- 牛Ⅰ型疱疹病毒感染性细菌人工染色体的构建和gN基因缺失病毒的细胞繁殖特性被引量：4
- 2009年
- 通过同源重组将pHA2质粒插入到牛Ⅰ型疱疹病毒ZJ分离株基因组的UL15和UL18基因之间,构建了重组病毒rBHV1-HA;提取重组病毒的环状基因组DNA,转化大肠杆菌DH10B,获得了含有BHV1全基因组的感染性细菌人工染色体克隆pBHV1.pBHV1转染MDBK细胞可以拯救出病毒,该病毒与野生毒株在细胞上的繁殖特性未见差异.通过两步Red E/T重组,构建了gN基因跨膜区缺失的pBHV1突变体,并转染获得了重组病毒rBHV1-△gN.病毒繁殖动态曲线显示,rBHV1-△gN的滴度比野生毒株低9%～20%.BHV1感染性克隆的成功构建,将为研究新型BHV-1基因缺失疫苗和牛的病毒载体疫苗提供技术平台.
- 张存叶伟成王一成袁秀芳尹龙勃尹文玲刘蔓雯
- 关键词：感染性克隆细菌人工染色体
- 猪伪狂犬病毒浙江株感染性细菌人工染色体克隆的构建被引量：10
- 2010年
- 通过同源重组将携带细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)载体和GFP表达框的pHA2质粒序列插入到PRV病毒的UL23(TK)基因内,获得了重组病毒rPRV-HA2;将该重组病毒的环状基因组电转化到感受态细胞EscherichiacoliDH10B,筛选到病毒的感染性克隆PRV BAC(pPRV)。pPRV转染VeroE6细胞可以重新启动病毒的生产性感染,该拯救病毒的细胞病变和体外增殖特性与rPRV-HA2一致。病毒生长曲线表明TK基因的部分删除和BAC载体的插入不会影响病毒在体外的复制。PRV感染性BAC克隆的成功构建,将方便在大肠杆菌内对病毒基因组进行快速、准确的操作,为进一步开展PRV基因功能和病毒载体研究奠定基础。
- 尹文玲尹龙勃叶伟成孙学强姚火春张淼涛王一成张存
- 关键词：伪狂犬病毒细菌人工染色体感染性克隆重组病毒
- 牛Ⅰ型疱疹病毒gE和/或gN基因缺失突变株的构建及其体外繁殖特性的研究
- 牛I型疱疹病毒（Bovine Herpesvirus type 1,BHV1）可以引起多种临床疾病,如牛传染性鼻气管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis,IBR）,传染性脓疱性外阴阴道炎...
- 尹龙勃
- 文献传递
