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Rab5a促进LPS活化的巨噬细胞中细胞因子的表达被引量：1: 2015年; 目的:建立稳定表达Rab5a及其失活突变体Rab5a N133I巨噬细胞系,并分析Rab5a对LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中i NOS、TNF-α和IL-6表达的影响。方法:将Rab5a及其失活突变载体Rab5a N133I转染RAW264.7细胞,通过G418筛选稳定表达细胞系。通过Real-time PCR鉴定稳定表达细胞系。MTT法分析其生长特性,LPS刺激稳定表达细胞系不同时间,检测i NOS、TNF-α和IL-6的表达水平。结果:转染Rab5a/Rab5a N133I细胞Rab5a mRNA水平显著高于对照(P<0.05)。Rab5a过表达促进RAW264.7细胞增殖,而过表达Rab5a N133I细胞增殖显著慢于对照(P<0.05)。Rab5a过表达后,LPS诱导的RAW264.7细胞中i NOS、TNF-α和IL-6的表达显著增高(P<0.01)。然而,过表达Rab5a N133I对LPS诱导的i NOS、TNF-α和IL-6的表达没有显著影响。结论:Rab5a过表达显著促进了LPS活化的RAW264.7细胞中i NOS、TNF-α和IL-6的表达,这种促进作用依赖于其结合GTP的能力。; 孙晓琳谢基明云小乐张威康鸿斌万永青刘竟然巩培赵世敏王玉珍; 关键词：RAB5A LPS 巨噬细胞 INOS TNF-Α IL-6

Rab7真核表达载体的构建及其在小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞中的表达被引量：1: 2012年; 目的构建Rab7的真核表达载体,研究其在小鼠巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法 RT-PCR方法分析Rab7在组织和细胞中的表达。以RAW264.7细胞的cDNA为模板,根据GenBank公布的小鼠Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建pcDNA-Rab7重组质粒。用脂质体将Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞,RT-PCR和Western blot法鉴定Rab7的过表达。结果 Rab7重组载体测序结果与GenBank中报道的Rab7序列的同源性为100%。RT-PCR和Western blot结果显示Rab7真核表达载体瞬时转染RAW264.7细胞后,Rab7表达显著增高。结论成功构建了Rab7真核表达载体。为今后研究Rab7在巨噬细胞中的功能奠定了基础。; 蔡富娟谢基明康鸿斌孙晓琳王娜李云旭王玉珍; 关键词：巨噬细胞真核表达载体过表达

Rab5a促进CpG诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达被引量：3: 2016年; 目的:采用稳定表达Rab5a及其显性负性突变体Rab5a N133I的巨噬细胞系RAW264.7,研究Rab5a及其突变体过表达后对Cp G诱导的炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达的影响。方法:通过脂质体法将Rab5a及其突变体Rab5a N133I的真核表达载体转染到RAW264.7细胞中,用G418选择性培养基进行筛选,建立稳定表达Rab5a、Rab5a N133I的细胞系。通过RT-PCR、Real time-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达的细胞系。用Cp G刺激稳定表达Rab5a、Rab5a N133I的细胞系8 h后检测细胞因子TNF-α、IL-1β和IFN-β的表达量变化。结果:RAW264.7转染Rab5a真核表达载体后Rab5a的表达量显著高于对照质粒转染细胞(P<0.05)。Rab5a过表达后,在Cp G刺激作用下RAW264.7分泌的TNF-α、IL-1β显著升高(P<0.01),IFN-β的分泌也显著升高(P<0.05),而Rab5a N133I过表达后上述细胞因子的分泌均有所恢复。结论:Rab5a促进了Cp G诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达,Rab5a可能是TLR9信号通路的正向调控蛋白。; 陈俊娜孙晓琳董仕超邹凯刘欢王岩王雪刘芳谢基明王玉珍; 关键词：RAB5A CPG TNF-Α IL-1Β IFN-Β

Rab5a的组织表达分析及其真核表达载体的构建: 2013年; 目的:观察小鼠各脏器中Rab5a表达情况,并构建Rab5a真核表达载体并验证其表达情况。方法:采用RT-PCR和Real-time PCR方法检测Rab5a在小鼠组织中的表达。以小鼠巨噬细胞RAW264.7的cDNA为模板,根据GenBank中公布的小鼠Rab5a全长序列设计引物,扩增Rab5a的开放阅读框。将目的基因与真核表达载体pcDNA3.1/Flag(-)B连接,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆,酶切鉴定后测序。将Rab5a真核表达载体转染RAW264.7细胞,RT-PCR及Real time PCR检测Rab5a表达水平。结果:在小鼠的心、肝、肺、肾、脾、睾丸、小肠和结肠中均有Rab5a表达,在脾和小肠中的表达量最高。Rab5a真核表达载体测序的结果显示与GenBank中报道的序列的同源性为100%。用Rab5a真核表达载体转染RAW264.7后Rab5a的表达量显著高于对照质粒转染细胞。结论:Rab5a广泛表达于小鼠各组织。我们成功构建了Rab5a真核表达载体,并在RAW264.7中成功表达。; 王娜谢基明孙晓琳宋亮王玉珍; 关键词：RAB5A 真核表达载体转染

Rab5a蛋白调控巨噬细胞中TLR3//TLR4信号转导通路的研究: TLRs是天然免疫应答中一类高度保守的模式识别受体。通过识别病原体相关的分子模式，TLRs活化后促进免疫细胞分泌促炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素，从而清除病原微生物的感染。Rab5a是Rabs家族的一个主要成员，定位于质膜、早...; 孙晓琳; 关键词：RAB5A LPS INOS; 文献传递

肿瘤基因治疗技术策略研究进展: 基因治疗是遗传疾病和肿瘤治疗的研究热点。其实现的途径为利用基因工程技术将外源基因导入病变细胞,通过外源基因表达的产物来校正或弥补基因缺陷,以达到治疗疾病的目的。本文就应用RNA干扰技术、反义RNA封闭癌基因的表达;应用基...; 孙晓琳王玉珍; 关键词：癌基因抑癌基因肿瘤转移基因; 文献传递

Rab7基因沉默对LPS活化的巨噬细胞中NO/iNOS的影响被引量：1: 2011年; 目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P<0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P<0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P<0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P<0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。; 刘帅谢基明王玉珍宋亮王娜李云旭孙晓琳; 关键词：脂多糖 SIRNA 诱导型一氧化氮合成酶一氧化氮

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孙晓琳