孙文博
- 作品数：97 被引量：140H指数：6
- 供职机构：山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变及其真核表达载体的构建被引量：3
- 2014年
- 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列设计并合成引物,通过点突变的方法对其进行单点、两点和3点突变,成功获得含单点、两点和3点的突变体。设计引物扩增突变体的ORF1片段,将目的片段分别经KpnI和XbaI双酶切进而将其连接到真核表达载体pVAX1中,成功构建PCV2-pVAX1-Rep真核表达载体。此重组表达载体的成功构建为进一步研究PCV2 ORF1编码蛋白的生物学活性打下了基础。
- 王鹏张熙艳时建立徐绍建丛晓燕刘畅彭喆孙文博杜以军吴家强王金宝李俊
- 关键词：猪圆环病毒2型突变
- 猪内脏组织活体采样并进行核酸提取的装置
- 本发明公开了一种猪内脏组织活体采样并进行核酸提取的装置，其活体采样针包括作用于体内组织的针体和用于支承针体的支撑体，针体包括均为细长中空结构的内采样针和外切割针，内采样针的长度大于外切割针的长度，内采样针穿过外切割针的内...
- 孙文博吴家强陈智郑乾坤李敏邱宪波张璐璐刘国宪杜以军丛晓燕陈蕾于江李俊时建立郭立辉任素芳
- 表达猪pCD163的细胞系、其制备方法及应用
- 本发明涉及生物技术中基因表达领域，特别涉及一种表达猪pCD163的细胞系，通过RT-PCR扩增获得pCD163受体基因，将其插入真核表达载体pCI-neo中，构建真核表达质粒pCI-pCD163，将真核表达质粒pCI-p...
- 杜以军王金宝丛晓燕陈蕾齐静孙文博吴家强陈智于江郭立辉任素芳
- 一种流猪行性腹泻病毒MY01株及其应用
- 本发明涉及一种流猪行性腹泻病毒MY01株及其应用，属于猪流行性腹泻病毒疫苗试剂领域。本发明的猪流行性腹泻病毒MY01株，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏编号为：CGMCC？No.11495。本发明的猪流行性腹...
- 吴家强陈智刘少宁杜以军郭立辉陈蕾孙文博丛晓燕任素芳张玉玉于江李加飞王淞
- 文献传递
- HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：3
- 2013年
- 本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时荧光定量RT-PCR方法,检测FMDV L蛋白对Ⅰ型IFN效应因子的抑制效果。HeLa细胞在转染FMDV L蛋白真核表达质粒,并受到Ⅰ型IFN刺激后ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR的相对表达量较转染空载体或表达GST的真核表达质粒明显降低。本试验建立了HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的实时荧光定量RT-PCR检测方法,为在mRNA水平上对HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于FMDV L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路的研究中。
- 刘纪玉杜以军刘星吴家强李俊丛晓燕赵新华徐绍建孙文博时建立单虎王金宝
- 关键词：实时荧光定量RT-PCRSYBRL蛋白干扰素
- circHIF1α在制备抵御细菌感染的新型疫苗中的应用
- 本发明公开了circHIF1α在制备抵御细菌感染的新型疫苗中的应用，涉及生物医药技术领域。该circHIF1α的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明使用副猪格拉瑟菌(G.parasuis)作为革兰氏阴性菌的代表...
- 于江高译丹吴家强张玉玉李建达刘飞丁罗刚任素芳孙文博陈智张琳郭立辉
- 一株H9N2亚型猪流感病毒的分离鉴定与遗传进化分析
- 引言猪流感一直是集约化养殖场难以根除的传染性呼吸道疾病,兽医传染学意义重大.目前,我国在猪体内分离到的血清型有:H1N1、H1N2、H3N2、H5N1和H9N2.H9N2亚型首次于1994年在广东分离得到,可感染禽、猪和...
- 殷斌孙文博杜以军
- 双重RT-PCR快速检测H7N9流感病毒方法的建立被引量：10
- 2015年
- 为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐Gen Bank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型的双重RT-PCR。对H7N9亚型流感病毒核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增HA基因263bp、NA基因520 bp的特异性片段,而对其他常见亚型的流感病毒的RT-PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR方法的检测下限为3 pg的H7N9病毒模板。利用该双重RT-PCR方法对30份临床样品进行H7N9病毒进行检测,与病毒分离方法进行对比,结果显示,两者的符合率为100%。结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7N9流感病毒的同时检测和鉴别诊断,为H7N9亚型流感的有效防控提供技术支撑。
- 蒋文明李金平于美芳孙文博王素春彭程侯广宇刘朔杜翔于建敏陈继明
- 关键词：流感病毒双重RT-PCR
- 多重PCR诊断猪细小病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒Ⅱ型方法的建立和应用被引量：2
- 2010年
- 根据GenBank中已发表的猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等3种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV VP2、PRVgB、PCV2ORF1基因的保守区为各病毒的诊断靶序列。在建立各病毒单重PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了三种病毒的多重PCR技术。用78份临床病料对本研究多重PCR技术和单重PCR技术进行对比验证,结果显示,总符合率为97.4%以上。该方法特异性强、敏感性高,为PPV、PRV和PCV2临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。
- 刘洋李俊时建立孙文博徐绍建吴家强李坤于江王金宝周顺
- 关键词：PPVPRVPCV2
- 副猪嗜血杆菌ompP2基因在猪肺泡巨噬细胞中的表达
- 2016年
- 为了进一步研究副猪嗜血杆菌(HPS)ompP2基因的功能,根据已发表的副猪嗜血杆菌核苷酸序列,设计并合成1对引物,PCR扩增HPS LZ株外膜蛋白ompP2基因,获得大小为1 158bp的核苷酸片段,该片段纯化后克隆至pEASY-Blunt载体,转化后鉴定,再与真核表达质粒pCI-neo经过酶切和连接反应,转化感受态大肠杆菌Trans-T1,双酶切鉴定,筛选阳性重组质粒并测序。通过脂质体法将pCI-neoompP2转染猪肺泡巨噬细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测重组质粒是否表达。结果显示,成功构建了含ompP2基因的副猪嗜血杆菌真核表达载体pCI-neo-ompP2,提取转染该质粒的猪肺泡巨噬细胞的mRNA,进行RT-PCR扩增,在1 000bp^2 000bp之间可见1条明显的条带。Western blot发现在42ku处出现目的条带。试验结果为后期研究副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的机理奠定了基础。
- 于江杜以军李俊丛晓燕孙文博时建立陈智陈蕾吴家强王金宝
- 关键词：副猪嗜血杆菌真核表达载体猪肺泡巨噬细胞
