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人B7-1基因与GPI信号肽序列融和基因的原核表达载体的构建及表达被引量：1: 2009年; 目的构建GP1锚定蛋白基因与B7—1分子融合的原核高效表达载体（GPI—B7—1），观察融合蛋白的抗肿瘤效应。方法分别从新鲜胎盘和ConA刺激的外周血单核细胞中克隆人胎盘碱性磷酸酶（hPLAP-1）C末端信号肽序列（GPI）和CD80（B7—1）基因。利用PCR技术将GPI和B7—1胞外编码区基因进行融合，并将融合基因亚克隆入原核表达载体（pET-30a）中。重组载体pET-30a—GPI—B7—1转化表达菌株E．coli BL，纯化GPI—B7—1融合蛋白，SDS—PAGE、Western blot分析鉴定其免疫活性。结果PCR和RT—PCR产物经电泳鉴定，在100～250bp处可见到133bp的GPI目的条带。在750bp左右可见到792bp的B7-1胞外编码区基因目的条带。重组载体pET-30a—GPI-B7—1经PCR检测获得900bp左右的目的片段，经EcoRI、Sall双酶切鉴定，得到5000bp和900bp左右大小2个片段，实现了融合蛋白（GPI—B7—1）在大肠杆菌中的高效表达，在非变性条件下纯化该融合蛋白，SDS—PAGE分析显示，表达蛋白的分子量约为38kDa，Western blotting证实38kDa处出现一条特异的显色带，该融合蛋白即为目的蛋白。结论GPI—B7—1表达载体可在大肠杆菌中高效表达获取融合蛋白，为肿瘤免疫治疗奠定了基础。; 王建伟刘颖斌曹岩菁王许安李江涛孔颖马孝明彭淑牖; 关键词：基因表达免疫疗法肿瘤学

先天性胆总管囊肿癌变20例报告被引量：15: 2007年; 目的总结先天性胆总管囊肿癌变的防治经验。方法回顾性分析1981-2006年间收治的先天性胆总管囊肿癌变20例的临床资料。结果原发癌变9例,内引流术后癌变11例。临床表现为非特异性,其中15例表现为化脓性胆管炎,5例为上腹部包块,均伴乏力、消瘦。原发胆总管囊肿癌变9例中7例行ERCP检查,其中6例合并胆胰管合流异常。手术方式包括剖腹活检术4例,T管引流4例,囊肿切除加胰十二指肠切除术6例,囊肿部分切除、肝左外叶切除2例,囊肿切除、肝管空肠Roux-en-Y吻合术4例。癌变主要位于囊壁18例,术后病理结果16例（16/20）为腺癌。术后生存期为4-31个月,平均12.7个月。结论胆胰管合流异常是先天性胆总管囊肿癌变的病因之一,临床表现不典型,术前诊断困难,预后极差,先天性胆总管囊肿行内引流术后更易癌变,对先天性胆管囊肿病人推荐行新的预防癌变的手术方式,术中冰冻切片检查有助于确诊,对侵及胰腺的病例考虑行囊肿切除及胰十二指肠切除术。; 刘颖斌马孝明王建伟李江涛嵇振岭孔颖王许安蔡炜龙王俊曹利平彭淑牖; 关键词：先天性胆总管囊肿癌变

中西医结合治疗术后耐药屎肠球菌感染: 目的: 探讨术后抗生素治疗无效的屎肠球菌感染的治疗方法。方法: 对22例术后经细菌培养证实屎肠球菌感染并经相应敏感的抗生素正规治疗无效的患者进行中西医结合治疗。包括停用一切抗生素,应用微生物调节剂和免疫增强剂...; 刘颖斌翁伟宏彭淑牖唐喆方河清李江涛王许安孔颖马孝明陈燕陈德琴; 关键词：屎肠球菌外科手术细菌感染中西医结合

老年胃癌患者围手术期并发症的临床研究: 目的：研究老年胃痛患者的临床特点，总结本组患者的年龄、术前各种合并症等对术后并发症发生的影响，以期对老年胃癌患者的围手术期治疗提供一定的参考。方法：总结本医疗小组自2005年1月至2007年1月接受手术的胃癌...; 刘颖斌李江涛唐喆方河清彭淑牖蔡炜龙王俊王许安马孝明孔颖陈燕KR Devkota王建伟; 关键词：胃癌围手术期手术并发症手术治疗; 文献传递

VEGF反义寡核苷酸对人胆囊癌细胞VEGF、Flt-1及KDR mRNA和蛋白水平表达的影响被引量：1: 2007年; 目的体外研究 Oligofectamine 介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌细胞 VEGF、Flt-1及 KDR 在 mRNA 和蛋白水平的表达及生长增殖和凋亡的影响。方法运用 Oligofectamine 介导的 VEGF ASODN 和 SODN 转染人胆囊癌细胞 GBC-SD,半定量 RT-PCR 检测各组细胞 VEGF、Flt-1及 KDR mRNA 转染前后不同时间的表达变化、ELISA 测定转染后各组细胞培养上清液 VEGF 蛋白浓度。结果 ASODN 组及 ASODN+Oligofectamine 组都能显著抑制 VEGF、Flt-1及 KDRmRNA 的表达,且 VEGF ASODN+Oligofectamine 的抑制作用比 ASODN 更强(P>0.05)。ELISA 测定结果显示 ASODN 组及 ASODN+Oligofectamine 组均抑制 VEGF 蛋白的分泌(P<0.05),且 ASODN+Oligofectamine 组的 VEGF 蛋白浓度低于 ASODN 组(P>0.05)。结论 VEGFASODN 能抑制人胆囊癌细胞 VEGF、Flt-1和 KDR 在 mRNA 水平的表达和 VEGF 蛋白的表达,从而促进 GBC-SD 细胞的凋亡;Oligofectamine 能明显增强 VEGF ASODN 的抑制效果。; 方河清李海军刘颖斌王许安马孝明孔颖陈燕陈德琴翁伟宏张志平KR Devkota王建伟李江涛曹利平彭淑牖; 关键词：内皮生长因子

二级脾蒂离断术在门静脉高压脾切除术中应用被引量：33: 2008年; 目的探讨二级脾蒂离断术在门静脉高压病人脾切除术中的作用。方法比较分析1999-2005年浙江大学医学院附属第二医院在门静脉高压病人行脾切除加贲门周围血管离断术中二级脾蒂离断术(离断组)与传统脾切除术(传统组)的临床资料。结果离断组脾热、胰漏的发生率及术后住院时间低于传统组;出血量及手术时间两组差异无显著性意义。发生胰漏、脾热者多为脾大的病人。结论二级脾蒂离断术可降低门静脉高压脾切除病人脾热、胰漏的发生率,减少术后住院时间,是一种值得推广的手术方式,尤其对于脾脏较大的病人。; 孔颖刘颖斌王许安马孝明陈燕陈德琴翁伟宏李江涛曹利平彭淑牖; 关键词：脾切除门静脉高压症脾热胰漏

胆管癌的转移方式和途径被引量：10: 2007年; 刘颖斌孔颖彭淑牖; 关键词：肿瘤转移肿瘤浸润淋巴转移

侵犯重要血管的胰头癌切除的可行性探讨被引量：8: 2007年; 目的:总结5年来所见侵犯重要血管的胰头癌诊治经验。方法:对2002～2006年间收治的61例侵犯重要血管的胰头癌的临床资料进行回顾性分析。结果:本组61例中,侵犯门静脉11例,侵犯肠系膜上血管13例,联合侵犯门静脉、肠系膜上血管12例,侵犯其他血管但无广泛转移者共13例,广泛转移者12例。61例病人中行B超检查的58例,CT检查42例,行MRCP18例,ERCP15例。20例行单纯胰十二指肠切除术,4例联合血管切除的胰十二指肠切除术,2例行联合血管切除的全胰切除术,其余行Roux-en-Y胆肠内引流术。全组无手术死亡。结论:对侵犯重要血管的胰头癌,B超可用于筛查,而CT结合MRCP/ERCP对于确定肿瘤的病变范围、血管浸润等有较高价值。对于满足适应证的病例,应积极采用联合血管切除的胰十二指肠切除术;对于不适合者,可行胆肠内引流,以改善病人生活质量和延长生存时间。; 刘颖斌马孝明李江涛王许安蔡炜龙孔颖王俊王建伟曹利平彭淑牖; 关键词：胰腺肿瘤血管肿瘤侵犯

老年胃癌患者围手术期并发症的临床研究: 目的：研究老年胃癌患者的临床特点，总结本组患者的年龄、术前各种合并症等对术后并发症发生的影响，以期对老年胃癌患者的围手术期治疗提供一定的参考。方法：总结本医疗小组自2005年1月至2007年1月接受手术的胃癌...; 刘颖斌李江涛唐喆方河清彭淑牖王勇蔡炜龙王许安马孝明孔颖陈燕KR Devkota王建伟; 关键词：老年胃癌围手术期术前合并症术后并发症; 文献传递

骨髓间充质干细胞对植物血球凝集素刺激的T淋巴细胞CD25表达的影响被引量：3: 2007年; 目的利用 T 淋巴细胞激活后早期表达的膜表面分子 CD25和 CD69来观察骨髓间充质干细胞(MSC)对于 T 淋巴细胞增殖的抑制作用。方法体外扩增并鉴定大鼠 MSC,采用尼龙棉柱纯化大鼠 T 淋巴细胞。将 MSC 和 T 淋巴细胞共培养,加入植物血球凝集素(Phytohaemagglutinin,PHA)进行刺激后测定 T 淋巴细胞膜表面 CD25和 CD69的表达。ELISA 法测定 MSC 培养上清液的转化生长因子(TGF)-β1和 IL-10的浓度。结果①10 000个以上的 MSC 和 T 淋巴细胞共培养时,CD25的表达明显下调,而且下调作用具有数量依赖性。100个 MSC 对于 T 淋巴细胞 CD25的表达没有作用;②MSC 对于 T 淋巴细胞 CD25的下调可以持续96 h 以上;③MSC 对于 T 淋巴细胞 CD25的下调介于其自身分泌的可溶性蛋白质;④TGF-β1和 IL-10均不是 MSC 介导 T 淋巴细胞 CD25下调的原因。结论 MSC 具有 PHA 刺激的 T 淋巴细胞免疫调节作用,其在移植免疫方面的应用前景非常光明。; 刘颖斌钱浩然洪德飞王建伟李江涛王许安孔颖马孝明陈燕陈德琴翁伟宏彭淑牖; 关键词：骨髓间充质干细胞 CD25 免疫抑制

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孔颖

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