周毅
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv的构建及表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建细胞因子融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv,建立并检测稳定表达融合蛋白的细胞株NIH3T3。方法通过RT-PCR法扩增小鼠IP10基因,全基因人工合成EGFRvⅢScFv,两段目的基因依次克隆于表达载体pcDNA3.1(-)PCMV启动子下游,二者以编码(Gly4Ser)3的柔性接头序列(linker)相连。将构建好的pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv转染NIH3T3细胞,并用G418筛选出阳性克隆,采用实时定量PCR和Western blot法检测克隆细胞目的基因和蛋白的表达量,并观察转染后的NIH3T3细胞体外生长状况。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv,经过浓度为200mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达IP10-EGFRvⅢScFv的细胞系NIH3T3,且其生长状态并未受转染基因的影响。通过荧光检测、实时定量PCR、Western blot法检测到转染72h后目的基因和蛋白表达量最高,和稳定克隆株相比,表达量并无明显差异(P>0.05)。结论构建的新型细胞因子融合蛋白可以在NIH3T3细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础。
- 王旋赵洪洋罗赤星周毅张方成姜晓兵
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体融合蛋白
- EGFRvⅢ单链抗体治疗小鼠脑胶质瘤的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨表皮生长因子受体III型突变体单链抗体(EGFRvIIIscFv)对小鼠脑胶质瘤的治疗效果。方法人工合成EGFRvIIIscFv基因序列并构建到原核表达载体中,诱导表达重组蛋白,经电泳和western blotting鉴定;再通过纯化和复性,得到有功能的EGFRvIIIscFv;用酶联免疫吸附分析(ELISA)测定抗体的亲和常数后,通过立体定向仪将其注射到胶质瘤小鼠的脑内,观察荷瘤鼠的生存期,免疫荧光法检测肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果双酶切鉴定和测序结果证实人工合成的EGFRv Ⅲ scFv序列与基因数据库中完全一致;经过诱导表达,电泳显示重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达;western-blotting鉴定蛋白分子量为63kDa,与预期大小基本一致;该单链抗体亲和常数为0.203×10-8mol/L;将蛋白注射到荷瘤鼠的脑内,与对照组相比,实验组肿瘤VEGF表达量明显减少、荷瘤鼠中位生存期明显延长(P<0.01)。结论 EGFRvscFv重组蛋白可与EGFRvⅢ特异性结合;脑内注射EGFRvⅢscFv可明显降低胶质瘤血管形成,延长荷胶质瘤小鼠生存期。
- 王旋姜晓兵熊志勇孙云周毅赵洪洋
- 关键词：胶质瘤单链抗体小鼠
- 神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和血管内皮生长因子表达的影响被引量：4
- 2015年
- 目的研究外源性神经节苷脂GM3对人宫颈癌He La细胞增殖、凋亡和VEGF表达的影响。方法不同浓度GM3干预HeLa细胞24 h后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞学技术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术检测细胞VEGF mRNA表达水平,Western blot技术检测细胞VEGF蛋白水平。结果(1)GM3浓度分别为2、10、50和250μmol/L时,HeLa细胞生长抑制率分别为9.8%、32.9%、50.7%和78.6%,半数抑制浓度(IC50)为49.8μmol/L。(2)GM3浓度分别为10、50和250μmol/L时,HeLa细胞凋亡率分别为(4.9±0.4)%、(15.1±0.3)%、(24.4±0.7)%。(3)当GM3浓度高于10μmol/L时,HeLa细胞VEGF mRNA表达水平以及VEGF蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。结论外源性神经节苷脂GM3能呈浓度依赖性抑制人宫颈癌He La细胞增殖,促进HeLa细胞凋亡,下调HeLa VEGF mRNA水平和蛋白水平,提示GM3可能通过调节肿瘤细胞凋亡和肿瘤血管生成而发挥双重抗肿瘤作用。
- 朱燕伍钢欧阳礼辰朱芳陈静周毅
- 关键词：HELA细胞细胞增殖血管内皮生长因子
