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用CHO—hTSHR细胞检测甲状腺刺激性抗体的研究: 2010年; 目的研究本课题组所构建的表达人重组TSH受体的中国仓鼠卵巢细胞（CHO—hT—SHR）在检测甲状腺刺激性抗体（TSAb）方面的临床应用价值。方法采用正常对照组及Graves病（GD）甲亢组血清的粗提IgG溶液来刺激CHO—hTSHR细胞，测定反应介质中的cAMP产量，计算TSAb活性。以正常对照组TSAb活性的孟＋2s作为正常上限值，根据该阳性判断标准来计算GD甲亢组TSAb的阳性检出率。结果GD甲亢组cAMP的产量及TSAb活性高于正常对照组[（353．65±126．34）pmol／LVS（237．21±77．15）pmol／L，（149．08±53．26）％ vs（100±32．52）％]，差异有统计学意义（P〈0．05）。采用该细胞测定的TSAb活性的正常上限值为165％，GD甲亢组TSAb的阳性检出率为50％（14／28）。结论本课题组所构建的CHO—hTSHR细胞株在检测GD甲亢患者血清中TSAb水平方面具有一定的临床应用价值。; 周亚芹张洪梅董艳苏青; 关键词：免疫球蛋白类仓鼠

促甲状腺素受体抗体的检测方法(文献综述)被引量：12: 2009年; 周亚芹苏青; 关键词：促甲状腺素受体抗体自身免疫性甲状腺疾病多克隆抗体 TRAB

人促甲状腺激素受体全长表达载体在真核细胞内的稳定表达: 张洪梅周亚芹董艳冯绮文李晓永苏青

^(201)Tl静息再注射心肌灌注显像计数比值法检测存活心肌被引量：1: 2005年; 目的:研究^(201)Tl 心肌静息显像结合静息再注射显像诊断冠心病、判断存活心肌的定量分析指标。方法:将受试者分为3组:正常对照组20名、心肌缺血组20例及心肌梗死组21例。将^(201)Tl 心肌静息显像结合静息再注射显像的原始图像,经计算机三维重建得到水平长轴、垂直长轴及短轴断层图像。将左室心肌分为7个节段,勾画相应心肌节段的感兴趣区(ROI),分别计算各 ROI 的放射性计数,以计数最高的 ROI 为标准,计算 ROI 节段心肌放射性计数比值:延迟图像与静息图像比较,观察静息图像的放射性分布减低或缺损区的填充情况,了解其心肌活力。结果:20名对照组的2次显像计数比值平均分别为93.3±5.3和96.3±5.1;20例心肌缺血组有60个 ROI 灌注减低,其2次显像计数比值平均分别为73.0±7.1和88.0±6.6;21例心肌梗死组共有52个 ROI 灌注缺损,其2次显像计数比值平均分别为48.3±12.4和44.7±6.9。对照组与心肌缺血组比较.u=20.3;对照组与心肌梗死组比较.u=25.6;心肌缺血组与心肌梗死组比较 u=12.5。3组计数比值间的差异具有显著性(P 均<0.01)。结论:^(201)Tl静息再注射显像 ROI 局部心肌放射性计数比值<(73.0±7.1)时,可判断为缺血,心肌存活;如计数比值<(48.3±12.4),则为心肌梗死,心肌细胞活力丧失。^(201)Tl 静息再灌注显像对了解心肌血供、心肌存活状况和早期诊断冠心病不失为一种无创、客观、简便的方法。; 蔡金来周亚芹李佳宁傅宏亮徐美华吴靖川; 关键词：^201铊发射型计算机

转染中国仓鼠卵巢细胞人TSH受体的功能评价被引量：1: 2008年; 目的研究转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞人促甲状腺激素(hTSH)受体(hTSHR)的功能。方法抽提已转染hTSHR的CHO细胞基因组DNA,PCR扩增目的条带,并对产物进行序列测定。采用受体的放射配体结合分析法,以固定量125I的牛促甲状腺激素(125I-bTSH)和浓度递增的未标记bTSH与hTSHR发生竞争结合反应分析受体的基本功能;通过TSH刺激试验测定细胞环磷酸腺苷(cAMP)含量,评价hTSHR的生物学活性。结果PCR扩增片段长度与预期相符,且序列完全正确。竞争结合反应表明,随着bTSH浓度的递增,125I-bTSH与hTSHR的结合量逐渐下降;TSH刺激试验显示,随着bTSH浓度的递增,细胞cAMP含量亦逐渐升高,当bTSH浓度为10 mIU/mL时,cAMP水平达到峰值。结论cDNA序列整合在CHO细胞基因组内并在细胞膜上表达的hTSHR,具有受体的基本功能特性和良好的生物学活性。该实验为自身免疫性甲状腺疾病患者血清甲状腺刺激性抗体(TSAb)和阻断性抗体(TSBAb)的检测奠定了基础。; 周亚芹张洪梅李晓永董艳苏青; 关键词：中国仓鼠卵巢细胞促甲状腺激素受体促甲状腺激素受体抗体环磷酸腺苷

环状定点诱变技术在单碱基定点诱变中的应用被引量：5: 2009年; 目的采用环状定点诱变技术将重组真核表达质粒pcDNA3.1-hTSHR中hTSHR cDNA序列上发生突变的单碱基诱变回正常的序列。方法设计1对含预期突变的完全互补的诱变引物,以环状质粒为模板进行PCR扩增,得到带缺口的突变质粒,酶消化去除模板质粒,将PCR产物转化DH5α感受态细胞进行缺口修复和克隆。结果DNA测序表明,在预期位点已成功发生诱变,且目的基因其他部位的碱基序列均未发生随机突变。结论环状定点诱变技术是一种高效、简便、快捷的诱变方法,通过该方法成功实现了目的碱基的定点诱变,为后续研究奠定了基础。; 周亚芹张洪梅董艳苏青; 关键词：聚合酶链反应质粒

甲状腺摄^(99m)TC率在桥本氏甲状腺疾病中的应用价值被引量：7: 2003年; 目的 :探讨甲状腺摄99mTC率 ,在桥本氏甲状腺疾病中的应用价值。方法 :在作甲状腺99mTC显像时 ,测定甲状腺99mTC率 ,并与甲状腺血清学指标比较。结果 :桥本氏甲亢或甲减 ,甲状腺外形均显示增大 ,放射性分布不均匀 ,前者摄锝功能增强 ,摄锝率为 6 0 7± 4 6 9,与对照组比较 ,差异有显著性 (p <0 0 5 ) ;后者 ,17 2 % (5 2 9)伴有“凉结节”或“冷结节” ,摄锝功能增高或正常 ,摄锝率为 1 6 9± 1 0 0 ;与对照组比较 ,差异无显著性 (p >0 0 5 )。结论 :甲状腺99mTC显像 ,并计算甲状腺摄99mTC率 ,能准确反映甲状腺的位置、大小、形态、甲状腺包块的摄取情况及甲状腺摄取功能 ,结合甲状腺血清学指标 ,在桥本氏甲状腺疾病中的诊断、鉴别。; 蔡金来周亚芹沈卫杨燕禹葵高峥; 关键词：放射性核素显像锝99M

人促甲状腺激素受体全长表达载体在真核细胞内的稳定表达被引量：1: 2009年; 目的构建pcDNA3.1/人TSH受体(human thyroid-stimulating hormone receptor,hTSHR)基因真核表达载体(已完成),将该真核表达载体在CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)中表达,并筛选获得稳定表达细胞株。方法通过脂质体介导,用重组质粒pcDNA3.1-hTSHR转染CHO细胞,以G 418筛选稳定表达细胞株,挑取单克隆,扩大培养并传代;取P5代细胞,抽提基因组DNA及蛋白分别用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞hTSHR的表达情况。结果得到阳性单克隆5个,传代培养。P5代细胞PCR扩增产物为约530 bp特异性条带,大小与预期相符,未见非特异性条带。Western印记法结果表明被转染CHO传代细胞有hTSHR蛋白表达。结论pcDNA3.1-hTSHR真核表达载体可以在CHO细胞中稳定表达,成功构建稳定表达细胞株。为测定自身免疫性甲状腺疾病患者血清TSHR奠定了基础。; 张洪梅周亚芹董艳冯绮文李晓永苏青; 关键词：TSH受体真核表达载体 CHO细胞

CHO-hTSHR细胞株的构建及其初步应用研究: 目的：⑴构建CHO-hTSHR细胞株。⑵研究转染到CHO细胞的hTSHR的功能及CHO-hTSHR细胞株在检测Graves病（GD）患者血清中TSAb方面的初步应用价值。方法：①将本课题组前期所构建的pcDN...; 周亚芹; 关键词：甲状腺肿激素受体细胞病理学; 文献传递

人甲状腺刺激激素受体cDNA的克隆及真核表达载体的构建被引量：3: 2008年; 目的克隆人甲状腺刺激激素受体(hTSHR)基因cDNA并构建其真核表达载体。方法以人甲状腺组织cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hTSHR基因编码区的全部序列,克隆入pGEM-T载体中,经限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并进行双酶切鉴定。结果PCR扩增的特异性片段长度为2 337 bp,以此构建的pGEM-T-hTSHR克隆载体,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析证实载体中带有hTSHR基因编码区的目的片段,重组质粒pcDNA3.1-hTSHR经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后显示5 1000 bp和2 300 bp左右的2个条带,DNA序列分析显示与GenBank中的hTSHR基因cDNA序列一致,证明hTSHR基因已成功克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中。结论成功构建了野生型pcDNA3.1-hTSHR重组真核表达载体。; 李晓永冯绮文董艳周亚芹葛勤敏张洪梅苏青; 关键词：克隆真核表达载体

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周亚芹

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