叶寒青
- 作品数：13 被引量：44H指数：4
- 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 适合花鲈的几种染色体制备方法的比较被引量：20
- 2003年
- 比较了6种适于制备花鲈(Lateolabraxjaponicus)染色体的制片方法。结果表明,细胞系(LJES)培养法和头肾 PHA活体注射 淋巴分离液富集法可制备高质量的染色体标本;外周血短期培养法和头肾 PHA活体注射法得到的结果重复性好,但制片时有红细胞的干扰;小鱼游泳法和组织浸泡法操作简单,适于野外条件下的染色体制备,但得到的染色体图象有背景杂质,分裂指数较低,仅适用于染色体组型的研究。
- 沙珍霞陈松林叶寒青徐美瑜刘洋季相山唐启升
- 花鲈胚胎干细胞及培养方法
- 一种花鲈胚胎干细胞及培养方法，它的细胞小且呈圆形、多角形或多边形，细胞直径15－25um，具有大的细胞核和较少的细胞质，细胞增殖速度快，具有发育多能性和分化潜力；其操作程序是：花鲈囊胚期细胞收集；胚胎干细胞的原代和传代培...
- 陈松林沙珍霞叶寒青
- 文献传递
- 表达绿色荧光蛋白基因的花鲈胚胎干细胞株的建立及其体外分化被引量：2
- 2006年
- 以带有绿色荧光标记的基因（pCMV-EGFP）为报告基因，用Genejammer、Genejuice和Metafeetene三种脂质体介导花鲈胚胎干细胞（IJES1）的基因转移。实验发现，Genejammer介导的细胞转化效率最高，高达27．3％，其余分别为12．1％和5．3％。转移绿色荧光蛋白（GFP）基因的IJES1细胞经过药物筛选和单克隆化培养，获得了表达GFP基因的阳性克隆细胞株，经PCR对GFP阳性细胞株的基因组DNA及提取的RNA扩增，获得了目的祭带，证实了GFP基因已经整合到LIES1细胞的基因组中，并获得了正常的表达。通过体外诱导，GFP阳性细胞能够分化为神经细胞、肌肉细胞、成纤维细胞等，用悬滴法培养获得了GFP阳性细胞的拟胚体，证实了经过长期的药物筛选后，LJES1细胞仍然保持着发育的多能性。这一研究，为进一步利用海水鱼类胚胎干细胞进行遗传操作及基因工程的研究提供了方法上的探索。
- 叶寒青陈松林刘洋刘洋
- 关键词：脂质体绿色荧光蛋白胚胎干细胞体外分化
- 鱼类肌肉生长抑素MSTN基因克隆及其基因打靶载体构建
- 一种鱼类肌肉生长抑素MSTN基因及其基因打靶载体，它的方法是分离克隆了花鲈MSTN基因，其全长为4873bp，包括3个外显子，2个内含子，5’调控序列和非翻译区以及3’非翻译区。根据测定出的花鲈MSTN基因序列，设计引物...
- 陈松林叶寒青沙珍霞
- 文献传递
- 花鲈肌肉生长抑素基因（MSTN）克隆、表达及其基因打靶载体的构建
- 本研究采用同源克隆和染色体步移的策略首次分离、克隆了5396 bp的花鲈MSTN基因组序列。花鲈MSTN基因具有3个外显子,2个内含子,整个开放阅读框编码着374个氨基酸,具有9个保守的半胱氨基酸及一个RVRR的蛋白酶解...
- 叶寒青
- 关键词：胚胎干细胞绿色荧光蛋白基因转移同源重组
- 文献传递
- 不同因子对花鲈胚胎干细胞增殖的影响被引量：6
- 2004年
- 胚胎干细胞(ES细胞)是从动物早期发育胚胎中分离出来的具有发育全能性的一种未分化细胞系。维持花鲈胚胎干细胞(LJES1)的体外生长、增殖及未分化状态需要在培养基中添加一些生长因子。实验通过配制省略1种或多种因子的培养基PESM0～10,计数LJES1细胞在各培养基中增殖的数量,确定各种生长因子对LJES1细胞的增殖作用。同时,对LIF因子和bFGF因子的作用进行了重点的研究,发现LIF因子对早期的LJES1细胞增殖几乎没有作用,其主要作用是维持LJES1细胞的未分化状态,但对晚期LJES1细胞的增殖有一定的作用;bFGF因子对LJES1细胞有强烈的刺激增殖的作用;鲈鱼胚胎抽提液(PEE)以及鲈鱼血清(FS)也促进了LJES1细胞的增殖,2-巯基乙醇(2-ME)具有还原血清中的含硫化合物、防止过氧化物对LJES1细胞的损害及促进贴壁的作用,因而也促进了LJES1细胞的增殖。
- 叶寒青陈松林沙珍霞
- 关键词：胚胎干细胞碱性成纤维细胞生长因子白血病抑制因子
- 花鲈胚胎干细胞移植制备嵌合体的方法
- 一种花鲈胚胎干细胞移植制备嵌合体的方法，其操作程序是：花鲈囊胚(约1000个细胞)作受体、以稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的花鲈胚胎干细胞(LJES1细胞)为供体，通过显微注射方法将20－50个供体细胞移植到受体囊胚中，...
- 沙珍霞陈松林刘洋叶寒青田永胜
- 文献传递
- 显微注射技术在制备鱼类嵌合体和转基因海水鱼上的应用被引量：6
- 2005年
- 以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。
- 沙珍霞陈松林刘洋刘洋徐美瑜
- 关键词：显微注射细胞移植转基因鱼类
- 三种脂质体介导的花鲈胚胎干细胞转化效率的比较被引量：1
- 2006年
- 通过3种脂质体(genejammer,genejuice和metafectene)介导绿色荧光蛋白基因转化花鲈胚胎干细胞,探讨不同脂质体介导的花鲈胚胎干细胞(LJES1)的转化效率,以及影响外源基因转化效率的因素,如细胞接种时间、初始接种密度、DNA和脂质体用量以及它们之间的比例等。实验发现,genejammer转化LJES1细胞效率最高,适合于该细胞系的转化。对于同一种脂质体,DNA与脂质体用量的比例对于绿色荧光蛋白基因转化LJES1最为重要,DNA与genejammer的比例为1∶6时,转化效率最高,为27.3%;DNA与genejuice的比例为1∶4时,转化效率最高,为12.1%;而DNA与metafectene的比例为1∶3时,转化效率达到最高,为5.3%。随着DNA、脂质体量的增加,转化效率有所提高,但达到一定的用量后,转化效率反而下降。
- 叶寒青陈松林沙珍霞
- 关键词：脂质体绿色荧光蛋白胚胎干细胞
- 鱼类肌肉生长抑素MSTN基因克隆及其基因打靶载体构建
- 一种鱼类肌肉生长抑素MSTN基因及其基因打靶载体，它的方法是分离克隆了花鲈MSTN基因，其全长为4873bp，包括3个外显子，2个内含子，5’调控序列和非翻译区以及3’非翻译区。根据测定出的花鲈MSTN基因序列，设计引物...
- 陈松林叶寒青沙珍霞
- 文献传递
