刘进
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 共刺激分子配体B7-DC基因真核表达载体和转基因细胞的构建
- 2006年
- 目的:克隆小鼠B7-DC基因,并构建含该基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,证明该基因在CHO细胞中的表达方式,为建立B7-DC的转基因小鼠打下基础。方法:从小鼠胸腺中抽提总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增出B7-DC编码区片段。按常规方法克隆进pEF6V5His载体中,重组质粒经鉴定后采用脂质体法转染CHO细胞,48小时后进行间接免疫荧光实验,72小时后用blasticidin进行筛选,挑选出能稳定表达B7-DC的细胞株。结果:已成功克隆小鼠B7-DC基因并构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体,经间接免疫荧光实验(IFA)证明,该基因在CHO细胞中得到表达。经Western blot检测表明筛选出的转基因细胞稳定表达了B7-DC基因。结论:构建了用于表达B7-DC基因的真核表达载体pEF6/-B7-DC-V5His,并能在CHO细胞中稳定表达目的基因,为该基因功能的后续研究奠定了基础。
- 岳挺孙强章蓉曹慧刘进董娟李厚达
- 关键词：共刺激分子真核表达
