刘孝菊
- 作品数：14 被引量：19H指数：2
- 供职机构：吉林大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”高等学校科技创新工程重大项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生社会学更多>>
- 成纤维细胞生长因子23与慢性肾病的研究被引量：1
- 2011年
- 成纤维细胞生长因子23与人类许多疾病相关,它不仅可以直接调节钙、磷代谢,而且可以间接调节甲状旁腺激素、维生素D代谢。FGF23和klotho蛋白对维持磷酸盐的浓度、血管和骨骼都具有其独特的意义。主要通过与磷酸盐对比,提出了FGF23可以独立预测慢性肾病的不利结果,最后指出FGF23抗体和其C-末端在慢性肾脏疾病的治疗上具有潜力。
- 孙常文刘孝菊陈玉斌李校堃
- 关键词：慢性肾病磷酸盐
- 在烟草中瞬时表达人角质细胞生长因子1被引量：2
- 2011年
- 目的在烟草中瞬时表达人角质细胞生长因子1(Keratinocyte growth factor 1,KGF1),旨在寻求一种低成本﹑方便﹑大量生产rhKGF1的方法。方法以重组质粒pET3c-hKGF1为模板,通过PCR法扩增hKGF1基因片段,插入经改造的马铃薯病毒X双元表达载体pGR107中,冻融法转化感受态农杆菌GV3101,以获得的GV3101-pGR107-rhKGF1侵染烟草。以绿色荧光蛋白基因(smGFP)为报告基因,建立马铃薯X病毒(PVX)瞬时表达体系。用紫外灯连续20 d观察经GV3101-pGR107-smGFP侵染的烟草中smGFP的表达。经RT-PCR法分析烟草中rhKGF1基因mRNA的转录,SDS-PAGE﹑Western blot分析烟草中rhKGF1蛋白的表达。结果重组表达质粒pGR107-rhKGF1经PCR及测序证实构建正确;转化的农杆菌GV3101-pGR107-rhKGF1侵染的烟草中目的蛋白的表达量在第8天达最大。目的蛋白rhKGF1在烟草中获得成功表达。结论在烟草中瞬时表达了rhKGF1,为其单克隆抗体的制备及产业化奠定了基础。
- 陈宇刘孝菊薛萍龚守良李校堃
- 关键词：烟草
- 成纤维细胞生长因子23及其拮抗剂蛋白的基因克隆、表达与生物学活性研究
- 目前，成纤维细胞生长23（FGF23）作为FGFs家族中一个重要的调磷因子及某些疾病的病理因子已成为一个特别有吸引力的治疗靶标；由于FGF23的C末端71个氨基酸（即180-251位）可与全长的FGF23竞争性结合FGF...
- 刘孝菊
- 文献传递
- 成纤维细胞生长因子23蛋白原核表达及条件优化
- 2013年
- 目的制备具有生物学活性的可溶性重组人成纤维细胞生长因子23(FGF23),并探讨其最佳诱导表达条件。方法克隆FGF23和SUMO-FGF23两个cDNA序列,分别与原核表达载体pET3c与pET22b相连,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌中,对FGF23表达的最佳质粒和宿主菌组合进行筛选,并对Rosetta(DE3)/pET22b-SUMO-FGF23重组菌株的最佳诱导表达条件进行优化。结果只有pET-SUMO-FGF23的质粒和Rosetta(DE3)的组合有FGF23蛋白质表达;融合蛋白在16℃、0.4 mmol/L IPTG诱导19 h以可溶形式表达,且上清表达量占菌体总蛋白的28%。结论本研究成功获得了高表达量及可溶性的重组FGF23,最佳表达条件是16℃、0.4 mmol/L IPTG诱导表达19 h。
- 倪培刘孝菊腾春燕王春娥肖贺欣李校堃于庭
- 重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化被引量：3
- 2010年
- 目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。
- 邓林刘孝菊龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃
- 关键词：纯化
- 人表皮生长因子融合蛋白的表达及纯化工艺的优化被引量：2
- 2010年
- 探讨了在大肠杆菌中生产小分子泛素样修饰蛋白与人表皮生长因子(SUMO-hEGF)的最佳表达及纯化条件。将重组表达载体pET3c-SUMO-hEGF转化到大肠杆菌BL21(AI)中,以阿拉伯糖为诱导剂,对诱导表达参数进行优化,并进一步通过离子交换层析,Ni-NTA亲和层析及分子筛层析等进行纯化分析。结果表明:SUMO-hEGF在BL21(AI)中的最佳诱导表达温度为37℃,诱导剂阿拉伯糖的最佳浓度为5.0g/L,最佳诱导表达时间为4h,表达量约为20.2%,Western blot分析证实,纯化后的蛋白是hEGF,为进一步开发hEGF基因工程药物奠定了基础。
- 张海淼刘孝菊田海山万晓珊邓林李校堃
- 关键词：人表皮生长因子阿拉伯糖纯化
- 抗菌肽CM与血管内皮生长因子VEGF_(121)在大肠杆菌中表达及鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:构建和表达人VEGF121的基因工程菌,为肿瘤血管的靶向治疗提供实验数据。方法:通过PCR引物延伸的方法,获得SUMO-CM-VEGF121融合基因;将该融合基因与原核表达载体pET22b连接后转化至Rosetta-gami(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经DEAE阴离子交换层析、Ni-NTA和分子筛等方法进行纯化,用SUMO酶切除分子伴侣SUMO后,最终获得融合蛋白CM-VEGF121。结果:DNA测序,设计合成的SUMO-CM-VEGF121融合基因为774bp;所构建的表达菌株Rosetta-gami(DE3)/pET22b-SUMO-CM-VEGF121在20℃诱导24h可溶性最好,其可溶性表达为菌体可溶性蛋白的21%。Westernblotting检测该表达产物与人VEGF单克隆抗体具有特异性结合能力。结论:原核表达载体pET22b和Rosetta-gami宿主菌为CM-VEGF121最合适的条件,解决了其表达量低和不可溶问题。
- 王会岩尹海燕尹翌秋刘孝菊赵宏鑫秦玉侠刘敏李校堃
- 关键词：血管内皮生长因子融合蛋白纯化
- 烟草中利用植物病毒系统瞬时表达角质细胞生长因子
- 角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)又名成纤维细胞生长因子-7(fibroblast growth factor-7,FGF-7),是成纤维细胞生长因子FGFs家族成员之一,K...
- 陈宇刘孝菊李校堃
- 干细胞在延缓衰老上的应用前景
- 2020年
- 随着近些年我国居民审美意识的不断提升,对抗衰老技术的关注程度日趋增长。而干细胞作为人体内的重要组成部分,具有自我复制的独特能力,且可以分化为多种功能的细胞,成为了抗衰老技术的主要研究方向。本文根据干细胞与人体衰老之间的联系,结合抗衰老干细胞的种类,浅谈一下干细胞抗衰老的应用前景。
- 秦玉侠陈彦刘孝菊
- 关键词：干细胞延缓衰老
- 重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d23载体Tn7片段转座到Bacmid中mini-attTn7位点,得到穿梭载体Bacmid-kgf1d23,并通过脂质体法转染sf-9细胞得到杆状病毒P1。继续转染细胞扩增病毒并提高病毒滴度,蛋白表达分析从P3代病毒转染细胞开始,收集细胞超声裂解后进行纯化,MTT法检测纯化后目的蛋白生物活性。结果:昆虫偏好密码子改造的kgf1d23基因构建进转移载体pFastBac-kgf1d23和穿梭载体Bacmid-kgf1d23载体中。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在60h后开始大量表达,优化的收获蛋白时间在84～96h;利用肝素亲和层析和SP阳离子交换层析可以去除90%以上的杂蛋白。纯化的rhKGF1D23蛋白在0.3～25.0μg.L-1时,随浓度的增加HaCat细胞的促有丝分裂能力增强,在25.0μg.L-1时达到平台期。结论:重组截短型角质细胞生长因子rhKGF1D23蛋白在昆虫细胞中得到表达,保持其特有的肝素亲和特性,并具有免疫原性及细胞生物学活性。
- 薛萍朱小静刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃
- 关键词：杆状病毒系统
