刘军
- 作品数：8 被引量：107H指数：3
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项嘉兴市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 两个水稻MADS盒基因cDNA的克隆与分析被引量：2
- 2000年
- 为研究水稻MADS盒基因与形态发生的关系,采用一个MADS盒基因家族保守区域特异的引物,运用RT-PCR方法,从水稻珍汕97B的幼穗中分离和克隆了两个新的MADS盒cDNA,命名为nmads1和nmads3。基因序列分析表明,nmads1和nmads3都含有植物MADS盒基因典型的MIK区结构,其中nmads1属于MADS盒基因的GLO亚家族,nmads3属于AGL2亚家族。分子杂交实验发现,nmads1和nmads3在水稻愈伤组织分化期和幼穗期活跃表达,在营养生长阶段的苗期表达受抑制,并发现处在同一发育阶段的水稻幼穗中,核质互作雄性不育系珍汕97A比其保持系珍汕97B多出了一个特异表达的nmads1的基因产物。
- 袁自强钱晓茵刘军刘建东钱旻杨金水
- 关键词：MADS盒基因水稻CDNA克隆
- FadD9重组蛋白在活动性肺结核诊断中的价值被引量：3
- 2020年
- 目的探讨结核分枝杆菌(MTB)Fad D9重组蛋白在活动性肺结核诊断中的价值。方法制备Fad D9重组蛋白并进行鉴定,使用C57BL/6小鼠模型评估其免疫原性。以Ag85A蛋白为阳性参照抗原,检测145例活动性肺结核患者(活动性肺结核组)、38例结核患者密切接触者(MTB密切接触组)和101名体检健康者(正常对照组)血清样本中Fad D9重组蛋白的特异性抗体水平,将Fad D9重组蛋白作为抗原与58例肺结核患者、34例非肺结核患者的全血样本37℃共孵育20~24 h后,采用γ-干扰素释放试验(IGRA)检测,将检测结果与IGRA试剂盒中的标准管进行比对,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Fad D9重组蛋白诊断结核病的敏感性和特异性。结果Fad D9重组蛋白可在C57BL/6小鼠体内引起较高水平的体液免疫反应,且与阳性参照抗原Ag85A接近。活动性肺结核组抗Fad D9抗体水平高于MTB密切接触组和正常对照组(P<0.0001),MTB密切接触组与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。抗Ag85A抗体水平3组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,Fad D9重组蛋白诊断结核病的曲线下面积(AUC)为0.682,最佳临界值为0.343,敏感性为96.8%,特异性为37.5%。结论Fad D9蛋白在活动性结核病的诊断中具有一定的临床应用潜力。
- 张君丽林晨王玉臣刘军袁俐潘稚芬张鹭
- 关键词：结核分枝杆菌
- 玉米苹果酸脱氢酶基因的分离与结构分析被引量：21
- 1999年
- 以一个玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）杂种一代超亲表达的ｃＤＮＡ片段为探针，从玉米幼苗期ｃＤＮＡ文库中筛选到一个全长１２８７ｂｐ的ｃＤＮＡ克隆。序列分析表明，该ｃＤＮＡ编码细胞质苹果酸脱氢酶，推导的氨基酸序列与龙须海棠（Ｍｅｓｅｍｂｒｙａｎｔｈｅｍｕｍ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｕｍ Ｌ．）及拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）同一编码基因的氨基酸序列同源性分别为９０％和８４％。这是禾谷类作物中首次克隆的编码细胞质苹果酸脱氢酶的完整基因。
- 胡建广赵相山刘军袁自强杨金水
- 关键词：玉米苹果酸脱氢酶基因克隆杂种优势
- 结核分枝杆菌PE31抗原的免疫原性及保护效果研究被引量：1
- 2017年
- 目的选择结核分枝杆菌中受Pho PR和Lsr2调控的PE-PPE家族蛋白PE31作为研究对象,探索其免疫原性和抗结核免疫保护效果,为新型抗结核疫苗的研发提供候选抗原。方法根据PE31的氨基酸序列预测其CD4^+、CD8^+T细胞表位。在大肠杆菌和哺乳动物细胞系中分别表达其编码基因,通过Western-blotting实验验证目的蛋白表达。联合弗氏佐剂免疫C57BL/6小鼠,通过比较脾细胞抗原特异性IFN-γ、TNF-α和IL-2的分泌水平,以及小鼠血清IgG水平,评价抗原免疫原性。以DNA疫苗形式免疫BALB/c小鼠后,尾静脉感染结核分枝杆菌标准毒株H37Rv,通过比较4周后小鼠体内肺、脾载菌量评价其保护效果。结果 PE31与Ag85A携带有相同数量的T细胞表位。并且能够诱导出强于Ag85A的IFN-γ、TNF-α细胞因子分泌和相同的血清IgG反应水平。PE31免疫组小鼠肺、脾结核杆菌载量比未免疫组下降0.3~0.4log10。表现出更强的细菌清除能力和免疫保护能力。结论 PE31具有较强的免疫原性和免疫保护能力,本研究成果将为抗结核疫苗的开发提供新的候选抗原及抗原表位。
- 王玉臣陈福增黄滢睿张鹭刘军
- 关键词：结核病亚单位疫苗
- AN融合抗原制备及其加强BCG免疫效果的研究被引量：1
- 2020年
- 亚单位疫苗研究中抗原的选择对疫苗效果至关重要.本研究选取结核分枝杆菌中ESX-Ⅰ~ESX-Ⅴ分泌系统的同源蛋白EsxA,EsxC,EsxE,EsxT,EsxN构建融合蛋白AN,通过序列分析、实验动物模型评估其作为亚单位疫苗的可行性.AN抗原的一级结构中存在332个T细胞受体强结合位点,说明融合抗原AN能够提供更多的T细胞识别表位.纯化后的AN抗原免疫C57BL/6小鼠,分离小鼠脾细胞进行胞内因子染色(ICS),结果证明AN抗原能激起高于或接近Ag85A的Th1型细胞因子分泌,具有较强的免疫原性,可以作为构建亚单位疫苗的候选抗原.利用BALB/c小鼠模型评估AN对于BCG免疫的加强保护效应,发现单次AN加强免疫,可使小鼠脾脏细菌清除率增加70.2%,增强了重组BCG的保护效果.
- 高笑笑项智灏陈福增张鹭刘军
- 关键词：结核病融合抗原
- 应用抑制差减杂交法分离水稻幼穗发育早期特异表达的基因被引量：68
- 2000年
- 以水稻茎尖分生组织（ｓｈｏｏｔ ａｐｉｃａｌ ｍｅｒｉｓｔｅｍ， ＳＡＭ）为对照群体，幼穗分生组织（ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｄｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｂｒａｎｃｈ ｐｒｉｍｏｒｄｉａ， Ｐｂ／Ｓｂ）为目标群体，进行抑制差减杂交．用经过ＳＡＭ ｃＤＮＡ差减的Ｐｂ／Ｓｂ ｃＤＮＡ群体构建了一个差减文库通过差示筛选鉴定了 ４０个在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的候选克隆．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交验证，至少４０％的候选克隆代表了在Ｐｂ／Ｓｂ中特异表达或表达增强的基因，同时，相当一部分克隆为低丰度转录本．对４０个ｃＤＮＡ克隆单向测序后，与ＧｅｎＢａｎｋ中同源序列进行比较，结果表明：２个克隆为已知水稻基因；１１个克隆与已知基因的同源性为６０％～９０％；另有１８个克隆在ＧｅｎＢａｎｋ中无法查到对应的同源基因，可能代表了新基因，或是由于序列位于变异丰富的３＇端故而无法查到与其他物种基因的同源性．目前为止，已有１９个基因在ＧｅｎＢａｎｋ注册并获登录号．
- 刘军袁自强刘建东钱晓茵钱旻杨金水
- 关键词：抑制差减杂交差异表达基因水稻幼穗发育
- 2种结核分枝杆菌抗原对潜伏感染人群鉴别诊断潜力分析被引量：2
- 2016年
- 目的评价2种结核分枝杆菌(MTB)潜伏生长状态下高表达的蛋白——Rv3160c抗原、35k D抗原对MTB潜伏感染人群的血清学鉴别诊断潜力。方法纯化获得Rv3160c抗原、35k D抗原,采用C57BL/6小鼠模型评价其免疫原性。以商品化的检测抗原——早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和38k D为阳性参照,测定Rv3160c抗原、35k D抗原在20例活动性肺结核患者(活动性肺结核组)、25例MTB潜伏感染者(MTB潜伏感染组,即与活动性肺结核患者长期密切接触者)、24名健康体检者(正常对照组)血清特异性抗体反应,即检测抗Rv3160c抗体、抗35k D抗体水平。结果 Rv3160c抗原、35k D抗原均能够在实验小鼠体内引起较高水平的体液免疫反应,血清抗体滴度达到1∶25 600,接近阳性参照抗原Ag85A的水平。MTB潜伏感染组血清抗Rv3160c抗体和抗35k D抗体水平均明显高于正常对照组(P<0.01),且抗35k D抗体水平明显高于活动性肺结核组(P<0.05),但MTB潜伏感染组和活动性肺结核组之间血清抗Rv3160c抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。MTB潜伏感染组和活动性肺结核组血清抗ESAT-6抗体水平均高于正常对照组(P<0.01),而MTB潜伏感染组和活动性肺结核组之间差异无统计学意义(P>0.05)。MTB潜伏感染组血清抗38k D抗体水平明显高于活动性肺结核组和正常对照组(P<0.05),而活动性肺结核组与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Rv3160c抗原、35k D抗原在MTB潜伏感染者的血清中产生较强的抗原-抗体反应,与正常对照者的血清反应较弱;35k D抗原与活动性肺结核患者的血清反应也较弱,其血清反应模式与38k D抗原类似;Rv3160c抗原无法区分活动性肺结核患者和潜伏感染人群,其血清反应模式与ESAT-6接近。结论 Rv3160c抗原和35k D抗原对于潜伏性结核感染具有高度特异性,将有望用于MTB潜伏感染的鉴别诊断。
- 孙睿峰项智灏陈福增茹欢委麦俊涛袁俐刘军
- 关键词：结核分枝杆菌血清诊断
- 差异表达基因的分离策略被引量：15
- 1999年
- 生命活动的各个进程伴随着不同基因的选择性开启和关闭。如何有效地分离克隆各种差异表达的基因，成为分子生物学研究的一个努力方向，大量差异基因分离策略因之问世。本文扼要介绍了近年来发展的几种主要分离策略。
- 刘军杨金水
- 关键词：差异表达基因抑制差减杂交基因分离
