刘光亮
- 作品数：49 被引量：80H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- H5N1亚型禽流感病毒M2基因的原核表达及纯化被引量：1
- 2007年
- 将含缺失跨膜区M2蛋白重组质粒pGEXsM2的大肠杆菌,用终浓度为0.6 mmol/L IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白;在Western blot试验中,M2特异性单克隆抗体14C2与目的蛋白发生反应,在35 kD处有一条特异性条带,表明表达的重组M2蛋白具有免疫学活性;表达产物使用GST亲和吸附柱进行纯化,获得了大量的目的蛋白及微量的GST蛋白,使用分光光度仪确定纯化后M2蛋白的浓度约为5.6 mg/mL。本实验为进一步研究M2生物学特性、建立M2特异性抗体的间接ELISA检测方法及研制M2亚单位疫苗奠定了基础。
- 王文娟孟庆文李贺冉多良刘光亮肖一红吴东来
- 关键词：禽流感病毒纯化
- 禽流感病毒H5HA、H7HA基因共表达核酸疫苗质粒的构建及其在体外的表达被引量：7
- 2004年
- 为了获得既能对 H5亚型又能对 H7亚型 AIV攻击产生保护的核酸疫苗 ,设计构建了含有双顺反子的真核表达载体 ,用限制性内切酶从 PCIH7HA载体上切得 AIV H7HA基因的c DNA,此 c DNA含有 CMV启动子和 Poly(A)终止序列 ,使用 DNA 连接酶引入载体PCIH5HA中 ,最后获得双顺反子真核表达载体PCI-H5HA-H7HA,其中 H5HA和 H7HA基因都带有自己的 CMV启动子和 Poly(A)终止序列。选用 2 93 -T真核表达细胞系 ,用脂质体转染法导入细胞进行瞬时表达 ,转染后 48h用荧光标记的兔抗鸡 Ig G进行间接免疫荧光试验。结果表明双顺反子真核表达载体构建正确 ,且在真核表达细胞系中 H5HA和 H7HA基因都能获得表达 ,且 H5HA 基因的表达效果优于H7HA。
- 张芳芳刘光亮姜永萍陈化兰陈怀涛
- 关键词：禽流感病毒基因表达核酸疫苗质粒间接免疫荧光
- 含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测
- 为了研究禽流感病毒核蛋白在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核...
- 王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来
- 关键词：禽流感核蛋白真核表达载体血清抗体
- 文献传递
- 猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化
- 2008年
- 肖一红刘光亮童铁钢王群孟庆文吴东来
- 关键词：大肠埃希氏菌蛋白基因细胞特异性自身免疫性疾病微球SARS病毒
- 检测马白细胞介素-18双抗体夹心ELISA方法的建立被引量：5
- 2009年
- 目的:建立检测马白细胞介素-18(equine interleu-kin-18,EIL-18)的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的EIL-18的2株单克隆抗体(mAb)B1G1和S6A3纯化后,利用生物素标记试剂盒对B1G1株mAb进行标记,以重组马白细胞介素-18(rEIL-18)为捕获抗原进行ELISA检测来建立EIL-18双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为4mg/L,检测抗体的工作效价为1∶2000。建立的方法可检测马血清中的EIL-18,与猪、牛和羊血清中的IL-18不发生交叉性反应,此方法检测敏感度达到15ng/L,特异性良好。结论:成功建立了EIL-18的双抗体夹心ELISA,为马细胞免疫学研究提供了方法,也为下一步EIL-18ELISA试剂盒的商品化开发奠定了坚实基础。
- 童铁钢白宇张维军王群刘光亮徐树兰吴东来
- 关键词：单克隆抗体夹心ELISA
- 原位四聚体染色技术检测特异性CTL
- MHC-肽四聚体复合物可用于检测抗原特异性CTL,自该技术出现以来,主要结合流式细胞术应用于抗原特异性CD8+T细胞的分析研究.本文介绍一种四聚体研究的新技术--原位四聚体染色,主要包括新鲜组织、固定组织以及冰冻切片的间...
- 刘光亮吴东来
- 关键词：染色技术抗原特异性
- 文献传递
- 鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化
- 2微球蛋白(2-m)是组成MHC Ⅰ类分子复合体的轻链分子,对于MHC Ⅰ类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。本试验从来航鸡全血细胞中克隆了鸡2m全基因,利用软件预测了其信号肽序列,并构建了表达成熟2m的重...
- 刘光亮童铁钢孟庆文吴东来
- 关键词：微球蛋白基因克隆纯化
- 文献传递
- 原位四聚体染色技术检测特异性CTL
- MHC-肽四聚体复合物可用于检测抗原特异性CTL,自该技术出现以来,主要结合流式细胞术应用于抗原特异性CD8+T细胞的分析研究。本文介绍一种四聚体研究的新技术——原位四聚体染色,主要包括新鲜组织、固定组织以及冰冻切片的间...
- 刘光亮
- 关键词：染色
- 文献传递
- H5亚型禽流感病毒核蛋白基因重组质粒的构建及其在Hela细胞的瞬时表达被引量：3
- 2006年
- 采用PCR技术从重组质粒pMel-NP扩增得到了禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang-dong/1/96(H5N1)株的核蛋白(NP)基因,将其亚克隆至真核表达载体pVAX1上。将提取的pVAX-NP阳性克隆转染Hela细胞,48 h后经间接免疫荧光试验和Western-blotting检测,NP基因在Hela细胞中已成功瞬时表达。表达产物的分子质量约为57 ku,它与H5N1亚型AIV多克隆抗血清有较好的免疫反应。
- 刘光亮王群童铁钢肖一红孟庆文吴东来
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒NP基因
- 猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化
- 1996年 Altman 等首次报道将 MHC-I 类分子抗原肽和荧光染料标记连接蛋白组成的单体物通过亲和素铰链成为四聚体复合物来定量检测 HIV 特异 CTL。从此,这项技术在病毒性疾病的诊断、基础和临床研究中得到广泛...
- 肖一红刘光亮童铁钢王群孟庆文吴东来
- 关键词：克隆纯化
- 文献传递
