冯鑫
- 作品数：12 被引量：15H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 佛波酯对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素表达的激活作用
- 2014年
- 目的探讨佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)对人单核白血病细胞THP-1中颗粒溶素(granulysin,GLS)表达的激活作用。方法分别用不同浓度的PMA(130、160、180 nmol/L)诱导THP-1细胞24 h,RT-PCR法检测细胞中GLS基因mRNA的转录,筛选PMA最佳诱导浓度;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24和48 h,RT-PCR法检测GLS基因mRNA的转录,筛选最佳诱导时间;用PMA最佳诱导浓度分别诱导THP-1细胞12、24、48和72 h,Western blot法检测GLS蛋白的表达,免疫细胞化学法检测48 h时GLS蛋白的表达。结果以160 nmol/L的PMA诱导THP-1细胞24 h,细胞中GLS基因mRNA的转录水平最高;诱导48 h后可检测到GLS蛋白大量表达。结论 PMA可激活THP-1细胞中GLS的表达,本实验为后续进一步研究GLS表达的调控机制奠定了基础。
- 杨静杨春何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：佛波酯THP-1细胞颗粒溶素
- hsa-microRNA-218对颗粒溶素表达影响的探讨
- 2014年
- 目的:探讨hsa-microRNA-218(hsa-mir-218)对颗粒溶素(Granulysin,GLS)表达的影响。方法:抽提佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetatefor,PMA)激活的THP-1细胞的总RNA,逆转录后PCR扩增GLS基因,将其克隆至pDsRed-Express-C1,构建GLS表达质粒pDsRed-GLS。将pDsRed-GLS与pGenesil-mir-218(pGenesil-mir-control)共转染293T细胞,36 h后激光共聚焦显微镜观察两种质粒在细胞中的表达情况,48 h后提取细胞总RNA和蛋白,RT-PCR和Western blot检测hsa-mir-218对GLS表达的影响。结果:酶切和测序结果证实重组质粒pDsRed-GLS构建成功,且能与microRNA干扰质粒在293T细胞中共表达。与转染pGenesil-mir-control组细胞相比,Western blot结果显示转染pGenesil-mir-218组细胞GLS蛋白表达下降约50%,而GLS mRNA表达无明显变化。结论:hsa-mir-218在转录后水平干扰了GLS的表达,为进一步探讨mir-218干扰GLS表达的机制打下基础。
- 樊宇杨春张璐渝杨静何永林徐蕾冯鑫张春燕穆柳青
- 关键词：颗粒溶素T细胞RNA干扰激光共聚焦
- 重组CFP10-PPE68融合蛋白检测结核分枝杆菌感染的初步应用被引量：2
- 2013年
- 目的以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)RD1区特异性培养滤液蛋白10(culture filtrate pro-tein10,CFP10)与戊糖-5-磷酸-3-差异构象酶68(pentose-5-phosphate-3-epimerase68,PPE68)的融合蛋白CFP10-PPE68作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB抗体的间接ELISA法。方法采用亲和层析法纯化重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白;分别以3种蛋白作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB特异性抗体的间接ELISA法;采用方阵滴定法对建立的间接ELISA法的条件进行优化;并以临床诊断为金标准,对间接ELISA法的特异性、敏感性和准确性进行验证。结果纯化的重组CFP10-PPE68融合蛋白纯度约为70%。分别以重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白作为包被抗原的最佳包被浓度分别为2、4、4μg/ml,血清最佳稀释度均为1∶1 000,酶标二抗最佳稀释度均为1∶5 000。3种蛋白对肺外结核的诊断效果均优于肺结核,且重组CFP10-PPE68融合蛋白检测肺外结核的特异性、敏感性及准确性均最佳;3种蛋白诊断结核病的特异性较高,而敏感性相对较低。结论以重组CFP10-PPE68融合蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法诊断MTB感染具有较高的敏感性和特异性,特别是对难以诊断的肺外结核病的诊断有一定的参考价值。
- 董志玲杨春徐蕾何永林冯鑫王静娴张壮苗杨晓燕
- 关键词：结核分枝杆菌酶联免疫吸附测定
- 结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-PPE68融合蛋白的表达及其在结核病诊断中的初步应用
- 目的:
构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-PPE68融合基因原核表达质粒，并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。通过亲和层析法分离、纯化所表达的目的蛋白，将其作为一种特异性抗原，间接ELISA法检测临床已确诊为结核...
- 冯鑫
- 关键词：结核分枝杆菌融合蛋白间接ELISA法结核病
- 不同方法建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型的探讨被引量：7
- 2012年
- 目的用不同方法建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型,为探讨GalR蛋白对小鼠抑郁症的治疗作用打下基础。方法 C57BL/6J小鼠经体重、敞箱实验及反抗抓获实验初筛后,随机分为4组:Ⅰ.CUMS组,Ⅱ.CUMS+CORT组,Ⅲ.CORT组,Ⅳ.正常对照组。每天记录小鼠体重及摄食量。28d后进行液体消耗及强迫游泳实验测试。结果小鼠抑郁模型在第28d建立成功。Ⅱ组小鼠短期内体重迅速下降并死亡。与Ⅰ组小鼠相比,Ⅲ组小鼠液体消耗和强迫游泳实验指标改变更明显。结论成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。CUMS和CORT模型结合,小鼠不能耐受,短期内死亡。单独CORT模型造模效果要优于CUMS模型。在后续试验中,将用CORT法建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。
- 张丹杨春何永林徐蕾靳志栋张鹏冯鑫
- 关键词：抑郁症动物模型CUMSCORT
- pBudCE4.1/PPE68DNA疫苗诱导Balb/c小鼠产生Th1免疫应答被引量：2
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌PPE68 DNA疫苗,并探讨其在小鼠体内诱导的Th1免疫应答。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和复制子OriM基因亚克隆入真核表达质粒pBudCE4.1中构建穿梭质粒,并用其免疫Balb/c小鼠,于第3次免疫后2周处死小鼠,分别检测免疫小鼠血清IgG2a水平、IFN-γ和IL-12水平;特异性蛋白刺激后淋巴细胞增殖状态;小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果 PPE68 DNA疫苗免疫小鼠后血清中的IgG2a水平、IFN-γ和IL-12均有意义的提高,脾淋巴细胞增殖显著。脾肺未见明显病理改变。结论 PPE68DNA疫苗可有效诱导小鼠Th1免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定了基础。
- 王静娴徐蕾何永林张壮苗董志玲冯鑫杨春
- 关键词：结核分枝杆菌PPE68免疫应答
- PPE68基因重组卡介苗的构建及其免疫原性
- 2012年
- 目的构建携带结核分枝杆菌PPE68基因的重组卡介苗(BCG),并检测其诱导小鼠的免疫应答情况。方法将带有分枝杆菌复制子OriM的穿梭质粒pBudCE4.1/PPE68/OriM电转化入BCG中,PCR鉴定重组BCG。用鉴定正确的PPE68/OriM重组BCG免疫BALB/c小鼠,每2周免疫1次,共3次,末次免疫后2周采血,分离血清,检测血清中IgG2a、IFNγ和IL-12水平;取脾、肺,分离脾淋巴细胞,检测经特异性蛋白刺激后淋巴细胞的增殖水平;进行脾CD4+和CD8+T淋巴细胞计数,计算CD4+/CD8+比值;检测脾、肺荷菌量并观察组织病理变化。结果 PPE68/OriM重组BCG经PCR鉴定构建正确;其免疫小鼠后,可诱导小鼠血清中IgG2a、IFNγ和IL-12水平显著增加(P<0.05),脾淋巴细胞增殖显著(P<0.05),CD4+和CD8+T细胞百分比增加,CD4+/CD8+T细胞比值降低,脾、肺均无菌落生长且未见明显病理改变。结论成功构建了PPE68基因重组BCG,其免疫BALB/c小鼠能明显提高小鼠的Th1型免疫效应,有利于机体抗结核菌感染。
- 王静娴徐蕾何永林张壮苗董志玲冯鑫杨春
- 关键词：结核分枝杆菌卡介苗免疫应答
- GalR2基因的表达对小鼠抑郁症影响的初步探讨
- 2011年
- 目的建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型,探讨GalR2基因表达对小鼠抑郁症的影响。方法脂质体转染重组真核表达质粒pEGFP-GalR2至人宫颈癌细胞系Hela细胞,Western blotting检测GalR2基因在细胞内的表达。参照CUMS和CORT建模方法构建小鼠抑郁症模型。侧脑室注射脂质体包裹的pEGFP-GalR2质粒,观察GalR2基因表达对小鼠抑郁症的影响。结果通过Western blotting鉴定了GalR2基因获得表达。抑郁症模型小鼠体重增加量、摄食量、液体消耗实验中糖水消耗和糖水偏爱百分比均明显下降,纯水消耗显著提高;强迫游泳实验中挣扎时间和游泳时间缩短,不动时间延长。侧脑室注射pEGFP-GalR2后小鼠行为学改变未得到有统计学意义的结果。结论成功鉴定了GalR2基因在细胞内的表达。成功构建C57BL/6J小鼠抑郁症模型。CORT模型造模效果要优于CUMS模型。GalR2蛋白对抑郁症的影响有待后续实验进一步探讨。
- 张丹杨春何永林徐蕾靳志栋张鹏冯鑫
- 关键词：抑郁症动物模型
- 结核分枝杆菌ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1基因的原核表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATP-dependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白。方法从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中PCR扩增ClpP1基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,转化大肠埃希菌B21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约35 000,可与鼠抗His单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpP1蛋白在MTB中的生物学特性奠定了基础。
- 张春燕杨春李岱容穆柳青杨静冯鑫
- 关键词：结核分枝杆菌原核细胞
- 结核分枝杆菌CFP10-PPE68融合基因原核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌CFP10-PPE68融合基因原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,采用PCR法分别扩增CFP10和PPE68基因,基因拼接法扩增CFP10-PPE68融合基因,克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pET-32a(+)-CFP10-PPE68,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒pET-32a(+)-CFP10-PPE68经双酶切和测序证明构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量为68 630,表达量为菌体总蛋白的41.8%,主要以可溶性形式存在,且可与PPE68 rBCG免疫兔血清发生特异性反应。结论成功构建了结核分枝杆菌CFP10-PPE68融合基因原核表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了融合蛋白,为其在结核病血清学诊断中的应用奠定了基础。
- 董志玲何永林徐蕾王静娴张壮苗杨静冯鑫杨春
- 关键词：融合基因原核细胞
