冯国开
- 作品数：6 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于TAP技术的TAT-PTD相互作用膜蛋白的筛选与鉴定
- 目的:基于串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)技术的原理,利用硫酸乙酰肝素的类似物—肝素进行干预,筛选与人类Ⅰ型免疫缺陷病毒(HIV-1)的反式转录激活因子(trans-act...
- 邓鹏冯国开刘芸吴向玲姜勇
- 文献传递
- 大规模噬菌体DNA测序样品制备方法的改进与应用
- 2008年
- 目的优化大规模噬菌体DNA测序样品制备的方法,提高筛选效率。方法通过PCR扩增噬菌体环七肽库第一轮、第二轮和第三轮淘选产物中含插入目的片段噬菌体DNA,经琼脂糖凝胶电泳和DNA测序鉴定,并与经典的噬菌体DNA提取方法进行比较。结果PCR扩增法和经典法制备的噬菌体DNA的测序成功率分别为92.73%、93.75%,差异无统计学意义(P>0.05);两种方法制备的同一个噬菌体克隆的DNA经测序鉴定显示测序结果一致;第一轮、第二轮和第三轮淘选产物的噬菌体克隆经PCR扩增和电泳鉴定,发现无插入目的片段的噬菌体克隆检出率逐轮增加分别为1.04%、4.17%和22.69%(P<0.01)。结论PCR扩增含插入目的片段噬菌体DNA的方法可使大规模噬菌体筛选和DNA测序更加方便、快捷、实用,值得推广。
- 刘承武姚琦袁利华牛茂昌刘靖华杨敏冯国开姜勇
- 关键词：噬菌体展示技术DNA噬菌体聚合酶链反应
- 小鼠ATP酶β亚单位真核表达载体的构建和细胞内定位研究
- 2011年
- 目的构建小鼠ATP酶β亚单位(ATPaseβ)真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况。方法取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列,将其连接到pMD18-T载体上,然后以pMD18-ATPaseβ为模板扩增得到ATPaseβ编码序列,再将其克隆到真核表达载体pcDNA3/HA上。采用脂质体转染法转染NIH 3T3细胞及293细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果 PCR、双酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3/HA-ATPaseβ构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位于细胞质,细胞膜上也有表达,而在293细胞中只表达于细胞质。结论成功构建了带有HA标签的小鼠ATPaseβ真核表达载体,该载体能够在哺乳动物NIH 3T3及293细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究ATPaseβ的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
- 史晓兰冯国开刘爱华姜勇
- 关键词：腺苷三磷酸酶Β亚基蛋白定位
- 内毒素休克小鼠肝血管靶向性结合肽的初步研究
- 2010年
- 目的研究肽CLTTWAPAC与内毒素休克BALB/c小鼠肝血管的靶向性结合作用。方法构建pET14b-SBP和pET14b-SBP-CLTTWAPAC原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达纯化蛋白SBP和SBP-CLTTWAPAC。建立内毒素休克小鼠模型,将9只内毒素休克BALB/c小鼠随机均分为3组:①PBS对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、PBS和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);②SBP对照组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min);③SBP-CLT-TWAPAC组(经尾静脉先后注射灭活空噬菌体、SBP-CLTTWAPAC和噬菌体CLTTWAPAC,间隔5min)。小鼠左心室灌流后取肝匀浆称重,行噬菌体计数,计算各组肝噬菌体单位重量滴度。结果 PBS对照组与SBP对照组肝噬菌体单位重量滴度差异无统计学意义(435185±57824pfu/gvs468290±74106pfu/g,P>0.05),而SBP-CLTTWAPAC组肝噬菌体单位重量滴度(176059±98506pfu/g)显著降低,与两对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CLTTWAPAC可竞争性抑制噬菌体CLTTWAPAC与内毒素休克小鼠肝血管的结合,进一步证明CLTTWAPAC靶向性结合于内毒素休克小鼠肝血管。
- 冯国开邓鹏姚琦刘锐邓间开姜勇
- 关键词：噬菌体展示
- α_1-抗胰蛋白酶真核表达载体的构建及其细胞内定位
- 2009年
- 目的构建鼠α1-抗胰蛋白酶(AAT)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达及定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到AAT编码序列。然后将该编码序列克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后转染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明构建正确。转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建带HA标签的AAT真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为下一步深入研究AAT在细胞内的相关生物学功能提供了一个重要工具。
- 刘承武胡水旺陈登宇冯国开邓鹏姜勇
- 关键词：Α1-抗胰蛋白酶血凝素细胞内定位
- 内毒素休克小鼠肝脏细胞特异性结合肽作用蛋白的鉴定
- 脓毒症(sepsis)具有高患病率、高病死率、高治疗费用的特点,受到了基础医学与临床的高度关注,已成为当前生命科学领域的研究热点。流行病学分析显示,25-30%脓毒症是由于革兰阴性(G-)菌感染所引起。内毒素作为G-菌细...
- 冯国开
- 关键词：内毒素休克肝脏噬菌体展示
- 文献传递
