冯刚
- 作品数：63 被引量：177H指数：9
- 供职机构：川北医学院第二临床学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技支撑计划四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学石油与天然气工程化学工程更多>>
- 钛植入体表面钽功能涂层制备及性能表征被引量：3
- 2022年
- 背景:钛合金因其良好的生物相容性被广泛应用于临床骨科,但其作为生物惰性材料缺乏骨诱导活性,易导致植入假体松动,因此有必要对钛植入体表面进行改性来增强其成骨活性。目的:利用溶胶凝胶法在钛表面制备钽功能涂层,并对涂层的理化性质及成骨性能进行表征。方法:利用溶胶凝胶法在医用钛片表面制备钽功能涂层,采用扫描电镜及能谱分析对涂层的表面形貌及元素组成进行表征,通过接触角测试评估钛片、钽片、钽涂层的表面亲水性。将兔骨髓间充质干细胞分别接种于钛片、钽片、钽涂层上,利用扫描电镜观察材料表面细胞黏附形态,荧光染色观察材料表面细胞黏附及存活,CCK-8法检测细胞增殖活性,碱性磷酸酯酶显色及茜素红S染色评估材料表面细胞的成骨分化能力。结果与结论:(1)扫描电镜显示,涂层表面均匀分布着大小一致的纳米级颗粒,且表面涂层均一,未见裂纹产生;元素分析结果显示,钽涂层表面的元素主要为Ta、O、Ti元素;钽涂层表面的亲水性优于钛片、钽片;(2)接种12 h后的扫描电镜显示,细胞在钛片和钽片表面的黏附形态相似,呈长梭形,向周边伸出少量丝状伪足;细胞在钽涂层表面呈铺展态黏附生长,向远处伸出大量丝状伪足并与相邻细胞连接;(3)接种72 h后的荧光染色显示,细胞在钽涂层表面几乎均呈铺展态黏附生长,黏附细胞的数量多于钛片、钽片,并且钽涂层表面的活细胞数量多于钛片、钽片(P <0.05);(4)CCK-8法检测结果显示,钽涂层表面的细胞增殖速率快于钛片、钽片(P <0.05);(5)钽涂层表面细胞的碱性磷酸酶含量和钙结节形成数量均多于钛片、钽片;(6)结果表明,钽涂层修饰后的钛表面更利于骨髓间充质干细胞的黏附及成骨分化。
- 陈硕肖东琴李兴平冉斌匙峰张成栋邓丽黄南翔刘康冯刚段可
- 关键词：植入体溶胶-凝胶法成骨性能细胞黏附
- 应用AdEasy-1腺病毒载体系统构建人GDF-5基因重组腺病毒被引量：4
- 2014年
- 目的应用AdEasy-1腺病毒载体系统构建人生长分化因子-5(GDF-5)基因重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法将PCR获取的GDF-5基因插入到质粒pMD19-T中,基因测序鉴定后将目的基因克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,HindⅢ酶切鉴定。重组质粒经PmeⅠ酶切使之线性化并去磷酸化处理,电转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183,使其在细菌内发生同源重组,卡那霉素筛选,HindⅢ酶切鉴定阳性克隆,扩增重组腺病毒质粒,并转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒Ad-GDF-5,分别采用Western blot、TCID50法对Ad-GDF-5进行蛋白鉴定和滴度测定。结果经PCR扩增得到的GDF-5大小约为1.7kb,基因测序结果证实该基因与GENBANK中人GDF-5基因序列相同。pShuttle-CMV-GDF-5、pShuttle-CMV-GDF-5-AdEasy-1经HindⅢ酶切后均得到大小约为1.7kb的片段,与GDF-5大小相符。Western blot证实Ad-GDF-5感染HEK293细胞后大量表达成熟GDF-5蛋白。研究结果表明成功地构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体,并制备出5.6×109 PFU/mL的重组腺病毒。结论利用AdEasy-1腺病毒载体系统成功构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度值的重组腺病毒Ad-GDF-5,为进一步研究GDF-5的生物学功能及其相关疾病的基因治疗奠定了基础。
- 罗栩伟罗栩伟陈竹刘康韩小伟陈竹冯刚
- 关键词：腺病毒科生长分化因子-5基因治疗
- 移植同种异体脂肪干细胞对兔椎间盘退变早期的干预实验研究被引量：2
- 2019年
- 目的观察同种异体兔脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSC)在退变早期对椎间盘的修复效果。方法采用穿刺抽吸法建立兔椎间盘退行性变模型,体外培养ADSC对模型进行移植治疗。27只5月龄日本大耳白兔随机分为3组:正常对照组(NC组,n=9),ADSC移植组(ADSC组,n=9)和DMEM培养基组(DMEM组,n=9)。每只实验动物的L 3-4、L 4-5和L 5-6作为实验干预椎间盘。术后4,8,12周分别利用标准化T2加权像信号强度(%ST2WI)、病理组织学、退变分数、免疫组化染色以及Ⅱ型胶原(collagenⅡ)和蛋白聚糖(aggrecan)mRNA表达水平评价修复效果。结果术后4,8,12周,DMEM组的%ST2WI值、collagenⅡ和aggrecan的mRNA表达量均明显低于其他各组(P<0.05),NC组和ADSC组组间无明显差异;NC组和ADSC组退变分数明显低于DMEM组(P<0.05),NC组和ADSC组间无明显差异;NC组和ADSC组的collagenⅡ免疫组化均显示强阳性,而DMEM组随着时间的推移阳性逐渐减弱。结论在退变早期移植同种异体的兔ADSC能有效抑制椎间盘的退变。
- 白亦光刘康杨泽龙罗栩伟林涛肖东琴冯刚
- 关键词：脂肪干细胞椎间盘退行性变干细胞移植
- BMG／PBST双相组织工程纤维环的体外构建被引量：2
- 2016年
- 目的探讨骨基质明胶（bone matrix gelatin，BMG）／聚对苯二甲酸-共-丁二酸丁二醇酯[poly（butylenesucci—nate-co-terephthalate），PBST]双相组织工程纤维环的构建。方法PBST通过静电纺丝的方式制备成薄膜，检测其吸水率、孔隙率。取兔纤维环细胞进行体外培养，并通过番红“O”、Ⅱ型胶原免疫组化染色进行细胞鉴定；鉴定后的细胞种植到PBST薄膜支架上，通过扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况。以BMG作为外纤维环支架，以PBST纺丝作为内纤维环支架，构建新型双相组织工程纤维环支架。将细胞种植到双相支架上，体外培养3、7、21d后，分析双相组织工程纤维环的生物学特性及力学性能。结果PBST纺丝薄膜的孔隙率为61．83％±7．33％，吸水率为297．34％±57．13％。纤维环细胞经番红“O”、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定呈阳性，表现出纤维环细胞的特征。经鉴定后的细胞种植在薄膜支架上培养3、7d后，扫描电镜显示细胞在薄膜支架上黏附并增殖；将纤维环细胞接种到BMG／PBST双相支架上，培养3、7、21d后，HE染色显示细胞随培养时间的增加逐渐渗透到薄膜支架内部；番红“O”、Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性，表明细胞在支架上分泌出大量糖胺聚糖和Ⅱ型胶原等纤维环细胞特有的细胞外基质。种植细胞后的双相支架体外培养21d后，支架的弹性模量[（17．56±1．47）MPa]明显较无细胞的双相支架的弹性模量[（14．83±1．02）MPa]增加。结论初步构建的BMG／PBST双相组织工程纤维环具有良好的细胞相容性和力学性能，为进一步构建完整组织工程椎间盘奠定了基础。
- 袁德超陈竹向小聪刘康冯刚
- 关键词：明胶
- 体外共培养诱导脂肪干细胞向软骨表型细胞分化及鉴定的实验研究被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨脂肪干细胞经共培养诱导为软骨表型细胞的可行性,为软骨组织工程种子来源提供的新途径。方法:分离培养日本大耳白兔的脂肪干细胞及肋软骨细胞,将脂肪干细胞与软骨细胞分层共培养及脂肪干细胞单独培养于6孔板中2周。通过safranin-O染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫化学染色对诱导后细胞表型进行鉴定,RT-PCR检测诱导后Ⅱ型胶原基因表达情况。结果:共培养诱导2周后的脂肪干细safranin-O染色和甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫化学染色呈阳性,Ⅱ型胶原基因表达接近于正常软骨细胞。结论:脂肪干细胞经与软骨细胞共培养后,可以诱导为软骨表型细胞。
- 蒋婷杨泽龙刘康陈竹白亦光李凌云白倩冯刚
- 关键词：脂肪干细胞软骨细胞共培养关节退变
- 兔骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定被引量：12
- 2013年
- 目的:探讨一种简便可行的兔骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)体外分离培养方法。方法:通过全骨髓贴壁分离法体外分离、扩增兔骨髓间充质干细胞,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态;并向软骨细胞诱导分化,采用番红快绿染色和甲苯胺蓝染色鉴定。结果:经全骨髓贴壁法得到的骨髓间充质干细胞性状稳定,为纺锤状,呈克隆样生长;成软骨诱导培养的骨髓间充质干细胞,表现出软骨细胞的形态特征和生物学特征。结论:采用全骨髓贴壁分离法操作简便,是培养兔骨髓间充质干细胞的理想方案,在适当的条件下BMSCs能多向分化。
- 刘康白亦光陈竹韩小伟杨泽龙赵明宋桂芹冯刚
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 诱导性多潜能干细胞滋养层制备条件的实验研究
- 2011年
- 目的制备小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEFs)滋养层,用于诱导性多潜能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs)的体外培养。方法取13.5～15.5天胎龄的胎鼠,采用组织消化法分离原代培养成纤维细胞,对MEFs的生长形态、生长曲线进行观察。采用10μg/ml丝裂霉素C预处理P2～P3代MEFs 2～3h制备出细胞滋养层,在该滋养层上进行iPSCs培养,观察iPSCs的集落生成情况,并行碱性磷酸酶细胞染色。结果 MEFs经丝裂霉素C预处理后细胞既不增殖,也不会死亡,仍保持分泌多种生长因子的能力。iPSCs在MEFs滋养层上生长良好,类似于胚胎干细胞一样能形成"鸟巢"状集落,并可维持iPSCs正常形态,抑制其分化而不影响活力,碱性磷酸酶染色阳性。结论利用诱导性多潜能干细胞滋养层方法制备的细胞滋养层,能有效支持iPSCs的生长,为进一步开展iPSCs的研究提供了理论依据和实验基础。
- 罗栩伟罗栩伟刘康陈桂秀陈竹刘康宋桂芹
- 关键词：诱导性多潜能干细胞胚胎成纤维细胞滋养层
- SATB1在胃癌细胞SGC-7901中表达的研究被引量：5
- 2014年
- 目的通过检测胃癌细胞株SGC-7901和胃黏膜上皮细胞GES-1中SATB1 mRNA和蛋白的表达水平,探讨其在胃癌发展和转移中的作用。方法利用荧光定量PCR、RT-PCR检测胃癌细胞株SGC-7901和胃黏膜上皮细胞GES-1中SATB1 mRNA的转录水平表达,通过免疫荧光染色检测SATB1在两种细胞中的表达差异。结果 SATB1 mRNA在SGC-7901中的表达程度显著高于GES-1细胞,免疫荧光染色显示SATB1在胃癌细胞株的胞浆和胞核内均有分布,呈强阳性染色,而在GES-1细胞中无表达。结论 SATB1在胃癌细胞株SGC-7901中mRNA和蛋白水平均呈现高表达,提示SATB1的表达水平可能与胃癌发生发展密切相关,有望成为判断胃癌预后的一个指标。
- 宋桂芹刘康白亦光周玉川冯刚
- 关键词：胃癌SATB1免疫荧光SPECIAL
- 早期股骨头坏死的组织工程学治疗研究进展被引量：5
- 2019年
- 股骨头坏死是好发于中青年人群的常见骨科疾病,目前尚无理想的治疗方法。针对早期股骨头坏死,如何尽可能维持自体股骨头形态、功能正常,防止塌陷已成为临床急需解决的难题。近年来,随着组织工程学进步与发展,利用组织工程技术预防股骨头塌陷,促进坏死股骨头的修复与再生备受关注。本文针对早期股骨头坏死的组织工程学治疗手段研究进展做一综述。
- 赵桥肖东琴杨飞冯刚
- 关键词：股骨头坏死种子细胞
- GDF5过表达与ZIP8基因沉默双重功能慢病毒载体的构建及鉴定
- 2017年
- 目的构建过表达生长分化因子5(GDF5)与基因沉默锌离子转运蛋白(ZIP8)的双重功能慢病毒载体,检测其在诱导多能干细胞中的表达效率并建立稳定细胞系,为骨关节炎的细胞治疗提供种子细胞奠定相关研究基础。方法以人的GDF5cDNA为模板合成GDF5全长序列,设计合成靶向小鼠ZIP8的shRNA序列,依次分别与双酶切的载体pRNAU6.2相连,构建双重功能慢病毒载体。将重组质粒及阴性对照质粒分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染iPSCs细胞,实时定量PCR和免疫印迹分别检测GDF5蛋白和ZIP8mRNA的过表达与沉默效果。经G418筛选获得稳定高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的诱导多能干细胞(iPSCs)稳定细胞株。结果成功构建了双重功能慢病毒载体pRNAU6.2-CMV-hGDF5-mshZIP8-U6,经感染和G418筛选获得稳定表达高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的iPSCs稳定细胞株。结论成功构建的pRNAU6.2-hGDF5-mshZIP8-U6慢病毒载体,可有效上调GDF5与下调ZIP8的蛋白和mRNA的表达,成功建立稳定高效表达GDF5与基因沉默ZIP8的iPSCs细胞株,为骨关节炎的细胞治疗建立可靠的细胞平台。
- 向小聪邓丽冯刚肖东琴刘康陈竹杨飞
- 关键词：骨关节炎慢病毒IPSCS
